细胞库实践综合指南

细胞培养的有效管理对于保持其在研究和治疗应用中的完整性至关重要。细胞系的连续或长期培养会导致各种并发症，例如:

• 微生物污染:

  开放培养容易受到各种微生物感染，这些微生物会改变细胞行为和生存能力。

• 特征变化:

  关键的细胞特征，如抗原表达或抗体产生，可能会随着时间的推移而丢失。

• 遗传变异:

  基因组不稳定性可能发生在以核型不稳定而闻名的细胞系中，从而导致不可靠的实验结果。

• 寿命限制:

  某些类型的细胞在进入衰老和停止增殖之前分裂次数有限。

• 交叉污染风险:

  长期培养增加了一个细胞系污染另一个细胞系的风险，从而导致错误的数据。

• 资源密集度:

  长期培养需要更多的消耗品和劳动力，大大增加了成本。

细胞库的战略方法

细胞库系统是减轻上述风险的战略方法。推荐的系统是主小区银行系统，包括以下步骤:

1. 初始隔离:

   新获得的细胞培养物应在严格的检疫条件下隔离和处理，以防止实验室污染。

2. Token Stock Establishment:

   初始培养扩增后，应冷冻保存少量安瓿瓶（3-5瓶）作为应急备用的象征性储备。

3. 主细胞库形成:

   从代币储备安瓿瓶扩大培养物，以建立由大量安瓿瓶组成的主细胞库（10-20个或更多，根据计划使用情况而定）。

4. 严格的质量控制:

   主细胞库的一个子集经历了全面的质量控制测试，其中包括评估细胞活力，确认不存在微生物污染物，并可能进行病毒和真实性测试。

5. 工作细胞库的开发:

   然后使用主细胞库的一部分创建工作细胞库，这是积极研究和应用的主要来源。

详细的质量控制协议

质量控制是维护细胞库的关键部分。它包括:

• 生存力和计数测试:

  确保细胞存活且数量充足。

• 微生物筛选:

  定期检测细菌、真菌和支原体以防止细胞培养受损。

• 认证程序:

  通过DNA分析等方法确认细胞系的身份。

存储和使用建议

正确的储存条件如下:

• 专用存储设施:

  利用专门为储存细胞库设计的设施，如液氮罐或电冰柜，以防止交叉污染并确保长期生存能力。

一致性和质量保证:

• 一致的细胞材料:

  细胞库系统确保实验中使用的所有材料都来自一致的来源。

• 受控通道数:

  通过使用在可控传代次数范围内的细胞，实验可变性被最小化。

• 适时文化实践:

  仅在必要时培养细胞有助于保持细胞系的原始特性，并降低与保持连续培养相关的成本。

金纳米粒子产品选择指南

根据您的具体应用选择金纳米颗粒产品

银纳米粒子产品选择指南

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Cytodiagnostics 是一家生物技术公司，总部位于加拿大安大略省伯灵顿和美国俄克拉荷马州塔尔萨。公司重点是为国际生命科学和材料科学市场提供和开发纳米技术衍生产品和服务，并且已经这样做了 15 年以上。Cytodiagnostics 还拥有一家联营公司CytoGroup，专门从事侧流和垂直流测定以及 ELISA。产品和开发服务均可用。我们的生命科学产品组合包含专为体外和体内研究及检测开发量身定制的产品和服务，包括以下产品线：

珠子选择指南

对于细胞破碎建议:

大小 

当湿法珠磨时细菌，使用直径为0.1毫米的玻璃珠。 

当湿法珠磨时酵母/真菌，使用直径为0.5毫米的玻璃珠或氧化锆/二氧化硅珠。 

当湿法珠磨时软组织（如肝脏、大脑、肌肉），使用直径为1.0毫米的玻璃珠或氧化锆/二氧化硅珠。当湿磨组织时，样品量超过几十毫克时，应先预切碎成横截面小于1毫米的碎片，然后再进行研磨。 

湿磨时坚韧的组织（如结缔组织、皮肤或“非木质”植物材料），首先预切碎或低温粉碎，并使用直径为2.0毫米的氧化锆珠。 

使用时尤其是坚韧或纤维组织，使用上面建议的相同尺寸的珠子，但选择更致密的珠子材料。例如，使用氧化锆-二氧化硅珠破碎孢子，或使用三个2.3毫米的铬钢珠提取坚韧的纤维植物材料，如单子叶植物的叶子。

一磅重的瓶子里有多少颗珠子？

铬钢珠:  

6.23毫米直径~430 

3.2毫米直径~3300 

2.3毫米直径~7900  

玻璃念珠:乘以3.2；氧化锆-硅珠:乘以2.1；氧化锆珠:乘以1.4

密度

· 玻璃珠子的密度为2.5克/立方厘米，是用于“打珠”的最常见的珠子介质。

· 氧化锆/氧化硅珠子的密度为3.7克/立方厘米（比玻璃密度高50%——对孢子和大多数组织都有好处）。

· 碳化硅尖锐颗粒（不是珠子）的密度为3.2克/立方厘米（由于颗粒具有锋利的切割边缘，因此在坚韧的组织样本上可能会工作得更快。它们优于较便宜的氧化锆/二氧化硅珠的优势正在研究中。但请参见以下布雷因的评论。

· 石榴石（一种铁铝硅酸盐，尖锐的颗粒）的密度为4.1克/立方厘米。像致密、边缘锋利的SiC颗粒一样，它可以加速坚韧组织的溶解。与SiC尖锐颗粒不同，石榴石颗粒在搅拌过程中会碎裂。当对软组织或含有细菌的粪便和土壤样品进行均质化时，这种特性会很有用。不需要混合珠子大小。从半充满2毫米石榴石颗粒的微孔开始，样品迅速分散。与此同时，打珠产生了，原地，小得多的石榴石碎片可以有效地破坏微生物。

· 氧化锆密度为5.5克/立方厘米（比玻璃密度高100%）-这种用于坚韧组织的陶瓷珠具有化学惰性，不易破碎。

· 铬钢和不锈钢密度为7.9克/立方厘米。这些重珠子通常用于干磨叶子和种子。根据珠子的大小，放置1到5个特殊的钢珠增强型2毫升聚丙烯微孔管或者2毫升不锈钢微型量具。当与钢珠一起使用时，普通的螺旋盖聚丙烯微阀可能会破裂或泄漏。铬钢珠通常是不锈钢珠的良好替代品。虽然不锈钢珠因其耐腐蚀性而经常被选用，但铬钢珠并不昂贵…事实上，它们足够便宜，可以用作“一次性用品”，从而消除了清洁和交叉污染的担忧。一个警告是:最终，铬钢珠与水介质接触会生锈。应立即将它们从细胞裂解物中去除。订购铬钢珠时，BioSpec提供了一个小磁铁，使这项工作变得轻松。

· 碳化钨密度为14.9克/立方厘米。虽然密度很高，但这种珠子通常不用于生物制备，因为它会使匀浆看起来“脏”。高重力离心将澄清匀浆，但这很耗时。上面列出的其他高密度介质通常也能做得很好。

珠子的其他用途

· 酵母和细菌的快速简便接种.在固体营养培养基中加入十几个直径为6.3毫米的无菌玻璃珠。使用侧向运动摇动平板（或一叠平板），使添加的酵母和细菌悬浮液均匀分布在平板表面。在接种体渗透到培养基凝胶中后，可以通过翻转平板并将珠子从盖子中倒出来倒出珠子。

· 增加组织培养生长的表面积用直径为6.3毫米的玻璃珠包装滚筒瓶、试管或小瓶。在这种应用中，珠粒应紧密包装，以防止珠粒在滚动或摇动过程中移动。类似地，当细胞在不激动的培养瓶中，通过添加一层直径为0.1 mm的珠子，可以更快地达到汇合，并提高细胞密度。

· 创造一个生物反应器 通过用玻璃珠填充柱并接种选择的表面粘附微生物或细胞。

· 保持透析管垂直 在透析过程中通过在密封前加入一些大玻璃珠或大理石。

· 纳米技术。将坚硬或易碎的颗粒研磨至亚微米尺寸。一篇简短的评论“高科技球磨机推动纳米技术的进步”包含了使用Retsch对纳米颗粒进行珠磨研磨的实用信息E-max™珠磨机MiniBeadbeater系列珠磨机将这种应用扩展到处理少量（《0.5克）贵重材料。

· 用于智能手机显微镜附件的镜头。可见

· 更换水在商业实验室浴池中铝珠.  无需擦拭湿试管，无需试管翻倒，无需支架、浮子或砝码。BioSpec产品的“微小泪珠”铝珠可为试管提供热传递性能。

· 来源于与基质消化酶一起孵育的动物组织的活单细胞产量提高.探索塑料微珠的新应用。替换繁琐的“手工研磨组织碎片通过用适当的酶消化组织的细胞外基质而被溶解。

· Faster QuEchERS technique：使这一广受欢迎的方案更快地从植物、动物组织和食品中提取和分析小有机物（杀虫剂、除草剂、药物）。通过在提取管中加入一些直径为2 -3 mm的玻璃珠并涡旋，将样品水合和均质化的时间缩短一半。或者，更好的方法是通过在迷你搅拌器中均质化多个提取管来提高通量。

细菌保存指南：冷藏、冷冻和冷冻干燥

在原种培养物、突变菌株和基因工程变体之间，任何一个实验室可以积累的单个细菌培养物的数量可能很多。事实上，在设计一个质粒的过程中产生的变异数量可能是惊人的。大多数实验室都会保留所有这些和其他变化，因为你永远不知道明天可能需要什么。因此，保存所有这些细菌培养物和遗传变异是需要深思熟虑的事情。 

加盖试管中的细菌培养物处于封闭环境中。尽管培养物开始时可能是健康的，但随着时间的推移，活细胞的数量将减少到零。保存培养物的目的是降低死亡率，以便在重新进行培养物时，一些细胞仍然存活并可用于培养。细胞死亡的原因可能有很多，但在每种情况下都是基于细胞及其环境的固有化学性质。如果有害的化学反应可以减慢或停止，那么整个培养物将在更长的时间内保持活力。   

有两种基本方法可以减缓细菌培养物中有害反应的速度。第一个是降低温度，从而降低所有化学反应的速率。这可以使用冰箱、机械冷冻机和液氮冷冻机来完成。第二种选择是从培养物中去除水，这个过程可能很棘手，并且涉及使用冻干机升华水。   

以下是保存细菌的主要选择的简要讨论。报告了每个选项的优点和缺点。 

冷藏

细菌在 4°C 下可以短暂存活。对于每天或每周使用的菌株，在琼脂斜面或平板上生长的培养物可以储存在冰箱中，前提是已采取预防措施以避免污染。应使用标准技术制备培养物，然后在储存前密封。对于倾斜，我们建议使用螺旋盖管。对于培养皿上的培养物，需要用封口膜密封培养皿。密封板不仅有助于防止霉菌潜入板中，而且还能减缓琼脂的干燥速度。对于超过一周或两周的情况，培养物可以以刺的形式储存在小平底螺旋盖小瓶中。在该技术中，小瓶中充满少量琼脂培养基（例如1ml）并灭菌。然后用无菌针将细菌引入固化的琼脂中。将培养物用松盖孵育过夜，然后用紧盖保存在 4°C 下。储存在刺棒中的培养物更能抵抗干燥和污染，但它们会比冷冻储存更快地失去活力。刺伤可以保持活力的时间长度取决于应变。一些手册声称刺针可以使用一年，但除非经过测试，否则做出这种假设是不明智的。刺伤可以保持活力的时间长度取决于应变。一些手册声称刺针可以使用一年，但除非经过测试，否则做出这种假设是不明智的。刺伤可以保持活力的时间长度取决于应变。一些手册声称刺针可以使用一年，但除非经过测试，否则做出这种假设是不明智的。 

冷冻

冷冻是储存细菌的好方法。一般来说，储存温度越低，培养物保留活细胞的时间越长。冷冻柜可分为三类：实验室冷冻柜、超低温冷冻柜和低温冷冻柜。储存在冰箱中的细菌（和其他细胞）面临的问题是冰晶。冰会因局部盐浓度增加导致脱水而损害细胞。当水转化为冰时，溶质积聚在残留的游离水中，这种高浓度的溶质会使生物分子变性。冰也会使细胞膜破裂，尽管这个问题通常与缺乏细胞壁的细胞有关，例如培养的动物细胞。为了减轻冷冻的负面影响，甘油经常被用作冷冻保护剂。许多鱼类和昆虫都会产生甘油，通过降低细胞的冰点、增强过冷以及防止结冰来抵御寒冷的温度。对于细菌，添加甘油至终浓度 15% 将有助于保持细胞在所有冷冻条件下存活。以下是每个冷冻机类别的一些具体信息。 

实验室冷冻柜可以将温度降低至 -20 至 -40°C。这些是单级系统（一台压缩机），通常称为通用冷冻机。细菌可以在通用冰箱中保存中等时间，例如1年。最好使用没有无霜温度循环的冰箱，因为这会对细胞和其他温度敏感的生物分子造成严重破坏。通用冰箱价格便宜，在大多数实验室都有，因此它们很容易用于储存培养物。缺点是它们的温度不够低，无法长期储存。 

超低温冰箱是两级系统（两个压缩机，每个压缩机具有不同的制冷剂），可降至 -86°C 左右。超低温冰箱非常普遍，但其中的空间有时可能有限且竞争激烈。超低温冰箱的购买、运行和维护成本也高得多。好处是，储存在 -80°C 下的细胞往往可以保持存活数年。超低温冰箱产生的较低温度大大减少了培养物内的化学反应。然而，冷冻细胞中仍然发生分子运动，因此培养物的活力将会下降。定期监测培养物以评估其生存能力非常重要。   

低温冷冻柜非常冷，依靠液氮或专门的机械系统来运行。对于生物样品，低温储存应低于-130°C。在此温度下，水的分子运动停止，细胞被困在玻璃状基质中。储存在低温冰箱中的细菌可以保持其活力多年。在我们的实验室中，细菌和酵母培养物已在 -140°C 下保存 15 年，活力没有明显丧失。与冷冻干燥相比，在低温冰箱中储存细胞是有效且简单的长期储存方法。其缺点是成本以及库存对停电、机械故障和液氮交付失败的潜在脆弱性。此外，管子切勿存放在浸没液氮的罐中。螺旋盖管泄漏，会将氮气和污染物一起吸入管中。液氮气相冷冻机将有效地避免这个问题，但这些冷冻机非常昂贵（高达1万美元）并且需要大量液氮。另一种选择是机械低温冷冻机，温度可低至 -150°C，但购买成本也非常昂贵（约 2 万美元）。两台低温冷冻机的运行费用每月为数百美元。但这些冷冻机非常昂贵（高达 1 万美元）并且需要大量液氮。另一种选择是机械低温冷冻机，温度可低至 -150°C，但购买成本也非常昂贵（约 2 万美元）。两台低温冷冻机的运行费用每月为数百美元。但这些冷冻机非常昂贵（高达 1 万美元）并且需要大量液氮。另一种选择是机械低温冷冻机，温度可低至 -150°C，但购买成本也非常昂贵（约 2 万美元）。两台低温冷冻机的运行费用每月为数百美元。   

冷冻干燥

在水系统（例如活细胞）中，水不仅充当酶促反应的介质，而且还充当自发的负面反应（例如自由基形成）。除去水会停止酶促反应和非酶促反应。冷冻干燥是去除这种水的一种方法。通过冷冻干燥可以非常有效地保存许多细菌。通过将细胞冷冻在含有冻干保护剂（通常是蔗糖）的介质中，然后使用真空吸出水（升华），可以有效保存细胞。这种方法很费力，需要专门的设备，但它的优点是可以产生不受停电和空液氮罐影响的原种培养物。此外，如果培养物定期运送到其他实验室，冻干培养物不需要特殊处理。冷冻干燥的缺点是并非所有培养物都以相同的方式反应，因此需要进行一些实验来优化每种菌株的工艺。对于任何认真生产和维护培养物保藏的实验室，冷冻干燥应作为主要的保存方法。 

浸油选择指南

浸油选择指南

蛋白质沉淀技术指南

蛋白质沉淀：指南

蛋白质沉淀是一种用于将样品中的蛋白质与其他物质分离的方法。该过程涉及向样品中添加沉淀剂，例如硫酸铵或三氯yi酸 (TCA)，这会导致蛋白质变得不溶并形成沉淀物或固体，从而可以从样品中分离出来。蛋白质沉淀是生物化学和分子生物学中广泛使用的技术，可用于纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品。

什么是蛋白质沉淀？

蛋白质沉淀是通过添加沉淀剂将蛋白质与样品中的其他物质分离的过程。沉淀剂使蛋白质变得不溶并形成沉淀物，然后可以将其从样品中分离出来。该技术在生物化学和分子生物学中用于多种目的，包括纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品。

蛋白质沉淀中常用的沉淀剂是硫酸铵和三氯yi酸 (TCA)。这些物质导致蛋白质变得不溶，从而使它们能够从样品中分离出来。硫酸铵是一种常用于沉淀蛋白质的盐，而 TCA 是一种有机酸，可用于相同目的。

蛋白质沉淀如何发挥作用？

蛋白质沉淀通过向样品中添加沉淀剂来进行。沉淀剂使蛋白质变得不溶，从而使它们从样品中分离出来。然后收集沉淀物并可以进一步纯化或浓缩。

蛋白质沉淀中常用的沉淀剂是硫酸铵和三氯yi酸 (TCA)。硫酸铵是一种无机盐，通常用于沉淀蛋白质，而 TCA 是一种有机酸，可用于相同目的。

蛋白质沉淀中使用的沉淀剂的量取决于样品的类型和所需的结果。还可以调整沉淀剂的用量以针对特定蛋白质。例如，如果样品含有多种蛋白质，则可以调整沉淀剂的量以针对一种或多种特定蛋白质。

蛋白质沉淀过程可用于纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品。它也常用于制备蛋白质以供进一步分析，例如凝胶电泳或质谱分析。

蛋白质沉淀的好处

蛋白质沉淀是生物化学和分子生物学中广泛使用的技术。这是一种简单且经济高效的方法，用于将样品中的蛋白质与其他物质分离。此外，该过程还可用于纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品。

蛋白质沉淀过程也可用于制备蛋白质以供进一步分析。这对于需要分析蛋白质的研究人员来说是有益的，因为可以在分析之前浓缩和纯化蛋白质。

蛋白质沉淀的局限性

尽管蛋白质沉淀是将蛋白质与样品中其他物质分离的简单且经济有效的方法，但该技术存在一些限制。

蛋白质沉淀的主要局限性之一是它并不适合所有类型的蛋白质。例如，热不稳定的蛋白质或易于聚集的蛋白质可能不适合蛋白质沉淀。此外，含有疏水区域的蛋白质可能不适合该过程，因为这些区域可能不会被沉淀剂沉淀。

蛋白质沉淀的另一个限制是它并不适合所有类型的样品。如果样品含有大量污染物，沉淀剂可能无法将所需蛋白质与污染物分离。此外，如果样品含有高浓度的盐或其他物质，沉淀剂可能无法从样品中分离蛋白质。

结论

蛋白质沉淀是生物化学和分子生物学中广泛使用的技术。这是一种简单且经济高效的方法，用于将样品中的蛋白质与其他物质分离。该过程可用于纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品，以及制备用于进一步分析的蛋白质。

尽管该技术有很多优点，但蛋白质沉淀也有一些限制。它并不适合所有类型的蛋白质，也不适合所有类型的样品。此外，必须仔细调整该过程中使用的沉淀剂的量，以针对特定的蛋白质或污染物。

尽管有其局限性，蛋白质沉淀仍然是生物化学和分子生物学中广泛使用的技术。这是一种简单且经济高效的方法，用于将样品中的蛋白质与其他物质分离。该过程可用于纯化蛋白质、去除污染物或浓缩样品，以及制备用于进一步分析的蛋白质。

Axispharm 实验室可以执行所有样品处理程序，包括蛋白质沉淀、固相萃取和液液萃取。

聚乙二醇化试剂选择指南

聚乙二醇化是在聚乙二醇聚合物和底物分子（包括分子、大分子、颗粒和表面）之间形成共价键的化学过程。由于不同底物活性位点的差异，不同官能团的聚乙二醇化需要不同的聚乙二醇试剂。下面列出了文献中报道的一些常用的聚乙二醇化示例。

1. 胺的聚乙二醇化和N端PEG的接枝：与生物大分子的氨基反应的PEG试剂
 

2.羧基的聚

乙二醇化 PEG试剂在偶联剂如DCC(N,N'-二环己基碳二亚胺)和EDIC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，盐酸盐)存在下与羧酸反应。
 

3. 硫醇基团的聚乙二醇化：基于硫醇的聚乙二醇化是生物分子的游离硫醇，例如半胱氨酸

4. 羟基的聚乙二醇化 
 

5.点击化学的聚乙二醇化
 

6. 表面聚乙二醇化
 

7. 聚合的聚乙二醇化
 

8. 可逆聚乙二醇化

免责声明：以上信息仅作为聚乙二醇化试剂选择的一般指导。具体的PEG化接枝工艺请参考文献并自行判断。

电导率仪操作与维护指南

便携式溶解氧测定仪的操作指南

JPBJ-608型雷磁便携式溶解氧测定仪，可用于自来水水源监测、水产养殖场、环保、污水处理厂、饮料行业及科研单位等部门对水体溶解氧的测定。现说明JPBJ-608的使用方法。