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抗原修复技术技巧有哪些？

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抗原修复技术技巧有哪些？

对于特定抗体，我应该使用哪种抗原修复方法

一些公司测试其抗体的免疫组织化学应用，并将在数据表中包含建议的 抗原修复方法（注意：一些建议的方法不是最佳的）。如果以上都没有给您明确的答案，则需要进行测试。

 

如何使用各种抗原修复方法对新抗体进行测试

最初，您可能想要测试 HIER 中的两种方法，例如 柠檬酸盐缓冲液 (pH 6)和 Tris-EDTA (pH 9)，以及 PIER 中的一种或两种方法，例如 蛋白酶 K和/或 胰蛋白酶。这应该会给您一个很好的机会获得特定抗体的最佳抗体。

 

我用各种抗原修复方法测试了我的抗体 ，但仍然没有结果

该抗体可能不适合福尔马林固定、石蜡包埋的组织（某些抗体仅适用于冰冻切片），或者该抗体有问题（过期或损坏），您可能需要改用其他抗体。

 

在热诱导表位修复 (HIER) 方法中，哪一种比较好

柠檬酸盐缓冲液（pH 6）法是常用的方法之一。一些研究表明 Tris-EDTA (pH 9)或 Tris-HCl (pH 10) 更佳。测试可能是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

 

使用HIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 修复液温度应在95℃左右。

(2)孵育时间至少10分钟，一般20分钟左右。

(3) 修复液的pH值取决于您所使用的溶液。

 

在蛋白水解酶诱导表位修复 (PIER) 方法中，哪一种比较好

蛋白酶 K似乎是常用的一种。浓度、孵育时间和温度可能是需要考虑的更重要的因素。同样，测试是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

 

使用PIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 酶的浓度通常为 0.05-0.1%，具体取决于组织和固定的类型。

(2)孵育时间可为5-30分钟，常用10-15分钟。

(3)孵化温度通常为37 ℃。

 

冰冻切片是否需要进行抗原修复：新鲜冰冻切片的免疫染色不需要进行抗原修复。因为抗原修复是破坏福尔马林固定形成的交联，将新鲜冰冻切片切片并用冰冷的丙酮固定5-10分钟。

炭疽保护抗原(PA)171E

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炭疽保护抗原(PA)

简要描述：炭疽保护抗原(PA)，产品编号：171E。品牌：list labs。
Anthrax Protective Antigen(PA)
产品仅用于研究目的，不得用于人体或作为诊断剂。

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品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

炭疽保护抗原(PA)，产品编号：171E。品牌：list labs。

炭疽保护抗原(PA)，Anthrax Protective Antigen(PA)

产品描述：

炭疽保护抗原(PA)171E

纯度

>95%
炭疽保护抗原(PA)171E

形式

冻干粉
炭疽保护抗原(PA)171E

储存温度

2-8°C
炭疽保护抗原(PA)171E

内毒素水平

<1 欧盟/毫克

上海金畔生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌

  6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式。

chondrex 过敏抗原检测试剂盒

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chondrex 过敏抗原检测试剂盒

简要描述：chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

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品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,环保,化工,生物产业,制药

chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

过敏性疾病和症状是由对通常无害的抗原（例如花粉、宠物皮屑或食物）的主动免疫反应引起的。具体来说，食物过敏和哮喘是两种常见的儿童炎症性疾病，近年来已开始影响更多的人。  

为了分析卵清蛋白 (OVA)、麦醇溶蛋白、屋尘螨 (HDM) 过敏原 (Der p 10) 和花生 Ara h6 在人类过敏或过敏动物模型中的致病作用，Chondrex, Inc. 提供了 OVA（目录号 6032） 、麦醇溶蛋白（货号#6035）、HDM（Der p 10）（货号#6031）和peant Ara h6（货号#6042）检测 ELISA 试剂盒。此外，还提供抗OVA、抗麦醇溶蛋白、抗HDM和抗Ara h6单克隆抗体和抗体ELISA试剂盒。

产品 目录 ＃
麦醇溶蛋白检测试剂盒 6035
屋尘螨 (HDM) Der p 10 检测套件 6031
屋尘螨 (HDM) Der p1 检测套件 6044
卵清蛋白 (OVA) 检测试剂盒 6032
花生 Ara h2 检测试剂盒 6043
花生 Ara h6 检测试剂盒 6042

麦醇溶蛋白（Gliadin）

食物过敏是对大多数其他人可以毫无问题地耐受的食物或食物成分的免疫反应。小麦是世界上消费广泛的粮食。麦醇溶蛋白是小麦蛋白之一，根据其不同的一级结构分为 α-、β-、γ- 和 ω- 麦醇溶蛋白，分子量范围为 28 – 55 kDa，在激活先天性和适应性免疫方面发挥着关键作用反应，导致免疫介导的肠道损伤，例如肠道通透性高和固有层炎症细胞浸润。因此，麦醇溶蛋白可以引发乳糜泻（CD），这是一种遗传易感个体的自身免疫性疾病。小鼠 CD 模型已广泛用于研究麦醇溶蛋白的发病机制及其免疫反应 (1-4)。

HDM

哮喘是一种慢性炎症性疾病，影响全球 3 亿各个年龄段的人（5）。它是由接触尘螨、宠物皮屑、花粉或霉菌等过敏原引起的，其特点是可逆性气道阻塞和支气管痉挛。屋尘螨(HDM) 过敏原是人类最重要的室内过敏原 (6)。大约 10% 对 HDM 过敏的哮喘患者表现出针对 Der p10 的 IgE 抗体，Der p10 是来自尘螨、屋尘螨的第 10 组过敏原（原肌球蛋白）的 32 kDa 蛋白质。类似结构的原肌球蛋白存在于无脊椎动物中，如甲壳类动物（虾、龙虾、小龙虾和螃蟹）、蛛形纲动物（屋尘螨）、昆虫（蟑螂）和软体动物。原肌球蛋白是一种热稳定蛋白，致敏可能会导致对过敏源的严重反应。因此，Der p10 抗原可能在多种过敏原交叉诱导过敏反应中发挥作用 (7)。

OVA

鸡蛋过敏是第二常见的食物过敏（第一是牛奶过敏），有 0.5% 至 2.5% 的幼儿患有这种过敏。鸡蛋过敏是由鸡蛋蛋白引起的免疫反应，被定义为过敏原特异性IgE抗体介导的过敏反应，也称为I型食物过敏。在鸡蛋蛋白中，卵清蛋白 (OVA) 是已确定的过敏蛋白之一 (8)。 OVA 是一种 42.7 kDa 的糖蛋白，由三个不同的亚类 A1、A2 和 A3 组成，每个分子分别包含两个、一个和不含磷酸基团。 OVA 是一种广泛用于诱导实验动物过敏反应的抗原 (5,9,10)。

Peanut Ara h6

对花生的立即过敏反应是一种 IgE 介导的食物过敏，多年来一直是一个主要的公共卫生问题，特别是在花生过敏可能持续到成年的西方国家。对于过敏患者，目前避免仍然是可行的选择 (11)。已鉴定出十一种潜在重要的花生过敏原。 Ara h1、Ara h2、Ara h3 和 Ara h6 已被一定为主要的花生过敏原。 Ara h2 和 Ara h6 是两种高度相关的 2S 白蛋白，属于种子储存蛋白，特别有助于过敏反应的发生 (12)。 Ara h2 含有十个独立的 IgE 结合线性表位。两种亚型，Ara h 2.01 和 Ara h 2.02，在 SDS-PAGE 上分别被鉴定为 17 和 19 kDa 双联体。较大的亚型包含 12 个额外氨基酸，包括强 IgE 结合序列 DPYSPS 的重复，可以结合更多的 IgE 抗体 (13, 14)。 Ara h6 可以成为验证无花生食品的有用分析目标。该应用也不仅限于食品检测，有趣的是，血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。有关小鼠花生提取物诱导过敏模型的更多详细信息，请参阅 Chondrex, Inc. 的血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。有关小鼠花生提取物诱导过敏模型的更多详细信息，请参阅 Chondrex, Inc. 的血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。

chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

抗原肽的设计和应用

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抗原肽的设计和应用

肽可以被定义为更大的功能蛋白质的片段。它们通常被设计成模拟特定的生物学作用，例如与互补抗体的功能性结合位点反应的能力。这种特性被称为抗原性，产生的分子通常被称为抗原性肽。这些怎么样合成肽设计的？以及如何将它们用于产生新的抗体疗法？

产生免疫性的对抗抗原肽，有什么区别？

抗原性是指抗原与抗体的功能结合位点相互作用的能力，也称为副表位。免疫原性是指分子引发体液和/或细胞免疫反应的能力。抗原决定簇(抗体)和抗原决定簇(抗原)之间的相互作用是免疫原性和抗原性的根本驱动力。然而，重要的是要注意，尽管所有的免疫原性肽都具有抗原性，但并非所有的抗原性肽都具有免疫原性。

抗原性肽往往比免疫原性肽短，保留了与抗原决定簇相互作用的能力，但不能引发免疫反应。它们不能引发这种反应是因为它们的结构短且呈线性，有时是因为它们与宿主蛋白的序列相似。

尽管免疫原性和抗原性肽的大多数应用重叠，但仍有一些区分的理由。例如，免疫原性肽本质上更难设计和生产，因为它们不仅需要具有抗原性，还需要被施用它们的生物体识别为外来的。

使抗原性肽具有免疫原性可以通过以下方法实现与载体蛋白或病毒样蛋白融合。这些策略已成功地应用于生产肽疫苗或者抗体生成应用(杂交瘤或多克隆抗体生产).

利用免疫原性肽产生的抗体通常被称为抗肽抗体。它们可以与原始的完整蛋白质发生交叉反应，这使得它们对于分离、监测和定位蛋白质表达非常有价值。在基础水平上，肽抗体也可用于表征蛋白质天然构象中的表位。

非免疫原性抗原肽，由于其易于生产，仍可用于其他应用。例如，它们可以作为配体使用展示技术(例如噬菌体展示)筛选高度多样化的抗体库。此外，它们可以作为试剂或标准用于蛋白质-蛋白质相互作用研究或多重免疫测定。

肽的结构与抗原性的关系

就肽的抗原性而言，结构是一个至关重要的特性。在不同的免疫测定中，相同的多肽序列可能导致不同的抗原反应。这些巨大差异的原因源于肽本身的构型。

例如，溶液中的游离肽通常是线性的并暴露，而吸附到树脂或其他固体噬菌体上的肽仅部分暴露。后者有很大一部分表面不能结合，这限制了它们的抗原性。

相反，由于载体诱导的构象变化，与载体结合的肽甚至可能比游离肽更具抗原性。这些肽通常呈现能被抗体更好识别的三维结构。

用于成功增加抗原性的另一种策略是环化。许多专家认为环肽是理想的治疗药物。环化可以增加肽的稳定性，使其更能抵抗蛋白水解切割。此外，研究表明，它增加了膜的渗透性，使它们更好地瞄准传统上“不可拖动”的疾病标记。

抗原肽和模拟表位

抗原性肽或表位通常分为连续或不连续，这取决于参与与副表位相互作用的氨基酸残基是否彼此相邻。事实上，大多数天然表位是不连续的，由序列中不相邻的残基组成，但由于同源完整蛋白的构象而变得邻近。

然而，这种分类很少是直截了当的。事实上，即使在连续区域内，也不是每个残基都与副表位接触，这些不相互作用的残基通常可以被任何其他氨基酸取代，而不会损害肽的抗原性。此外，不连续肽由被非反应性区域分隔的多个连续区域组成。没有高质量的晶体学数据，很难根据表位-表位相互作用对肽进行分类。

抗体的多重特异性通常会产生另一种抗原肽——模拟表位。模拟表位在结构上与表位相似，它们引发与表位相似的免疫反应，但在序列上有显著差异。

这些肽通常通过筛选组合肽库或通过噬菌体展示进行生物淘选来鉴定。连续表位和不连续表位都可以具有与原始蛋白质几乎没有相似性的模拟表位。这种现象可以用模拟表位关键区域存在相似的原子团来解释。此外，单个抗体包含许多不重叠或仅部分重叠的表位，每个表位能够结合相似或不同的表位。

模拟表位具有多种应用，包括功能和结构研究、过敏原特异性免疫疗法(其中有害的表位被结构相似的模拟表位取代)、疫苗和诊断学等。

多重抗原肽(map)简介

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多重抗原肽(map)简介

肽是小的柔性分子，易于合成、修饰或排列成不同的构型。研究人员利用天然同源蛋白质的自然复杂性和三维结构，创造了第一个合成肽树枝状聚合物在70年代末。今天，这些多种抗原肽(map)服务于各种应用，包括疫苗、诊断和智能递送系统。

多种抗原肽的结构和组成

多重抗原肽(MAPs)是高度分支的、树枝状的和由连接到单个核心的线性肽链组成的抗原结构。虽然任何氨基酸残基都可以作为核心，但研究发现赖氨酸(Lys)残基仍然是最灵活的，对各种应用最有用。

当开发用于细胞内递送应用的多种抗原肽时，富含精氨酸(Arg)的树枝状聚合物可以代替赖氨酸。同样，聚谷氨酸和聚脯氨酸核被报道为智能药物传递系统的有前途的载体。这些系统包含一种比病毒载体安全得多的替代物。

树枝状聚合物MAP结构的优点是它们的高抗原性和免疫原性，足以完成通常保留给载体蛋白作为免疫反应的强触发物的作用。

多种抗原肽的生产

多种抗原性肽可以通过固相肽合成经由两种主要策略来制备:会聚或发散合成。顾名思义，在发散策略中，从核心到分支逐步生成地图。相比之下，聚合合成需要分别产生分支(或树枝状大分子),然后组装成完整的树枝状大分子。

每种策略都有其优点和局限性。例如，当处理大分子时，发散合成会变得很麻烦。由于这个原因，这种策略优选用于合成更小且同质的多种抗原性肽，例如用于药物和基因递送的那些。相比之下，只有当应用趋同合成时，才能生产高度分支和多样的肽。

虽然分别生产和纯化每个树枝状分子的过程使合成更加复杂，但它也确保了最终产品的高质量和准确性。这个过程也有利于合成具有不同类型分支的多种抗原肽。

多种抗原肽的主要应用概述

多种抗原肽的主要应用包括:

  • 药物和基因传递

  • 抗病毒剂

  • 疫苗–MAPs可作为抗传染病(细菌、病毒甚至寄生虫)疫苗的蛋白模拟物，其中多抗原反应可显著增强病原体的清除

  • 生物传感器或诊断试剂–在特异性和安全性方面，map分别优于非分支肽或无活性病毒，使其适用于检测低特异性抗体，如在初次免疫反应中产生的抗体

多抗原肽疫苗系统

多种抗原肽可以携带不同的抗原结合到一个单一的核心。这一特性显著增加了它们的免疫原性，使它们即使在没有载体蛋白的情况下也能引发强烈的免疫反应。

目前有两种生产基于图谱的疫苗的主要策略:

  • 添加功能组件–T细胞表位、细胞穿透肽和亲脂性分子是一些功能性成分的例子，它们可以提高抗原的递送能力或增强T细胞依赖性B细胞的活化，从而导致持久和高度特异性的体液应答

  • 添加抗原展示成分–已知自组装肽、金纳米粒子或其他非肽树突有助于更好地暴露抗原，从而导致免疫系统更快地将这些分子识别为外来分子

虽然这两种策略对于提高肽疫苗的免疫原性同样有用，但第二种策略可能需要几个合成步骤。这些额外的步骤增加了生产时间和成本，尤其是当使用金纳米粒子时。引入具有成本效益的纳米材料将大大增加开发肽疫苗抗原展示成分的可行性，并扩大其生产过程。

作为高度特异性诊断试剂的多种抗原肽

虽然易于合成，但线性肽通常具有较差的包被效率和有限的反应性，这使得将它们集成到诊断应用中具有挑战性。相比之下，map的多聚体性质使其易于固定在表面上，这在诸如ELISA的测定中是非常令人垂涎的性质。此外，固定化图谱不太可能改变其复杂的三维结构，从而更容易保持其特异性和反应性。

研究一致表明，设计用于在血清诊断测试中检测病原体如HIV的图谱对抗病毒抗体的存在明显比线性肽更敏感。这种高灵敏度允许在任何给定的测试中使用明显较低量的反应物来检测病原体。据报道，多种抗原肽的使用允许快速鉴别诊断，特别是当使用不同图谱的混合物时。

Glycotope抗原抗体供应

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Glycotope抗原抗体供应

简要描述：Glycotope抗原抗体供应：上海金畔生物供应Glycotope产品上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品，*，欲购从速（敬请咨询）

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品牌 Glycotope 供货周期 两周
应用领域 环保,化工,生物产业,能源

Glycotope抗原抗体供应

上海金畔生物供应Glycotope产品上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品，*，欲购从速（敬请咨询）

Glycotope 是一家生物技术公司，利用专有技术平台开发*的肿瘤特异性单克隆抗体。我们将糖生物学方面的专业知识和抗体开发方面的专业知识相结合，以推进基于抗体的（免疫）肿瘤疗法。

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公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。Glycotope抗原抗体供应

COLCOM抗体抗原供应

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COLCOM抗体抗原供应

简要描述：COLCOM化学定制：硫醇、PEG、生物素、胍、天冬氨酸、琥珀酸、烷基、（多）糖等。
调整全局电荷（正、负、中性）。
加载肽、药物、配体、抗体等。
使用荧光团跟踪和定位。COLCOM抗体抗原供应

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品牌 COLCOM/法国 供货周期 两周
应用领域 环保,化工,生物产业,能源

COLCOM抗体抗原供应

上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品货号现货供应，*，欲购从速（敬请咨询）产品目录（略），COLCOM的纳米技术在世界范围内真正具有吸引力，主要用于生物应用，特别是在健康领域：靶向药物递送、基因治疗、组织工程等。我们的专业知识和*的技术来实施 DGL 的各种可能性。 由于其高密度的游离胺官能团，相当于每代赖氨酸单元，DGL 可*或部分官能化，具体取决于您的规格：

COLCOM化学定制：硫醇、PEG、生物su、胍、天冬氨酸、琥珀酸、烷基、（多）糖等。

调整全局电荷（正、负、中性）。

加载肽、药物、配体、抗体等。

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在不同的塑料材料（微珠、板……）上共价接枝。

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热烈庆祝博百欧P2实验室投入使用，重组抗原项目将陆续开展！

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热烈庆祝博百欧P2实验室投入使用，重组抗原项目将陆续开展！

武汉博百欧生物科技有限公司（ProBio）是一家专业从事体外诊断试剂核心原料自主研发和生产的高新技术企业，其自主研发生产的近20种天然自身免疫抗原产品已经过市场的检验，成为国内自身免疫疾病诊断试剂的首选原料，受到了广大IVD企业用户的一致认可与好评。2021年新春伊始，博百欧用于重组抗原研发和生产的P2实验室正式投入使用，并且建立了一系列成熟高效的蛋白表达平台，包括昆虫细胞、大肠杆菌等，重组抗原项目正在紧锣密鼓地开展。不久之后，博百欧的重组抗原产品会陆续上市，敬请期待！

热烈庆祝博百欧P2实验室投入使用，重组抗原项目将陆续开展！

博百欧目前专注于自身免疫系统疾病抗原的研发和生产，品种涵盖系统性红斑狼疮，类风湿关节炎、干燥综合征、硬皮病、皮肌炎、血管炎、抗磷脂综合征、自免性肝病、自免性肾病、自免性甲状腺及胃肠道疾病等的诊断。公司现已完成了近20种天然抗原的研发和批量生产（详见下图），产品具备高纯度、高稳定性、高活性、高特异性、低批间差等特点，经多方验证证明我们产品的质量与进口同类产品一致，部分天然抗原效价优于进口对照产品。

热烈庆祝博百欧P2实验室投入使用，重组抗原项目将陆续开展！

热烈庆祝博百欧P2实验室投入使用，重组抗原项目将陆续开展！

武汉博百欧生物科技有限公司（ProBio）坐落于华中地区较大的国家级生物产业基地——武汉光谷生物城，是一家专业从事体外诊断试剂核心原料研发与生产的国家高新技术企业。公司由海外归国及国内资深技术专家团队领衔创办，在天然抗原提纯领域具备强大的科研能力及核心技术。公司目前已申报多项国家发明专利，填补了国产自身免疫天然抗原产品的空白。博百欧始终致力于为广大客户提供高质量的产品和更加全面及时的技术支持与服务，同时还将通过持续研发来不断推出新的抗原、抗体产品，以在体外诊断试剂核心原料领域打破我国市场被进口原料垄断的被动局面。

上海金畔生物科技有限公司是武汉博百欧中国区一级代理，为客户提供一站式体外诊断产品服务。如果您对上述产品感兴趣，欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或者登陆网站www.jinpanbio.cn咨询订购。

ATLAS scFV Constructs/full sets

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为了丰富蛋白质组学资源，Source BioScience研究出ATLAS scFV Constructs文库。该抗体文库针对小鼠的代表280个基因的404个抗原，这些抗原在 E.coli 或者哺乳动物表达体系中产生，大部分基因是细胞膜表面受体基因。载体构建时引入tri-FLAG 标签、二聚细菌酶、碱性磷酸酶序列，二聚化增加了抗原结合的亲和力，同时增加了用于检测的酶标签。22 个独特克隆可选择每个抗原。抗体的表现特征是通过特异性检测和序列测定，此外，很多的scFvs主要用于组织芯片的免疫组化分析。

Source Bioscience (Geneservice)与全球多个科研机构（如NIH、NKI、Sanger等）建立合作关系，拥有全球较大的cDNA、基因组、噬菌体展示、microRNA、siRNA、shRNA与MGC收藏库，涉及物种包括人、小鼠、大鼠、牛，以及各种模式动物如线虫、斑马鱼、果蝇、原鸡、爪蟾等，产品达1600多万种。(Tomlinson I + J)是Source Bioscience提供的较为成熟的一个文库，除此之外，还有优于此文库的DAb library，以及ATLAS scFV library。

更多产品可点击 Source Bioscience查询具体信息。

上海金畔生物科技有限公司成为美国Source Bioscience中国地区一级代理，双方携手为国内科研工作者提供物种齐全的克隆及文库，欢迎您来电咨询和申请。