由于环境因素和细胞内的正常代谢过程造成的DNA损伤，每个细胞每天都会发生1,000到1,000,000个。虽然这些只占人类基因组约60亿个碱基中的一小部分，但如果关键基因损伤未及时修复，可能会阻碍细胞的正常生理功能，进而增加癌变可能。彗星实验，或称单细胞凝胶电泳（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一种测量单个细胞DNA损伤的常用技术。其原理很简单，即在电泳场中，将受损细胞DNA（包含片段和链断裂）与完整的DNA分离，通过显微镜可观察到损伤细胞呈现出典型的彗星状尾巴，然后通过测量计算彗尾大小对比出细胞DNA损伤的程度。因为彗星实验的特点，该方法几乎被用来评估任何类型的真核细胞的 DNA 修复能力，包括双、单链断裂的不同的 DNA 损伤情况。是一种能快速、大通量检测真核细胞DNA损伤进而判别遗传毒性的技术。

彗星实验结果图

彗星实验原理虽简单，但操作繁琐，需要丰富的实验经验和技巧，尤其常常出现的“脱胶”问题，困扰了许多科研人员。除此之外，有时为了跑出完美的“彗星”图案放在paper里，还需要重复做许多次实验，费时费力。为了解决上述问题，我们推荐CellBiolabs的OxiSelectTMComet Assay Kit即彗星实验试剂盒来检测细胞的DNA损伤。该试剂盒不仅能让彗星实验化繁为简，还有两种不同规格（3孔和96孔）的细胞电泳凝胶板供选择，让少量样本和大量样本的DNA损伤检测通通轻松hold住。用该试剂盒做彗星实验流程如下图。

除了操作简便，OxiSelectTMComet Assay Kit还有以下优点：

1)      适用于各种DNA损伤检测，是一款非常好用的DNA损伤检测筛选工具；

2)      试剂盒中的载玻片经过特殊处理以粘附低熔点琼脂糖，避免“脱胶”问题出现；

3)      采用特殊的DNA荧光染料，能有效降低背景干扰，更加方便读取实验结果。

彗星实验试剂盒信息：

为了满足客户更多样的实验需求，彗星实验试剂盒内特殊处理电泳载玻片还可以单独购买，详情如下：

产品部分发表文献：

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DNA损伤-由于环境因素或者细胞内正常的代谢会导致每天每个细胞内1000-1000000个分子发生损伤。当然，这不过是人类基因组中60亿正常基因的微不足道的组成部分。但是，如果损伤是发生在很关键的基因上面的时候，那么就有可能造成所在细胞不能正常的执行生理功能，严重的话，有可能会诱发癌症的发生。

彗星检测或者称为单细胞凝胶电泳试验- single cell gel electrophoresis assay（SCGE）是一种用来检测单细胞内DNA损伤情况的检验技术。在电泳试验中，受损的蜂窝状的DNA(包含有断裂的片段和碎片)会和未受损的DNA分子区分开来。一种类似于“彗星尾巴”的现象就会出现在显微镜下。DNA受损范围可以通过观察彗尾来进行评估，当然，我们也可以通过相关的分析软件来进行评估。

1988年Singh等科学家建立了碱性彗星实验用以对DNA对损伤程度做出评估,之后又有实验人员对Singh等建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。用超净工作台上的紫外消毒灯（可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC波段范围）作为DNA损伤的诱导因子，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度。

Cell Biolab公司的OxiSelect™ Comet Assay是一种通过彗星分析快速灵敏检测DNA损伤的试剂盒系统。首先我们将细胞与融化的琼脂充分混合后涂抹到试剂盒中的OxiSelect™ Comet Slide上面，之后这种植入的细胞要用裂解缓冲液和碱性溶液进行处理，这样会使DNA松弛与产生变性。最后，通过水平电泳将完好的DNA与有损伤的DNA分开，之后将样本用DNA染料进行染色，然后在倒置荧光显微镜下观察。在显微镜下我们观察到受损的DNA是有彗尾产生的。如下图所示Cell Biolabs公司彗星检测操作的一个典型图示过程：

【试验准备】

试剂盒内提供彗星分析用的Slide盖片、OxiSelect™彗星琼脂凝胶、Vista DNA绿色染料、裂解缓冲液等，首先按照Protocal配制其他常规试剂并做预处理。

如需要将OxiSelect™彗星琼脂凝胶装入瓶中，在90-95ºC的条件下水浴20分钟到琼脂凝胶呈液态，然后将琼脂凝胶放到37度的水浴锅中备用。而Vista DNA绿色染料则需要用提供的TE缓冲液稀释为1X的溶液，储存在4度条件下备用，可储存3周，需要避光保存。

另外对于电泳液的选择，需要根据试验的需要和灵敏度来选择合适的电泳液，TBE适合用于检测细胞的凋亡和彗尾的长度分析，TBE电泳能够检测单链和双链DNA的破裂，有时候也能检测到AP的位置。而碱性电泳液能提高检测灵敏度，不但微小的DNA破裂能检测到，甚至大多数的AP位置和碱性的不稳定DNA加合物也能检测出来。具体的选择和配置详见Protocal。

【试验步骤】

【试验结果】

图为：Etoposide Treatment of Jurkat Cells，左边的图是没处理过的细胞，右边的是处理过的细胞，碱性电泳条件为33 V/300 mA 15分钟。由上图可见明显的彗尾，也就是DNA损伤状态。

【结果分析】（定量化分析非必须）

您也将试验图片进行定量化分析。DNA损伤的结果衡量是用衡量“慧头”与“彗尾”的位置来进行的，尾部瞬间与尾部的DNA百分比含量是用来分析结果的重要参数，样本中至少应该分析50-100个细胞，在样本中，尾部瞬间图应该在DNA损伤的图中被标注出来，这样DNA的损伤可以与DNA的遗传物质迁移进行对比，然后来计算结果。

彗尾DNA的含量%=彗尾DNA的光密度/细胞DNA的光密度

彗尾位移可以用以下方法来进行测量：
a) Olive彗尾位移=彗尾的DNA% X 彗尾的位移长度
b) 彗尾的位移面积=彗尾的DNA% X 彗尾长度

现在在也开发了好多彗星试验分析的商业软件。例如LACAAS 来自于Loats Associates, Inc.) 和Comet Assay IV 来自于Perceptive Instruments。

Cell Biolabs的OxiSelect™ Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)试剂盒提供多种样式供您选择，有3孔板（货号：STA-350/351/351-5）和96孔板（货号：STA-355/355-5）不同样式。其中OxiSelect™ Comet Assay Kit中，包含彗星分析载玻片、彗星分析用琼脂糖以及其它试剂；另外Cell Biolabs根绝您的实验要求，还单独提供彗星分析载玻片，也根据3孔板样式和96孔板样式分为多种样式（货号：STA-352/353/353-5/SAT-356/STA-356-5）。每种彗星分析样式均有多种包装供您选择。另外，还提供单独的彗星分析阳性和阴性细胞作为您的试验对照（货号：STA-354）。如果您对以上产品感兴趣，请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

DNA作为细胞生命活动最重要的遗传物质，保持其分子结构的完整性和稳定性对于细胞的存活和正常生理功能的发挥具有重要意义。包括电离辐射、化疗药物及细胞代谢产物在内的多种外源和内源性因素都能引起不同形式的DNA损伤，其中DNA双链断裂(DNA double-strand breaks,DSBs)作为最严重的DNA损伤形式,使细胞正常生命活动的维持乃至生存都受到了严重威胁。同时,细胞也建立了一套复杂而精确的调控机制来应对这些损伤,包括激活细胞周期检查点(checkpoint)、启动修复系统及诱导细胞凋亡等。

针对DNA/RNA损伤的检测，上海金畔生物科技有限公司向您推荐Cell BioLabs完整的DNA/RNA氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Oxidative DNA / RNA Damage ELISA Kits（8-OHdG or 8-OHG Quantitation）提供了快速高效检测核酸中8-OHG或8-OHdG含量的实验方案；OxiSelect™ Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)则为您提供多种选择的彗星分析产品；针对DNA损伤中的AP位点检测，Cell Biolabs的OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)则使用经典的ARP检测方案；DNA双链断裂分析为您提供了快捷的DSB分析试剂。

细胞在电离辐射或其他因素作用下直接诱导或是通过复制压力诱导形成的双链断裂 (DSBs)，以及细胞自身调控的程序性DSBs和逆转录病毒转染细胞过程中产生的DSBs均可诱导H2AX的磷酸化和簇集。DNA发生双链断裂后最早反应之一是位于断裂点附近的组蛋白H2AX的C末端第139位丝氨酸残基被快速磷酸化形成γ-H2AX。磷酸化的γ-H2AX快速转导DNA损伤信号，导致下游分子磷酸化的激活，引发一系列的生物级联反应和和细胞学反应。γ-H2AX是迄今所研究的最重要的DNA损伤感应分子，也成为目前国内外研究细胞DNA损伤应激反应的热点之一。

Cell Biolabs的OxiSelect™ DNA Double Strand Break Assay（DNA双链断裂分析试剂盒）（货号：STA-321）采用免疫学方法，使用DNA双链断裂的标志物γ-H2AX抗体检测DNA损伤后其表达情况。试剂盒内提供Anti-Phospho-Histone H2A.X (Ser 139) Antibody (100X)一抗以相应二抗，并有DSB诱导物作为试验阳性对照，实验简单快捷，只需3小时，就能通过荧光显色观察结果。能为96孔板样提供100次分析。

上海金畔生物科技有限公司向您推荐Cell BioLabs完整的DNA/RNA损伤检测方案，其产品覆盖上述最重要的DNA/RNA损伤分析产品，为您提供最优的检测方案。除了常见的AP位点分析以及8-OHdG/8-OHG定量分析，还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析等。除了DNA/RNA损伤，还包括脂质过氧化过程中壬烯(HNE)、丙二醛(MDA)以及8-异前列腺素F2a（8-Isoprostane）ELISA分析检测试剂盒；对于蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案；针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测，也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。