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细胞膜荧光探针BSB-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
细胞膜荧光探针BSB价格 2823
产品规格

5 mg

产品货号

细胞膜荧光探针BSB

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 481.29 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：细胞膜荧光探针BSB

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：481.29

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：340

发射波长(nm)：520

 

产品介绍

BSB是一种细胞可渗透的荧光探针，在体外（Ki = 400 nM）和体内均可特异性结合并标记细胞内β-淀粉样蛋白聚集体。 它可作为阿尔茨海默氏病动物模型的诊断工具。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的细胞膜荧光探针BSB。 

 

参考文献

Focus on Molecules: Rod cGMP Phosphodiesterase Type 6
Authors: Ionita MA, Pittler SJ.
Journal: Exp Eye Res (2007): 1

A novel role for a Drosophila homologue of cGMP-specific phosphodiesterase in the active transport of cGMP
Authors: Day JP, Houslay MD, Davies SA.
Journal: Biochem J (2006): 481

ANP-mediated cGMP signaling and phosphodiesterase inhibition in the rat cervical spinal cord
Authors: de Vente J, Markerink-van Ittersum M, Vles JS.
Journal: J Chem Neuroanat (2006): 263

Ca(2+)/calmodulin-dependent cyclic nucleotide phosphodiesterase in cGMP metabolism in rabbit parotid acinar cells
Authors: Sairenji N, Satoh K, Sugiya H.
Journal: Biomed Res (2006): 37

Compartmentalized phosphodiesterase-2 activity blunts beta-adrenergic cardiac inotropy via an NO/cGMP-dependent pathway
Authors: Mongillo M, Tocchetti CG, Terrin A, Liss and ron V, Cheung YF, Dostmann WR, Pozzan T, Kass DA, Paolocci N, Houslay MD, Zaccolo M.
Journal: Circ Res (2006): 226

Confirmation of tyrosine 698 in beta subunit of cGMP phosphodiesterase in patients with retinitis pigmentosa and population of the west of Mexico
Authors: Nunez-Gutierrez IC, Garcia-Cruz D, Fragoso-Herrera R, Medina-Lozano C.
Journal: Rev Invest Clin (2006): 359

Effect of icariin on cyclic GMP levels and on the mRNA expression of cGMP-binding cGMP-specific phosphodiesterase (PDE5) in penile cavernosum
Authors: Jiang Z, Hu B, Wang J, Tang Q, Tan Y, Xiang J, Liu J.
Journal: J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci (2006): 460

Enhancing cGMP in experimental progressive renal fibrosis: soluble guanylate cyclase stimulation vs. phosphodiesterase inhibition
Authors: Wang Y, Kramer S, Loof T, Martini S, Kron S, Kawachi H, Shimizu F, Neumayer HH, Peters H.
Journal: Am J Physiol Renal Physiol (2006): F167

Expression of cAMP and cGMP-phosphodiesterase isoenzymes 3, 4, and 5 in the human clitoris: immunohistochemical and molecular biology study
Authors: Oelke M, Hedlund P, Albrecht K, Ellinghaus P, Stief CG, Jonas U, Andersson KE, Uckert S.
Journal: Urology (2006): 1111

GAP-independent termination of photoreceptor light response by excess gamma subunit of the cGMP-phosphodiesterase
Authors: Tsang SH, Woodruff ML, Chen CK, Yamashita CY, Cilluffo MC, Rao AL, Farber DB, Fain GL.
Journal: J Neurosci (2006): 4472

细胞膜荧光探针BTA-1-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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细胞膜荧光探针BTA-1价格 1095
产品规格

5 mg

产品货号

细胞膜荧光探针BTA-1

产品参数
Ex (nm) 349 Em (nm) 421
分子量 240.32 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：细胞膜荧光探针BTA-1

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：240.32

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：349

发射波长(nm)：421

 

产品介绍

BTA-1是一种荧光性硫黄素-T衍生物，对淀粉样沉积物具有高亲和力（对于Ab 40，Ki = 11 nM）。 它穿过血脑屏障，表现出比硫黄素-T高50倍的亲和力，并用于对PS1 / APP转基因小鼠的大脑中的斑块和脑血管淀粉样蛋白沉积物进行选择性染色。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的细胞膜荧光探针BTA-1。 

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参考文献

Efficient radiosynthesis of carbon-11 labelled uncharged Thioflavin T derivatives using [11C]methyl triflate for beta-amyloid imaging in Alzheimer’s Disease with PET
Authors: Solbach C, Uebele M, Reischl G, Machulla HJ.
Journal: Appl Radiat Isot (2005): 591

Mechanism of A beta(1-40) fibril-induced fluorescence of (trans,trans)-1-bromo-2,5-bis(4-hydroxystyryl)benzene (K114)
Authors: LeVine H, 3rd.
Journal: Biochemistry (2005): 15937

Multiple ligand binding sites on A beta(1-40) fibrils
Authors: LeVine H, 3rd.
Journal: Amyloid (2005): 5

Amyloid imaging probes are useful for detection of prion plaques and treatment of transmissible spongiform encephalopathies
Authors: Ishikawa K, Doh-ura K, Kudo Y, Nishida N, Murakami-Kubo I, Ando Y, Sawada T, Iwaki T.
Journal: J Gen Virol (2004): 1785

Development of a PET/SPECT agent for amyloid imaging in Alzheimer’s disease
Authors: Wang Y, Klunk WE, Debnath ML, Huang GF, Holt DP, Shao L, Mathis CA.
Journal: J Mol Neurosci (2004): 55

In-vivo imaging of Alzheimer disease beta-amyloid with [11C]SB-13 PET
Authors: Verhoeff NP, Wilson AA, Takeshita S, Trop L, Hussey D, Singh K, Kung HF, Kung MP, Houle S.
Journal: Am J Geriatr Psychiatry (2004): 584

The binding of 2-(4′-methylaminophenyl)benzothiazole to postmortem brain homogenates is dominated by the amyloid component
Authors: Klunk WE, Wang Y, Huang GF, Debnath ML, Holt DP, Shao L, Hamilton RL, Ikonomovic MD, DeKosky ST, Mathis CA.
Journal: J Neurosci (2003): 2086

什么是荧光探针？

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什么是荧光探针？

荧光是光致发光的一种发光现象。当某些物质受到光、电、磁、化学能激发时，电子吸收能量并从基态跃迁到激发态，激发态的电子不稳定。它将通过辐射跃迁和非辐射跃迁回到基态。辐射跃迁的衰变过程伴随着光子的发射，产生荧光和磷光。非辐射跃迁包括振动弛豫、内部转换和系间跨越。非辐射跃迁会造成能量损失，发射光子的能量一般小于吸收光子的能量。因此，荧光物质的发射光谱波长通常大于吸收光谱波长。

一 荧光探针需要满足的条件

1.易于合成和纯化，收率高，安全无毒。

2.稳定性和溶解性好，特别是脂溶性透膜性好。

3、通过物理化学作用与标记物质特异性结合，标记条件温和。残留物和副产物很容易去除。

4.荧光量子产率高，摩尔消光系数大，抗漂白能力强。荧光与背景形成鲜明对比。此外。激发和发射波长可以有效避免细胞自发荧光的背景干扰。

二 近红外（NIR）荧光探头的优点

1、近红外光检测样品穿透力强、成像分辨率高、检测灵敏度高、信噪比高。

2.在可见光区域，生物组织的某些成分会自激发产生自发荧光。并且样品的散射光强度较高，严重干扰荧光检测和成像追踪。近红外荧光自发荧光背景低。

三 检测细胞内活性小分子（RSM）的NIR方法

细胞中的RSM往往寿命短、反应活性高、浓度极低、对环境敏感且不发出荧光。因此，必须借助荧光探针的特异性捕获标记才能具有近红外荧光特性。

四 荧光探针广泛应用于生物大分子研究的原因

分子荧光探针广泛用于研究蛋白质和其他生物大分子接触表面的表面诱导构象变化。在直接分析方法中，荧光分析方法应用广泛，且优于间接分析方法，因为它不破坏结合平衡，接近反应的真实存在。

五荧光探针作为光敏剂药物的能量供体

荧光纳米探针不仅可以作为药物载体与光敏药物分子结合形成多功能纳米材料，还可以作为光敏药物分子的能量供体，提高其单线态氧产生效率。

光敏剂和荧光染料的吸收光谱、荧光发射光谱重叠较少。有效避免分子间能量转移引起的荧光猝灭、单线态氧生成效率降低、荧光成像等。在荧光成像的同时，光敏剂强制激发产生的单线态氧也可能与激发态发生光化学反应。荧光探针并引起荧光猝灭。或者它可能会暴露量子点在成像过程中潜在的毒副作用。因此，设计合适的纳米载体结构将光敏剂药物分子与荧光探针物理隔离是避免此类光化学反应的有效方法。

六、荧光分子探针的组成及功能

1.受体

它选择性地与物体（分析物）结合并引起探针所在的化学或生物微环境的变化。

2.荧光团

识别基团与分析物结合而引起的化学或生物微环境变化，转化为仪器易于感知（颜色变化）或可检测的信号。

小分子荧光探针一般采用有机小分子荧光团，包括蒽、香dou素、荧光素、BODIPY、萘二甲酰亚胺、罗丹明、花青等。其衍生物的发射波长范围几乎覆盖所有可见光区域（400-800 nm）。并且通过对这些荧光团进行适当修饰，可以实现蓝、绿光到红光和近红外光（650-900 nm）的覆盖。此外，发光量子点、上转换纳米材料、高分子聚合物荧光材料、荧光蛋白等也可作为荧光探针中的信号基团。

3.垫片

连接荧光基团和识别基团，有效地将识别信息转化为荧光信号，如荧光强度的变化、荧光光谱的移动、荧光寿命的变化等。从而实现对治疗检测对象的有效检测。并非所有探针都有连接基团。

七 荧光探针可检测生物体物质

1.质子(H+)。

2.自由基和其他活性氮和氧物种（ROS、RNS）。

3.气体信号分子（NO、CO、H2S……）

4.重金属污染（Cd2+.Hg2+.Pb2+…）

5.阴离子(Cl-, HCO3-, H2PO4-, HPO42-…)

6.过渡金属离子(Fe2+/Fe3+, Zn2+, Cu+/Cu2+…)

7.碱金属和碱土金属离子（K+、Na+、Ca2+、Mg2+…）

8.DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。

9、有机小分子如肽、葡萄糖、麦芽糖等。

八、荧光探针的种类

根据与客体相互作用后荧光信号的变化，可分为强度变化型荧光探针和比例计型荧光探针。强度变化型荧光探针分为猝灭型（ON-OFF）和增强型（OFF-ON）荧光探针。

强度变化型荧光探针根据荧光强度的变化实现客体物种的检测。由于荧光强度还受到探针浓度、激发光源效率、探针所处环境等因素的影响，此类探针在客体物种的定量检测中也存在明显的局限性。目前，大多数荧光探针都是增强型荧光探针。

比率荧光探针本身也发射一定波长的荧光。其明显的优点是可以通过两个波长下荧光强度的比值来消除大部分环境因素的干扰，从而实现在探针浓度未知的情况下对被测物种的定量检测。

九 荧光探针的设计机理

传统的分子探针设计原理包括光诱导电子转移（PET）、分子内电荷转移（ICT）、扭曲分子内电荷转移（TICT）、金属配体电荷转移（MLCT）、电子能量转移（EET）、荧光共振能量转移（FRET） ）、激发态分子内质子转移（ESIPT）、激发态准分子/激基复合物形成等。新兴机制包括聚集诱导发射（AIE）、上转换发光（UCL）等。

十 光电子转移（PET）

一般来说，光致电子转移（PET）工艺分为两种类型。一种是电子从电子供体转移到激发态荧光团（电子受体），激发态荧光团被还原而引起荧光猝灭。另一种是电子从激发态荧光团（电子供体）转移到激发态荧光团（电子受体）。电子受体、激发态荧光团被氧化导致荧光猝灭。当物体未结合时，荧光团和受体之间的 PET 将淬灭荧光。物体结合后，PET 过程受到抑制，荧光团发出荧光。

十一、分子内电荷转移（ICT）

分子内电荷转移也称为光诱导电荷转移（PCT），也是设计比例荧光探针的重要方法。这类荧光探针的识别基团直接与荧光团相连，也可以理解为组成荧光团的某些原子或基团直接参与客体的识别。

十二 荧光共振能量转移（FRET）

荧光共振能量转移（FRET）是能量转移（ET）的一种。能量转移是指分子中能量从供体发色团向受体发色团转移的过程。 FRET 效率通常通过调整光谱重叠程度和供体-受体距离来改变。

十三激发分子内质子转移（ESIPT）

ESIPT现象是指化合物分子从基态跃迁到激发态，然后质子通过分子内氢键转移到分子中相邻的N、S、O杂原子上，形成相应互变异构体的过程。

十四准分子/激基复合物形成

准分子（Er）可以定义为由相同结构的激发荧光团和基态荧光团相互作用形成的缔合体。同样，如果处于激发态的荧光团和处于基态的具有不同结构的荧光团形成复合物，则称为激发态复合物。

化学试剂macrocyclics荧光探针供应D-100/D-110

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化学试剂macrocyclics荧光探针供应

简要描述：化学试剂macrocyclics荧光探针供应： Macrocyclics大环中间体，上海金畔生物科技有限公司专业供应Macrocyclics产品。

详细介绍

产品咨询

品牌 macrocyclics 供货周期 两周
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,石油,制药

化学试剂macrocyclics荧光探针供应

美国Macrocyclics公司，制造商定制的螯合剂，致力于前沿发展新的螯合化学平台。公司有着广泛的产品，专为生物靶向结合的单克隆抗体和肽片段的双功能配体。Macrocyclics提供广泛的目录产品库，以满足我们的基础和应用研究客户的需求，以及定制的cGMP产品和服务，以加速早期临床开发项目。Macrocyclics还提供与基础螯合化学和生物结合相关的专家咨询服务。宏观周期公司有一个好的研究和发展战略，旨在满足医学界的新兴需求，同时考虑到商业和学术合作。我们的分子成像平台技术适用于铜64、镓68、锆89等多种放射性核素。用于光学和磁共振成像(MRI)的正电子发射断层扫描(PET)和钆及其他镧系离子。Macrocyclics的产品包括一系列广泛的双功能配体，专门为生物靶向设计，结合单克隆抗体和肽片段。自1995年以来，巨环化合物一直是金属配体螯合技术中值得信赖的名称。

Macrocyclics D-100  
C₁₁H₁₆N₅O₃I		 393.2 10mg 370  
≥ 94%		 EAM-1  287970-46-1
Macrocyclics D-110  
C₁₂H₁₈N₅O₄Br		  
376.2		 10mg 370  
≥ 94%		 EAM-2  2125661-97-2

上海金畔生物科技有限公司　是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品货号现货供应，*，欲购从速（敬请咨询）化学试剂macrocyclics荧光探针供应

钙离子荧光探针Cal500 , 钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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钙离子荧光探针Cal500 , 钾盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal500 , 钾盐

产品参数
Ex (nm) 388 Em (nm) 482
分子量 850.05 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal-500 , 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM，Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从金畔购买。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse 丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从金畔购买。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）对于Calbryte 520 AM，在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试，对于Calbryte 590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte 630 AM，使用610/640nm进行钙测试。

 

2.测量细胞内钙响应

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

3.结论

        由于Ca 2+在生物学中的重要性，已经建立了许多用于分析细胞和/或亚细胞Ca 2+活性机制的技术/方法。 尽管用于分析Ca 2+活性的每种方法都具有优于其他方法的某些优点，但每种方法也存在缺点。 凭借上述出色的性能，我们相信Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630钙检测试剂为各种生物系统中的细胞内钙分析和监测提供了新的强大工具。

        正如可能预测的那样，Ca2 +分析中许多研究人员的兴趣从细胞水平转移到亚细胞水平。 已经发现Ca2 +在整个细胞中均匀分布，并且在多种细胞（例如，卵母细胞，心肌细胞，肝细胞和外分泌细胞）中观察到Ca2 +的细胞内异质性（例如Ca2+ waves and Ca2+ sparks）。 随着20世纪80年代共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和2000年代先进的酶标仪（如FLIPR，FDSS和NOVOStar专用于细胞内Ca2 +检测）的出现，细胞内Ca2 +的测量显着加速。 共聚焦激光扫描显微镜的多光子显微镜除了测量其浓度外，还允许在亚细胞水平上对细胞内Ca 2+信号传导进行空间和时间分析。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520, 钾盐 Cat#21140
钙离子荧光探针Cal-590 钾盐 Cat#20518
钙离子荧光探针Cal-670 , 钾盐 Cat#20455

钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐价格 5670
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐

产品参数
Ex (nm) 667 Em (nm) 680
分子量 1587.99 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal-670 , 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。Cal-670 是一种近红外（NIR）钙指示剂，最大发射波长约为675 nm。用633nm或647nm的红色激光可以很好地激发它，具有Kd~853nM的中等钙亲和力。Cal-670™是极少数可用于体内成像的钙指示剂之一，因为它具有NIR荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-670 , 钾盐。 

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯类

 

1.使用Cal-520®，Cal-590 或Cal-630 AM酯类：

        AM酯是非极性酯，其可以容易地穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，应根据具体实验修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中使用0.04％Pluronic®F-127制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM 酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS（如果适用）替换染料工作溶液，选择含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM ）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

钙离子荧光探针Cal670 , 钾盐

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。将CHO-K细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑壁/透明底板中。将100μl含有1mM丙磺舒的HHBS中的4μMCal590 AM或Cal 630 AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。将染料上样培养基替换为100μlHHBS和1mM丙磺舒，然后在添加50μl300μMATP 之前和之后使用TRITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

参考文献

All-Optical Crosstalk-Free Manipulation and Readout of Chronos-expressing Neurons
Authors: Navjeevan Singhh Soor, Peter Quicke, Carmel L Howe, Kuin Tian Pang, Mark Neil, Simon Schultz, Amanda Joy Foust
Journal: Journal of Physics D: Applied Physics (2018)

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

 

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钙离子荧光探针Cal770, 钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal770, 钾盐价格 5670
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10×50 ug

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钙离子荧光探针Cal770, 钾盐

产品参数
Ex (nm) 758 Em (nm) 783
分子量 1688.58 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cal-520 ，Cal-590 和Cal-630 提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。它们是荧光钙敏感染料，与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有显着信噪比和细胞内保留。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM。一旦进入细胞内，Cal 520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM的亲脂性阻断基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM成为测量细胞钙的理想指标。高信噪比和更好的细胞内保留使Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的有力工具。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Cal-520 ，Cal-590 和Cal-630 主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Cal-590 和Cal-630 的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系的多色检测兼容。 此外，Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Cal-520在488 nm处可以很好地激发，并与FITC滤光片组一起使用。 Cal-590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Cal-590经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。光谱和钙结合特性总结如下（参见说明书中的表1）。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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钙离子荧光探针Fluo2, 钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fluo2, 钾盐价格 2111
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钙离子荧光探针Fluo2, 钾盐

产品参数
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分子量 891.10 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：钙离子荧光探针Fluo-2, 钾盐

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：891.10

溶剂：水

激发波长(nm)：494

发射波长(nm)：517

 

产品介绍

钙离子荧光探针Fluo-2, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。Fluo-2是Fluo-3和Fluo-4的母体化合物。这些荧光钙指示剂具有钙依赖性荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-2, 钾盐。 

点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

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Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

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Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
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Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
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钙离子荧光探针CalGreen1六钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针CalGreen1六钾盐价格 2111
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10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针CalGreen1六钾盐

产品参数
Ex (nm) 498 Em (nm) 517
分子量 1147.18 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal Green 1,六钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Cal Green 1（AAT Bioquest）与Calcium Green-1（Invitrogen）相同。 结合钙离子后，荧光强度增加。 不渗透细胞的染料Cal Green 1（Calcium Green-1）是可激发488 nm的钙指示剂。 与Fluo-3相比，Cal Green-1在低钙浓度下更具荧光性，有助于确定基线钙水平并增加静息细胞的可见度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Cal Green 1,六钾盐。 

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Microscopic imaging of intracellular calcium in live cells using lifetime-based ratiometric measurements of Oregon Green BAPTA-1
Authors: Lattarulo C, Thyssen D, Kuchibholta KV, Hyman BT, Bacskaiq BJ.
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An ensemble and single-molecule fluorescence spectroscopy investigation of Calcium Green 1, a calcium-ion sensor
Authors: Lu Y, Paige MF.
Journal: J Fluoresc (2007): 739

Calcium Green FlAsH as a genetically targeted small-molecule calcium indicator
Authors: Tour O, Adams SR, Kerr RA, Meijer RM, Sejnowski TJ, Tsien RW, Tsien RY.
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Measurement of intracellular calcium levels by the fluorescent Ca2+ indicator Calcium-Green
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Monitoring of Ca2+ release from intracellular stores in permeabilized rat parotid acinar cells using the fluorescent indicators Mag-fura-2 and calcium green C18
Authors: Tojyo Y, Tanimura A, Matsumoto Y.
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Optical imaging of neuronal activity in tissue labeled by retrograde transport of Calcium Green Dextran
Authors: McPherson DR, McClellan AD, O’Donovan MJ.
Journal: Brain Res Brain Res Protoc (1997): 157

Modulation of an Intracellular Calmodulin-Stimulated Ca2+-Pumping ATPase in Cauliflower by Trypsin (The Use of Calcium Green-5N to Measure Ca2+ Transport in Membrane Vesicles)
Authors: Askerlund P.
Journal: Plant Physiol (1996): 913

A method for recording intracellular [Ca2+] transients in cardiac myocytes using calcium green-2
Authors: Spencer CI, Berlin JR.
Journal: Pflugers Arch (1995): 579

Characterization of calcium translocation across the plasma membrane of primary osteoblasts using a lipophilic calcium-sensitive fluorescent dye, calcium green C18
Authors: Lloyd QP, Kuhn MA, Gay CV.
Journal: J Biol Chem (1995): 22445

Calcium green-5N, a novel fluorescent probe for monitoring high intracellular free Ca2+ concentrations associated with glutamate excitotoxicity in cultured rat brain neurons
Authors: Rajdev S, Reynolds IJ.
Journal: Neurosci Lett (1993): 149

钙离子荧光探针CalGreen1AM-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针CalGreen1AM价格 2111
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10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针CalGreen1AM

产品参数
Ex (nm) 498 Em (nm) 517
分子量 1290.96 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cal Green 1 (AAT Bioquest) 与 Calcium Green-1 (Invitrogen) 是同一分子。它在与钙离子结合后，荧光会大幅度增加。细胞渗透性染料 Cal Green 1 AM (Calcium Green-1 AM) 是一种 488 nm 可激发的钙指示剂。与 Fluo-3 AM 相比，Cal Green-1 AM 在细胞中低钙浓度下荧光更强，有助于确定基线钙水平并提高静息细胞的可见度。它已用于许多钙信号传导研究，包括测量细胞内钙、钙流入和释放后以及活体组织中钙的多光子激发成像。通过将溶解的指示剂直接添加到培养基中培养的细胞中，可以向细胞装载 Cal Green-1 AM。来自这些细胞的荧光信号通常使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞术来检测。

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适用仪器

荧光显微镜  
Ex: FITC 滤波片组
Em： FITC 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 525 nm
Cutoff： 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理

 

溶解方案(溶剂以说明书为准)

  0.1 mg 0.5 mg 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 77.462 µL 387.309 µL 774.617 µL 3.873 mL 7.746 mL
5 mM 15.492 µL 77.462 µL 154.923 µL 774.617 µL 1.549 mL
10 mM 7.746 µL 38.731 µL 77.462 µL 387.309 µL 774.617 µL
实验方案

样品实验方案

储备溶液配制:

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分成一次性等份，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

Cal Green 1 AM 储备溶液

在高品质无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Cal Green 1 AM 储备溶液。

工作溶液配制:

Cal Green 1 AM 工作溶液

1.实验当天，将 Cal Green 1 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Cal Green 1 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Cal Green  1 AM。细胞加载所需染料的准确浓度必须根据经验确定。

注意：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Cal Green™ 1 AM 的水溶性。可以从金畔购买各种 Pluronic® F-127

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从金畔购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将 AM 酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指导，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中将细胞孵育过夜。

2.第二天，将 1X Cal Green 1 AM 工作溶液添加到您的细胞培养板中。

3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

5.根据需要添加刺激剂，同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/525 nm 处测量荧光。

 

试剂应用文献

Protocol for in vitro sonoporation validation using non-targeted microbubbles for human studies of ultrasound-mediated gene delivery
Authors: Zhang, Nisi and Guo, Yutong and Foiret, Josquin and Tumbale, Spencer K and Paulmurugan, Ramasamy and Ferrara, Katherine W
Journal: STAR protocols (2023): 102723
 
Network pharmacology-based research uncovers cold resistance and genesis mechanism of Cinnamomum cassia
Authors: Jiang, Xiao-wen and Lu, Hong-yuan and Xu, Zi-Hua and Zhang, Ying-Shi and Zhao, Qing-Chun and others,
Journal: Fitoterapia (2021): 104824
 
Binding to carboxypeptidase M mediates protective effects of fibrinopeptide Bβ (15-42)
Authors: Sörensen-Zender, Inga and Chen, Rongjun and Song, Rong and David, Sascha and Melk, Anette and Haller, Hermann and Schmitt, Rol and , undefined
Journal: Translational Research (2019)
 
Tuning the Color Palette of Fluorescent Copper Sensors through Systematic Heteroatom Substitution at Rhodol Cores
Authors: Jia, Shang and Ramos-Torres, Karla M and Kolemen, Safacan and Ackerman, Cheri M and Chang, Christopher J
Journal: (2017)
 
Tuning the color palette of fluorescent copper sensors through systematic heteroatom substitution at rhodol cores
Authors: Jia, Shang and Ramos-Torres, Karla M and Kolemen, Safacan and Ackerman, Cheri M and Chang, Christopher J
Journal: ACS chemical biology (2017): 1844–1852

 

参考文献

Microscopic imaging of intracellular calcium in live cells using lifetime-based ratiometric measurements of Oregon Green BAPTA-1
Authors: Lattarulo C, Thyssen D, Kuchibholta KV, Hyman BT, Bacskaiq BJ.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 377
 
Calcium Green FlAsH as a genetically targeted small-molecule calcium indicator
Authors: Tour O, Adams SR, Kerr RA, Meijer RM, Sejnowski TJ, Tsien RW, Tsien RY.
Journal: Nat Chem Biol (2007): 423
 
An ensemble and single-molecule fluorescence spectroscopy investigation of Calcium Green 1, a calcium-ion sensor
Authors: Lu Y, Paige MF.
Journal: J Fluoresc (2007): 739
 
Measurement of intracellular calcium levels by the fluorescent Ca2+ indicator Calcium-Green
Authors: Silei V, Fabrizi C, Venturini G, Tagliavini F, Salmona M, Bugiani O, Lauro GM.
Journal: Brain Res Brain Res Protoc (2000): 132
 
Monitoring of Ca2+ release from intracellular stores in permeabilized rat parotid acinar cells using the fluorescent indicators Mag-fura-2 and calcium green C18
Authors: Tojyo Y, Tanimura A, Matsumoto Y.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (1997): 189
 
Optical imaging of neuronal activity in tissue labeled by retrograde transport of Calcium Green Dextran
Authors: McPherson DR, McClellan AD, O’Donovan MJ.
Journal: Brain Res Brain Res Protoc (1997): 157
 
Modulation of an Intracellular Calmodulin-Stimulated Ca2+-Pumping ATPase in Cauliflower by Trypsin (The Use of Calcium Green-5N to Measure Ca2+ Transport in Membrane Vesicles)
Authors: Askerlund P., undefined
Journal: Plant Physiol (1996): 913
 
A method for recording intracellular [Ca2+] transients in cardiac myocytes using calcium green-2
Authors: Spencer CI, Berlin JR.
Journal: Pflugers Arch (1995): 579
 
Characterization of calcium translocation across the plasma membrane of primary osteoblasts using a lipophilic calcium-sensitive fluorescent dye, calcium green C18
Authors: Lloyd QP, Kuhn MA, Gay CV.
Journal: J Biol Chem (1995): 22445
 
Calcium green-5N, a novel fluorescent probe for monitoring high intracellular free Ca2+ concentrations associated with glutamate excitotoxicity in cultured rat brain neurons
Authors: Rajdev S, Reynolds IJ.
Journal: Neurosci Lett (1993): 149

钙离子荧光探针Cal590AM-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Cal590AM价格 2823
产品规格

5×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal590AM

产品参数
Ex (nm) 574 Em (nm) 588
分子量 1266.81 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal-590 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: TRITC/Cy3 滤波片组
Em： TRITC/Cy3 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

使用Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM，Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从金畔购买。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse 丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从金畔购买。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）对于Calbryte 520 AM，在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试，对于Calbryte 590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte 630 AM，使用610/640nm进行钙测试。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Cal590AM

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑色壁/透明底板中。 将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte TM 520AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基，加入50μL50μMATP，并使用FITC通道用荧光显微镜（Keyence）成像。

钙离子荧光探针Cal590AM

图2.用Calbryte 520或Fluo-4 AM测量的CHO-M1细胞中外源M1受体的卡巴胆碱刺激的钙响应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μLFluo-4AM或不含丙磺舒的Calbryte 520AM加入细胞中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 通过FlexStation 3（Molecular Devices）添加Carbachol（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

钙离子荧光探针Cal590AM

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μL具有2mM丙磺舒的HbBS中的Calbryte 590AM或Calbryte  630 AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育1小时。 将染料加载培养基替换为200μLHHBS，用50μL50μMATP处理，并使用TRITC通道（Calbryte  590）和Texas Red Channel（Calbryte 630）用荧光显微镜（Keyence）成像。

 

结论

        由于Ca 2+在生物学中的重要性，已经建立了许多用于分析细胞和/或亚细胞Ca 2+活性机制的技术/方法。 尽管用于分析Ca 2+活性的每种方法都具有优于其他方法的某些优点，但每种方法也存在缺点。 凭借上述出色的性能，我们相信Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630钙检测试剂为各种生物系统中的细胞内钙分析和监测提供了新的强大工具。

        正如可能预测的那样，Ca2 +分析中许多研究人员的兴趣从细胞水平转移到亚细胞水平。 已经发现Ca2 +在整个细胞中均匀分布，并且在多种细胞（例如，卵母细胞，心肌细胞，肝细胞和外分泌细胞）中观察到Ca2 +的细胞内异质性（例如Ca2+ waves and Ca2+ sparks）。 随着20世纪80年代共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和2000年代先进的酶标仪（如FLIPR，FDSS和NOVOStar专用于细胞内Ca2 +检测）的出现，细胞内Ca2 +的测量显着加速。 共聚焦激光扫描显微镜和近的多光子显微镜除了测量其浓度外，还允许在亚细胞水平上对细胞内Ca 2+信号传导进行的空间和时间分析。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

 

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5×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal590钠盐

产品参数
Ex (nm) 574 Em (nm) 588
分子量 1026.38 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal-590 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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5×50 ug

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Ex (nm) 574 Em (nm) 588
分子量 1123.03 溶剂 Water
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钙离子荧光探针Cal-590 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。 Rhod-2最常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。 Cal-590 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长，使其与TRITC /Cy3®过滤器组兼容。在CHO和HEK细胞中，Cal-590 AM具有比Rhod-2 AM更敏感的细胞钙响应。 Cal-590的光谱与FITC，AlexaFluor®488和GFP的光谱完全分离，使其成为用GFP细胞系或FITC / AlexaFluor®488标记抗体复合细胞内检测的理想钙探针。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Cal-590 钾盐。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯类

 

1.使用Cal-520®，Cal-590 或Cal-630 AM酯类：

        AM酯是非极性酯，其可以容易地穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，应根据具体实验修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中使用0.04％Pluronic®F-127制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520®AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM 酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS（如果适用）替换染料工作溶液，选择含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM ）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Cal590钾盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Cal590钾盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

 

钙离子荧光探针Cal590钾盐

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。将CHO-K细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑壁/透明底板中。将100μl含有1mM丙磺舒的HHBS中的4μMCal590 AM或Cal 630 AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。将染料上样培养基替换为100μlHHBS和1mM丙磺舒，然后在添加50μl300μMATP 之前和之后使用TRITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

参考文献

All-Optical Crosstalk-Free Manipulation and Readout of Chronos-expressing Neurons
Authors: Navjeevan Singhh Soor, Peter Quicke, Carmel L Howe, Kuin Tian Pang, Mark Neil, Simon Schultz, Amanda Joy Foust
Journal: Journal of Physics D: Applied Physics (2018)

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

 

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钙离子荧光探针Cal-590 钠盐 Cat#20515
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钙离子荧光探针Cal630AM-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal630AM价格 4245
产品规格

5×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal630AM

产品参数
Ex (nm) 609 Em (nm) 626
分子量 1282.89 溶剂 DMSO
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产品概述

钙离子荧光探针Cal-630 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Texas Red 滤波片组
Em： Texas Red 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 600 nm
Em： 640 nm
Cutoff： 630 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

使用Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM，Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从金畔购买。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse 丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从金畔购买。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）对于Calbryte 520 AM，在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试，对于Calbryte 590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte 630 AM，使用610/640nm进行钙测试。

 

2.测量细胞内钙响应

钙离子荧光探针Cal630AM

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑色壁/透明底板中。 将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基，加入50μL50μMATP，并使用FITC通道用荧光显微镜（Keyence）成像。

钙离子荧光探针Cal630AM

图2.用Calbryte 520或Fluo-4 AM测量的CHO-M1细胞中外源M1受体的卡巴胆碱刺激的钙响应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μLFluo-4AM或不含丙磺舒的Calbryte 520AM加入细胞中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 通过FlexStation 3（Molecular Devices）添加Carbachol（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

钙离子荧光探针Cal630AM

图3. CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。 将100μL具有2mM丙磺舒的HbBS中的Calbryte 590AM或Calbryte  630 AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育1小时。 将染料加载培养基替换为200μLHHBS，用50μL50μMATP处理，并使用TRITC通道（Calbryte  590）和Texas Red Channel（Calbryte 630）用荧光显微镜（Keyence）成像。

 

结论

        由于Ca 2+在生物学中的重要性，已经建立了许多用于分析细胞和/或亚细胞Ca 2+活性机制的技术/方法。 尽管用于分析Ca 2+活性的每种方法都具有优于其他方法的某些优点，但每种方法也存在缺点。 凭借上述出色的性能，我们相信Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630钙检测试剂为各种生物系统中的细胞内钙分析和监测提供了新的强大工具。

        正如可能预测的那样，Ca2 +分析中许多研究人员的兴趣从细胞水平转移到亚细胞水平。 已经发现Ca2 +在整个细胞中均匀分布，并且在多种细胞（例如，卵母细胞，心肌细胞，肝细胞和外分泌细胞）中观察到Ca2 +的细胞内异质性（例如Ca2+ waves and Ca2+ sparks）。 随着20世纪80年代共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和2000年代先进的酶标仪（如FLIPR，FDSS和NOVOStar专用于细胞内Ca2 +检测）的出现，细胞内Ca2 +的测量显着加速。 共聚焦激光扫描显微镜和近的多光子显微镜除了测量其浓度外，还允许在亚细胞水平上对细胞内Ca 2+信号传导进行的空间和时间分析。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

 

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新型钙离子荧光探针Calbryte 530, AM *细胞渗透性* Cat#20720

钙离子荧光探针Cal630钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal630钠盐价格 2823
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5×50 ug

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钙离子荧光探针Cal630钠盐

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Ex (nm) 609 Em (nm) 626
分子量 1042.45 溶剂 Water
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钙离子荧光探针Cal-630钠盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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