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钙离子荧光探针Cal630钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Cal630钾盐价格 2823
产品规格

5×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal630钾盐

产品参数
Ex (nm) 609 Em (nm) 626
分子量 1139.11 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Cal-630钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo4五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fluo4五钾盐价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fluo4五钾盐

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 528
分子量 927.08 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存
产品概述

钙的测量对于许多生物学研究至关重要。 荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。 Fluo-3和Fluo-4常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。 Fluo-4是fluo-3的类似物，其中两个氯取代基被氟取代，这导致488nm处的荧光激发增加，因此荧光信号水平更高。 可以使用贴片移液管或显微注射将细胞物理地加载这些指示物的细胞不渗透盐形式。 这些指标可用于荧光和共聚焦显微镜，流式细胞仪和酶标仪应用。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。 对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为1） 丙磺舒为-2.5 mM，对于磺吡酮为0.1-0.25 mM，以减少去酯化指标的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注意1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注意2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书）。

 

试剂应用文献

14,15‐epoxyeicosatrienoic acid produced by cytochrome P450s enhances neurite outgrowth of PC12 and rat hippocampal neuronal cells
Authors: Oguro, Ami and Inoue, Takumi and Kudoh, Suguru N and Imaoka, Susumu
Journal: Pharmacology Research & Perspectives (2018): e00428

 

参考文献

14, 15-epoxyeicosatrienoic acid produced by cytochrome P450s enhances neurite outgrowth of PC 12 and rat hippocampal neuronal cells
Authors: Ami Oguro, Takumi Inoue, Suguru N Kudoh, Susumu Imaoka
Journal: Pharmacology Research & Perspectives (2018): e00428

Succinate, increased in metabolic syndrome, activates GPR91 receptor signaling in urothelial cells
Authors: Abubakr H Mossa, Monica Velasquez Flores, Philippe G Cammisotto, Lysanne Campeau
Journal: Cellular Signalling (2017)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
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钙离子荧光探针Fluo5F五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo5F五钾盐价格 2823
产品规格

500 ug

产品货号

产品参数
Ex (nm) 494 Em (nm) 516
分子量 931.05 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Fluo-5F是Fluo-4的类似物，具有较低的钙结合亲和力（Kd = ~2.3uM），使其适用于检测1μM至1 mM范围内的细胞内钙水平，这将使Fluo-4的反应饱和。。 可以使用贴片移液管或显微注射将细胞物理加载细胞不渗透的Fluo-5F。 更常见的是，通过将溶解的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中，可以将Fluo-5F AM酯（＃20560）直接加载到活细胞中。 它与氩离子激光源在488 nm激发相容，使Fluo-5F可用于共聚焦显微镜，流式细胞仪和微孔板筛选应用。 它的激发和发射波长分别为494和516 nm。 钙结合后，其荧光强度增加> 100倍。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用钙指示剂AM酯类

 

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Fluo5F五钾盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Fluo5F五钾盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] = K d [F – F min ] / F max – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得特定应用的信息。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

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钙离子荧光探针Cal520NHS酯-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Cal520NHS酯价格 5670
产品规格

100 ug

产品货号

钙离子荧光探针Cal520NHS酯

产品参数
Ex (nm) 492 Em (nm) 515
分子量 1048.9 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

生物素和生物胞素与抗生物素蛋白和链霉亲和素都具有高亲和力结合。由于生物素和生物胞素是相对较小的分子，因此生物素和生物胞素可以与许多生物分子缀合而不会显着改变靶分子的生物活性。Cal-520-生物素和Cal-520生物素结合物具有很好的钙反应。他们的抗生物素蛋白和链霉亲和素复合物具有敏感的钙反应。可以想象的是，可以将Cal-520-生物素和Cal-520生物素结合物与IgG-抗生物素蛋白或IgG-链霉亲和素结合物结合，以针对特定靶标在空间上监测钙的变化。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
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Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
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Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 837.97 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

细胞不渗透的Fura-8FF是Fura-8的类似物，钙结合亲和力低得多，Kd〜10 µM。Fura-8FF的发射转变为更长的可见光波长，与普通滤光片组兼容。例如，通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fura-8FF , 五钾盐。 

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

点击查看光谱

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

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Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
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Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
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钙离子荧光探针Fura-2,五钾盐 Cat#21025
钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐 Cat#21028
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新型钙离子荧光探针Calbryte590AM *细胞渗透性*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
新型钙离子荧光探针Calbryte590AM *细胞渗透性*价格 2823
产品规格

2×50 ug

产品货号

新型钙离子荧光探针Calbryte590AM *细胞渗透性*

产品参数
Ex (nm) 581 Em (nm) 593
分子量 1218.77 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

新型钙离子荧光探针Calbryte 590, AM在活细胞中的实验方案（点击查看）

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: TRITC/Cy3 滤波片组
Em： TRITC/Cy3 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

实验方案

溶液配制

1.储备溶液配制

Calbryte 590 AM 储备溶液

在无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Calbryte 590 AM 储备溶液。

注意：当在 DMSO 中复溶时，Calbryte 590 AM 是透明、无色的溶液。

2.工作溶液配制

Calbryte 590 AM 工作溶液

2.1实验当天，将 Calbryte 590 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.2在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）（货号20011）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Calbryte 590 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Calbryte 590 AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注意：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Calbryte 590 AM 的水溶性。可以从金畔购买购买。

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从金畔购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将Calbryte 590 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）将细胞在生长培养基中培养过夜。

b）第二天，将 1X Calbryte 590 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。

注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

c）将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

d）用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）根据需要添加刺激剂，同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 540/590 nm 处测量荧光。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
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新型钙离子荧光探针Calbryte590钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
新型钙离子荧光探针Calbryte590钾盐价格 4245
产品规格

5×50 ug

产品货号

新型钙离子荧光探针Calbryte590钾盐

产品参数
Ex (nm) 581 Em (nm) 593
分子量 1074.98 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：新型钙离子荧光探针Calbryte 590,钾盐

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1074.98

溶剂：水

激发波长（nm）：573

发射波长（nm）：588

 

产品介绍

新型钙离子荧光探针Calbryte 590,钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，细胞内钙通量测定法是监测信号转导途径和G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道靶标的高通量筛选的一种广泛使用的方法。随后在1989年推出Rhod-2，后来开发了具有信噪比的Rhod-4和Cal-590，它们成为用于共聚焦显微镜，流式细胞术和高通量筛选应用的广泛使用的红色荧光Ca2 +指示剂。Calbryte 590是用于测量细胞内钙的新一代红色荧光指示剂。Calbryte 590的信号/背景比率和细胞内保留特性大大提高，使其成为评估GPCR和钙通道靶标以及在活细胞中筛选其激动剂和拮抗剂的强大的红色荧光指示剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的新型钙离子荧光探针Calbryte 590,钾盐。 

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

新型钙离子荧光探针Calbryte630AM *细胞渗透性*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
新型钙离子荧光探针Calbryte630AM *细胞渗透性*价格 2823
产品规格

2×50 ug

产品货号

新型钙离子荧光探针Calbryte630AM *细胞渗透性*

产品参数
Ex (nm) 607 Em (nm) 624
分子量 1234.84 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙的光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。 x-Rhod-1 常用作红色荧光钙指示剂。然而，x-Rhod-1 在酯酶水解后仅在活细胞中发出适度的荧光，并且细胞钙反应非常小。 Calbryte™ 630 改变了 x-Rhod-1 细胞负载和钙响应，同时保持 x-Rhod-1 的光谱波长，使其与 Texas Red® 滤光片组兼容。在 CHO 和 HEK 细胞中，Cal-630 AM 的细胞钙反应比 x-Rhod-1 更敏感。 Calbryte 630 的光谱与 FITC、Alexa Fluor® 488 和 GFP 的光谱完全分离，使其成为使用 GFP 细胞系或 FITC/Alexa Fluor® 488 标记抗体进行多重细胞内检测的钙探针。 Calbryte™ 630 是新一代红色荧光指示剂，用于测量细胞内钙。 Calbryte™ 630 AM 显着提高的信号/背景比和细胞内保留特性使其成为最强大的深红色荧光指示剂，用于评估 GPCR 和钙通道靶点以及在活细胞中筛选其激动剂和拮抗剂。与其他染料 AM 细胞负载一样，Calbryte™ 630 AM 酯不发出荧光，一旦进入细胞内，就会被细胞内酯酶水解并被激活。激活的指示剂是一种极性分子，不再能够通过细胞膜自由扩散，基本上被困在细胞内。

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 640 nm
Em： 660/20  nm 
通道: APC通道

 

荧光显微镜
Ex: Texas Red 滤波片组
Em： Texas Red 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪

  
Ex: 600 nm
Em： 640 nm
Cutoff： 630 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式： 底读模式/可分液处理
实验方案

实验方案

溶液配制

1.储备溶液配制

Calbryte 630 AM 储备溶液

在无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Calbryte 630 AM 储备溶液。

注意：当在 DMSO 中复溶时，Calbryte 630 AM 是透明、无色的溶液。

2.工作溶液配制

Calbryte 630 AM 工作溶液

2.1实验当天，将 Calbryte 630 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.2在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）（货号20011）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Calbryte 630 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Calbryte 630 AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注意：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Calbryte 630 AM 的水溶性。可以从金畔购买购买。

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从金畔购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将Calbryte 630 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）将细胞在生长培养基中培养过夜。

b）第二天，将 1X Calbryte 630 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。

注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

c）将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

d）用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）根据需要添加刺激剂，同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 600/640 nm 处测量荧光。

 

产品应用文献

An evolutionary-conserved VPS34-PIKfyve-TRPML1-Myosin II axis regulates the speed of amoeboid cell migration
Authors: Dehio, Philippe and Michard, C{‘e}line and Yam-Puc, Juan Carlos and Mart{‘i} i L{‘i}ndez, Adri{`a}-Arnau and Fabre, Lucien and Schaefer, Thorsten and Wymann, Matthias P and Okkenhaug, Klaus and Soldati, Thierry and Mehling, Matthias and others,
Journal: bioRxiv (2024): 2024–01
 
Heterogeneous signals and soft-geometric network structure in the mouse AV node
Authors: Maltsev, Anna V and Barlas, Yasir and Hazan, Adina T and Zhang, Rui and Goldhaber, Joshua I
Journal: Biophysical Journal (2024): 457a
 
Universal Biomaterial-on-Chip: a versatile platform for evaluating cellular responses on diverse biomaterial substrates
Authors: Atif, Abdul Raouf and Aramesh, Morteza and Carter, Sarah-Sophia and Tenje, Maria and Mestres, Gemma
Journal: Journal of Materials Science: Materials in Medicine (2024): 2
 
Biphasic calcium phosphate recruits Tregs to promote bone regeneration
Authors: Li, Jiaojiao and Zhao, Qin and Wang, Can and Fu, Liangliang and Zhao, Zifan and Tang, Ziqiao and Yin, Chenghu and Wang, Min and Xia, Haibin and others,
Journal: Acta Biomaterialia (2024)
 
Effects of extremely low frequency electromagnetic fields on the tumor cell inhibition and the possible mechanism
Authors: Sun, Jie and Tong, Yingying and Jia, Yu and Jia, Xu and Wang, Hua and Chen, Yang and Wu, Jiamin and Jin, Weiyang and Ma, Zheng and Cao, Kai and others,
Journal: Scientific Reports (2023): 6989
 
A Programmable Microfluidic Platform to Monitor Calcium Dynamics in Microglia during Inflammation
Authors: Jones, Caroline and Shebindu, Adam and Kaveti, Durga and Umutoni, Linda and Kirk, Gia and Burton, Michael
Journal: (2023)
 
Investigating the contribution of the rs13376333 genetic variant to lone atrial fibrillation in human induced pluripotent stem cell-derived atrial cardiomyocytes
Authors: Stogova, Ekaterina
Journal: (2023)
 
Protocol to generate and utilize pancreatic tissue slices to study endocrine and exocrine physiology in situ from mouse and human tissue
Authors: Panzer, Julia K and Caicedo, Alejandro
Journal: STAR Protocols (2023): 102399
 
Probabilistic cell seeding and non-autofluorescent 3D-printed structures as scalable approach for multi-level co-culture modeling
Authors: Buchmann, Sebastian and Enrico, Alessandro and Holzreuter, Muriel Alexandra and Reid, Michael and Zeglio, Erica and Niklaus, Frank and Stemme, G{“o}ran and Herland, Anna
Journal: Materials Today Bio (2023): 100706
 
Photothermal Excitation of Neurons Using MXene: Cellular Stress and Phototoxicity Evaluation
Authors: Wang, Yingqiao and Hartung, Jane E and Goad, Adam and Preisegger, Mat{‘i}as A and Chacon, Benjamin and Gold, Michael S and Gogotsi, Yury and Cohen-Karni, Tzahi
Journal: Advanced Healthcare Materials (2023): 2302330

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Wu, Yanjiao and Xu, Xiaoli and Ma, Lunkun and Yi, Qian and Sun, Weichao and Tang, Liling
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)
 
Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Lu, Jiang and Yao, Xue-qin and Luo, Xin and Wang, Yu and Chung, Sookja Kim and Tang, He-xin and Cheung, Chi Wai and Wang, Xian-yu and Meng, Chen and Li, Qing and others, undefined
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945
 
Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Yang, Gang and Xiao, Zhenghua and Ren, Xiaomei and Long, Haiyan and Ma, Kunlong and Qian, Hong and Guo, Yingqiang
Journal: Scientific Reports (2017): 41781
 
Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Liu, Jia and Du, Qing and Zhu, He and Li, Yu and Liu, Maodong and Yu, Shoushui and Wang, Shilei
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868
 
Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Sun, Xia and Lin, Yi and Huang, Qiansheng and Shi, Junpeng and Qiu, Ling and Kang, Mei and Chen, Yajie and Fang, Chao and Ye, Ting and Dong, Sijun
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594
 
The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Zhao, Lantao and Li, Shuhong and Wang, Shilei and Yu, Ning and Liu, Jia
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542
 
Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Liang, Nan and Wang, Peng and Wang, Shilei and Li, Shuhong and Li, Yu and Wang, Jinying and Wang, Min
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600
 
Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Li, Qing and Lu, Jiang and Wang, Xianyu and others, undefined
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002
 
Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Peng, Xu-Dong and Zhao, Gui-Qiu and Lin, Jing and Jiang, Nan and Xu, Qiang and Zhu, Cheng-Cheng and Qu, Jain-Qiu and Cong, Lin and Li, Hui
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447
 
Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: Hagiyama, M and Inoue, T and Furuno, T and Iino, T and Itami, S and Nakanishi, M and Asada, H and Hosokawa, Y and Ito, A
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

相关产品

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钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 590, AM *细胞渗透性* Cat#20700

新型钙离子荧光探针Calbryte630钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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新型钙离子荧光探针Calbryte630钾盐价格 4245
产品规格

5×50 ug

产品货号

新型钙离子荧光探针Calbryte630钾盐

产品参数
Ex (nm) 607 Em (nm) 624
分子量 1091.06 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：新型钙离子荧光探针Calbryte 630,钾盐

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1091.06

溶剂：水

激发波长（nm）：608

发射波长（nm）：626

 

产品介绍

新型钙离子荧光探针Calbryte 630,钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。x-Rhod-1通常用作红色荧光钙指示剂。但是，x-Rhod-1在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且细胞钙反应非常小。Calbryte 630的开发旨在x-Rhod-1的细胞负载和钙反应，同时保持x-Rhod-1的光谱波长，使其与TexasRed®滤光片兼容。在CHO和HEK细胞中，Cal-630 AM的细胞钙反应比x-Rhod-1敏感得多。Calbryte 630的光谱与FITC，AlexaFluor®488和GFP的光谱完全分离，使其成为与GFP细胞系或FITC / AlexaFluor®488标记的抗体进行细胞内分析多重检测的理想钙探针。Calbryte 630是用于测量细胞内钙的新一代红色荧光指示剂。Calbryte 630 AM的信号/背景比和细胞内保留特性大大提高，使其成为评估GPCR和钙通道靶标以及在活细胞中筛选其激动剂和拮抗剂的强大的深红色荧光指示剂。像其他染料AM细胞上样一样，Calbryte 630 AM酯是非荧光的，一旦进入细胞内部，它就会被细胞内酯酶水解。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的新型钙离子荧光探针Calbryte 630,钾盐。 

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo-3五钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fluo-3五钠盐价格 2111
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fluo-3五钠盐

产品参数
Ex (nm) 506 Em (nm) 515
分子量 879.44 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Fluo-3和Rhod-2是可见光激发钙指示剂中常用的。除非与Ca2 +结合，否则Fluo-3本质上是无荧光的，并且在饱和Ca2 +处的量子产率约为〜0.14，Ca2 +的Kd为390 nM。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Fluo-3,五钾盐 Cat#21017
钙离子荧光探针Fluo-3,五胺盐 Cat#21018

钙离子荧光探针Fluo-3五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo-3五钾盐价格 2111
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fluo-3五钾盐

产品参数
Ex (nm) 506 Em (nm) 515
分子量 959.98 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Fluo-3和Rhod-2是可见光激发钙指示剂中常用的。除非与Ca2 +结合，否则Fluo-3本质上是无荧光的，并且在饱和Ca2 +处的量子产率约为〜0.14，Ca2 +的Kd为390 nM。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Fluo-4, Pentapotassium Salt Cat#20555
钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐 Cat#20562
钙离子荧光探针Fluo-5N, 五钾盐 Cat#20567

钙离子荧光探针Fluo3FF五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo3FF五钾盐价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fluo3FF五钾盐

产品参数
Ex (nm) 506 Em (nm) 515
分子量 981.94 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

不渗透细胞的Fluo-3FF是Fluo-3的类似物，钙结合亲和力低得多，Kd〜10 µM。像Fluo-3一样，该指示剂基本上是无荧光的，但在结合钙时显示出强烈的荧光增强，并且没有光谱偏移。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

 

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura2五钠盐价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura2五钠盐

产品参数
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 751.45 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-2,五钠盐是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，在比例钙指示剂中，常用的是Fura-2和Indo-1。Fura-2可激发，而Indo-1可发射。对于比率成像显微镜，Fura-2是优选的，在比率成像中，更改激发波长比发射波长更实际。结合Ca2 +时，Fura-2表现出吸收位移，可通过扫描300至400 nm之间的激发光谱来观察，同时监测〜510 nm处的发射。Fura-2钾盐是一种不可渗透细胞的荧光探针，用于按比例模式检测Ca2+。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fura-2,五钠盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

An essential role of NAD (P) H oxidase 2 in UVA-induced calcium oscillations in mast cells
Authors: Zhi Ying Li, Wen Yi Jiang, Zong Jie Cui
Journal: Photochemical & Photobiological Sciences (2015): 414–428

Lasting inhibition of receptor-mediated calcium oscillations in pancreatic acini by neutrophil respiratory burst–A novel mechanism for secretory blockade in acute pancreatitis?
Authors: Hui Yuan Liang, Zhi Min Song, Zong Jie Cui
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2013): 361–367

 

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钙离子荧光探针Indo1五钠盐价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Indo1五钠盐

产品参数
Ex (nm) 330 Em (nm) 404
分子量 759.52 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。在紫外线可激发的钙指示剂中，常用的是Fura-2和Indo-1。Fura-2可激发，而Indo-1可发射。对于比率成像显微镜，Fura-2是优选的，在比率成像中，更改激发波长比发射波长更实际。结合Ca2 +时，Fura-2表现出吸收位移，可通过扫描300至400 nm之间的激发光谱来观察，同时监测〜510 nm处的发射。相反，Indo-1是流式细胞仪的首选染料，在这种情况下，使用单个激光激发（通常是氩离子激光的351-364 nm光谱线）更为实用。在无Ca2+的环境中，Indo-1的发射从480 nm移至400 nm（与Ca2 +结合时）。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

 

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