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DSG [二（N-琥珀酰亚胺基）戊二醛] CAS 79642-50-5-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
DSG [二（N-琥珀酰亚胺基）戊二醛] CAS 79642-50-5价格 1095
产品规格

25 mg

产品货号

DSG [二（N-琥珀酰亚胺基）戊二醛] CAS 79642-50-5

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 326.26 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存
产品概述

DSG [二（N-琥珀酰亚胺基）戊二醛]是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，DSG是二琥珀酰亚胺基戊二酸酯，一种简单的同双功能交联剂，基于5-（7.7埃）间隔臂两端的胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯基。它用于交联具有胺部分的分子。DSG是细胞膜可渗透的。它用于ChIP分析以确定DNA-蛋白质结合相互作用。DSG交联剂必须溶解在有机溶剂（如DMSO或DMF）中，然后加入到水性交联反应中。我们的内部研究表明，DSG交联的肽结合物具有更好的稳定性，并倾向于产生高特异性的抗体。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的DSG [二（N-琥珀酰亚胺基）戊二醛]。 

实验方案

样品实验方案

1.制备含胺蛋白质的缀合缓冲液，蛋白质-NH 2 （缓冲液A）：磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.2）或pH值为7.2至8.0的其他无胺缓冲液可用于此。

注意：避免在缀合过程中含有伯胺（如Tris或甘氨酸）和巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

 

2.制备含巯基蛋白质的缀合缓冲液，蛋白质-SH（缓冲液B）：pH为6.5-7.5的不含巯基的缓冲液可用于此。

注1：在缀合过程中避免使用含有巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

注2：加入1-5mM EDTA有助于螯合二价金属，从而减少含巯基蛋白质中的二硫化物形成。

 

3.准备脱盐柱，将改性蛋白与过量交联剂和反应副产物分离。

 

4.在其缀合缓冲液A和缓冲液B中制备含胺蛋白质（蛋白质-NH2）和含巯基蛋白质（蛋白质-SH）溶液。

 

5.制备蛋白质1-NH 2 -SMCC（或SMCC Plus）缀合物：将适量的SMCC（或SMCC Plus）加入到缓冲液A中的含胺蛋白质溶液中。蛋白质-NH 2的浓度 决定SMCC（或SMCC Plus）摩尔过量使用。SMCC（或SMCC Plus）摩尔过量的建议体积如下，但佳比例必须使用目标蛋白质通过实验确定：

  • 蛋白质样品<1 mg / mL使用40-80倍摩尔过量。
  • 1-4 mg / mL的蛋白质样品使用20倍摩尔过量。
  • 5-10 mg / mL的蛋白质样品使用5至10倍摩尔过量。

 

6.将上述反应混合物在室温下孵育30-60分钟或在4℃孵育2-4小时。

注1：为了在完成前停止缀合反应，加入含有还原半胱氨酸的缓冲液，其浓度比Protein-SH的巯基浓度高几倍。

注2：可以通过电泳分离和随后的蛋白质染色来估计缀合效率。

 

7.使用用共轭缓冲液A平衡的脱盐柱除去多余的SMCC（或SMCC Plus）。

 

8.将含硫醇（蛋白-SH）和脱盐的含胺蛋白（蛋白-NH 2）SMCC（或SMCC Plus）缀合物混合并混合，摩尔比对应于终缀合物所需的摩尔比，并与亲属一致两种蛋白质上存在的巯基和活化胺的数量。

注意：与马来酰亚胺部分反应的分子必须具有游离（还原的）巯基。对于蛋白质，在室温下使用5mM TCEP还原二硫键30分钟，然后通过合适的脱盐柱两次。请注意，蛋白质（例如抗体）可能会通过完全还原其二硫键而失活。可以用2-巯基乙胺·HCl（2-MEA）实现IgG中铰链区二硫键的选择性还原。可以使用N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯（SATA）或2-亚氨基硫杂环戊烷·盐酸盐（Traut’s Reagent）将巯基化合物添加到分子中，后者可以修饰伯胺。

 

参考文献

N-glycan targeted gene delivery to the dendritic cell SIGN receptor
Authors: Kevin Anderson, Christian Fernandez, Kevin G Rice
Journal: Bioconjugate chemistry (2010): 1479–1485

AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit

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碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）是一种普遍存在的二聚金属酶类，由Suzuki等在1907年首先发现的。生理作用是非特异性水解磷酸单酯键，分子量大小为120kDa，最适pH值为8.6-10.3，因此称为碱性磷酸酶。AP广泛运用于酶联（ELISA）、Western Bloting以及免疫组化技术等，作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。碱性磷酸酶比活性高，稳定，所以经常被用于抗体或其他蛋白质的标记，而不会影响偶联蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有较低的价格和较高的活性，已成为最常用的用于AP偶联的交联试剂。这种使用戊二醛的AP偶联标记方法已经被广泛认可，但是也存在一定的缺陷，比如在标记时对戊二醛和抗体间的比率非常敏感，不合适的配AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit比可能会导致较低的溶解性和酶活力；同时在标记过程中，也很难避免不同活力的混合物出现，因此在偶联时，待偶联反应发生后需要进行淬灭，纯化并去除多余的交联物；另外，对于待偶联物不同的制备来源和分子量大小，都会对最终的交联反应产生较大的影响。马来酰亚胺(maleimide)也被用于交联反应，其糖基部分可以与巯基反应以形成稳定的偶联物，但是需要提前对偶联抗体或蛋白进行二硫键还原处理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶联标记试剂盒内提供了一个比上述方法更优秀更快捷的AP偶联方案。其原AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit理是采用双偶联的技术分别对AP和抗体进行交联，如左上图所示。琥珀酰亚胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate (SFB)的醛基与抗体蛋白结合，同时Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone(SANH)的肼基偶联上AP，这样通过醛基与肼基之间形成稳定的腙键而实现抗体蛋白与AP的偶联。

作为即用型的组分，SureLINK™AP偶联蛋白/抗体试剂盒能在90分钟制备完成标记HRP的抗体或蛋白。制备好的AP标记的抗体或蛋白能在4℃稳定保存至少半年。试剂盒内包括SureLINK Modified AP（干粉）、AP激活及偶联缓冲液、SFB以及AP储存缓冲液。每毫克经SFB修饰的AP可结合0.1-0.5mg抗体或蛋白，特别适合于AP单克隆抗体的制备。经SureLINK AP Conjugation Kits 偶联试剂盒标记的抗体，结合相应的显色或化学发光底物，可应用于ELISA、WB及免疫组化等方法的免疫学检测及定量分析。

SureLINK™ AP标记抗体/蛋白试剂盒具有以下优点：

  • 方便快速：两步反应（见右），近三个小时（20分钟手动工作）就可以完成整个交联反应；
  • 活性强：可以标记从0.05mg到1.5mg范围的抗体（蛋白）；
  • 通用性：可以用于下游各种免疫检测实验，比如ELISA, Western blotting和免疫组化
产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
SureLINK AP Conjugation Kit 85-00-01 3 x 0.1 mg rxn.
85-00-02 5 x 0.5 mg rxn.
产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
SureLINK Modified AP 85-01-01 0.2mg包装
85-01-02 1.0mg包装

除了完整的AP标记抗体/蛋白试剂盒，还有单独组分的SureLINK Modified AP（干粉状的激活AP）提供。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。 KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对于蛋白标记以及蛋白偶联，KPL有HRP及AP标记及偶联试剂盒，还有专门用于两个蛋白质之间的偶联试剂盒提供。另外还有多种化学发光和显色底物及相关产品，以及全系列针对不同种属的各种标记的现货二抗。如果您对KPL的产品感兴趣，请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料，或者问询您所感兴趣的产品类型。