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钙离子荧光探针Fura8AM-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura8AM价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura8AM

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 951.90 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-8, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，虽然Fura-2已被广泛用作优选的激发比率钙指示剂，但它具有某些局限性，例如与单波长钙染料如Fluo-8®和Cal-520®相比灵敏度较低。AAT开发了Fura-8 以进一步Fura-2的钙响应。Fura-8的发射转换为更长的可见波长，与普通滤波器组兼容。它具有相当的钙亲和力（对Fura-2）。Fura-8 AM比Fura-2 AM对钙更敏感，信号/背景比高于Fura-2 AM。我们建议使用Ex / Em = 354 / 530nm和415 / 530nm进行比率测量，即通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Fura 2 滤波片组
Em： Fura 2  滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 355, 415 nm
Em： 530 nm
Cutoff： 470 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

操作说明

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fura-8 ，AM原液。
2.1使用量的Fura-8 ，AM：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fura-8 TM，AM与525.27μL无水DMSO混合。

 

3.使用10μMFura-8 ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度为Fura-8 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFura-8 ，AM，25.6μL10％Pluronic F-127和256μL25mM丙磺舒。下一个，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Fura-8™的终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μMFura-8 TM，AM，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 354/525 nm运行实验。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

钙离子荧光探针Fura8五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fura8五钾盐价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura8五钾盐

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 816.01 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-8 五钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，尽管Fura-2已被广泛用作首选的可激发比率的钙指示剂，但它具有一定的局限性，例如，与单波长钙染料（如Fluo-8®和Cal-520®）相比，灵敏度较低。AAT开发了Fura-8 ，以进一步改善Fura-2的钙反应。Fura-8的发射转变为更长的可见光波长，与普通滤光片组兼容。它具有与Fura-2相当的钙亲和力。与Fura-2 AM相比，Fura-8 AM对钙的敏感性更高，信号/背景比更高。例如，通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fura-8 五钾盐。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

点击查看光谱

实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Fura-8 五钠盐 Cat#21058

钙离子荧光探针Fura8五钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura8五钠盐价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura8五钠盐

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 751.59 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-8 五钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，尽管Fura-2已被广泛用作可激发比率的钙指示剂，但它具有一定的局限性，例如，与单波长钙染料（如Fluo-8®和Cal-520®）相比，灵敏度较低。AAT开发了Fura-8，以进一步改善Fura-2的钙反应。Fura-8的发射转变为更长的可见光波长，与普通滤光片组兼容。它具有与Fura-2相当的钙亲和力。与Fura-2 AM相比，Fura-8 AM对钙的敏感性更高，信号/背景比更高。例如，通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fura-8 五钾盐。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

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实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

 

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钙离子荧光探针Fura-2,五钠盐 Cat#21026
钙离子荧光探针Fura-8 五钾盐 Cat#21057

钙离子荧光探针Rhod2三钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod2三钾盐价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod2三钾盐

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 869.05 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。长波长Rhod-2 Ca2 +指示剂是Fluo-3的有价值的替代品，可用于在具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行实验。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Biomaterial Surface Can Modify HUVEC Morphology and Inflammatory Response by Regulating MicroRNA Expression
Authors: Shuangying Gu, Baoxiang Tian, Weicong Chen, Yue Zhou
Journal: Journal of Biosciences and Medicines (2017): 8

Csseverin inhibits apoptosis through mitochondria-mediated pathways triggered by Ca2+ dyshomeostasis in hepatocarcinoma PLC cells
Authors: M Shi, L Zhou, L Zhao, M Shang, T He, Z Tang
Journal: PLoS Negl Trop Dis (2017): e0006074

GluR3B Ab’s induced oligodendrocyte precursor cells excitotoxicity via mitochondrial dysfunction
Authors: Yi Liu, Yan Chen, Wan Tong Du, Xiu Xiang Wu, Fu Xing Dong, Xue Bin Qu, Hong Bin Fan, Rui Qin Yao
Journal: Brain Research Bulletin (2017)

Spatially Organized β-Cell Subpopulations Control Electrical Dynamics across Islets of Langerhans
Authors: Matthew J Westacott, Nurin WF Ludin, Richard KP Benninger
Journal: Biophysical Journal (2017): 1093–1108

ABT737 reverses cisplatin resistance by regulating ER-mitochondria Ca2+ signal transduction in human ovarian cancer cells
Authors: CHUNYAN YU, XIANRUI JIANG, YE XU, LIANKUN SUN
Journal: International Journal of Oncology (2016): 2507–2519

BAX inhibitor-1 is a Ca2+ channel critically important for immune cell function and survival
Authors: D Lisak, T Schacht, A Gawlitza, P Albrecht, O Aktas, B Koop, M Gliem, HH Hofstetter, K Zanger, Geert Bultynck
Journal: Cell Death & Differentiation (2016): 358–368

Calcium efflux from the endoplasmic reticulum regulates cisplatin-induced apoptosis in human cervical cancer HeLa cells
Authors: Luyan Shen, Naiyan Wen, Meihui Xia, Yu Zhang, Weimin Liu, Ye Xu, Liankun Sun
Journal: Oncology letters (2016): 2411–2419

Failure of Elevating Calcium Induces Oxidative Stress Tolerance and Imparts Cisplatin Resistance in Ovarian Cancer Cells
Authors: Liwei Ma, Hongjun Wang, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Lu Xu, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Ye Xu
Journal: Aging and Disease (2016): 254

Cardiac tissue slices: preparation, handling, and successful optical mapping
Authors: Ken Wang, Peter Lee, Gary R Mirams, Padmini Sarathchandra, Thomas K Borg, David J Gavaghan, Peter Kohl, Christian Bollensdorff
Journal: American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology (2015): H1112–H1125

Tolerance to endoplasmic reticulum stress mediates cisplatin resistance in human ovarian cancer cells by maintaining endoplasmic reticulum and mitochondrial homeostasis
Authors: Ye Xu, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Liwei Ma, Linchuan Zeng, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Zhixin Li
Journal: Oncology reports (2015): 3051–3060

 

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钙离子荧光探针Rhod2三钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod2三钠盐价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 820.73 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-2, 三钾盐是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4™系列钙检测试剂是亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590™具有高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

实验方案

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

 

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

W-5 and quin 2-AM reverse the inhibitory effect of insulin on lipolysis due to dibutyryl cAMP
Authors: Goko H, Matsuoka A.
Journal: Diabetes Res Clin Pract (1999): 101

Calcium chelator Quin-2 prevents crocidolite-induced DNA strand breakage in human white blood cells
Authors: Faux SP, Michelangeli F, Levy LS.
Journal: Mutat Res (1994): 209

Fluorescence lifetime imaging of intracellular calcium in COS cells using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Lederer WJ, Kirby MS, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1994): 7

Possible mechanisms of epinephrine actions in quin-2-loaded platelets refractory to arachidonic acid
Authors: Rao GH, Gerrard JM, Murthy M, White JG.
Journal: Biochem Med Metab Biol (1993): 322

Fluorescence lifetime imaging of calcium using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1992): 131

Involvement of calcium and iron in Quin 2 toxicity to isolated hepatocytes
Authors: Carpenter-Deyo L, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 747

Toxicity to isolated hepatocytes caused by the intracellular calcium indicator, Quin 2
Authors: Carpenter-Deyo L, Duimstra JR, Hedstrom O, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 739

Aspirin, prostaglandin E1 and Quin-2 AM-induced platelet dysfunction: restoration of function by noradrenalin
Authors: Rao GH, White JG.
Journal: Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids (1990): 141

Characterization of indo-1 and quin-2 as spectroscopic probes for Zn2(+)-protein interactions
Authors: Jefferson JR, Hunt JB, Ginsburg A.
Journal: Anal Biochem (1990): 328

Effect of Quin-2 on Ca2+ uptake mediated by Na+i/Ca2+o exchange and 45Ca2+ efflux in rat brain synaptosomes: a requirement for [Ca2+]i
Authors: Blanco P, Martinez-Serrano A, Bogonez E, Satrustegui J.
Journal: Cell Calcium (1990): 25

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐价格 3534
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1 mg

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钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐

产品参数
Ex (nm) 557 Em (nm) 580
分子量 900.02 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力（Kd =~320μM）低于任何其他基于BAPTA的指示剂，并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的，并且表现出强烈的荧光增强，在结合Ca2+时没有光谱移位。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 Cat#21075
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

钙离子荧光探针Fluo8钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fluo8钠盐价格 4245
产品规格

1 mg

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钙离子荧光探针Fluo8钠盐

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 796.53 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-8，钠盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431

P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo-8钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo-8钾盐价格 4245
产品规格

1 mg

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钙离子荧光探针Fluo-8钾盐

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 877.07 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8，钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-8，钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431

P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo8H钠盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo8H钠盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 802.60 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3和Fluo-4常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件以大化其细胞钙响应。Fluo-8®染料的开发是为了细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，大激发波长为~490 nm，大发射波长为~520 nm。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供一系列具有不同钙结合亲和力的优异Fluo-8®试剂（Fluo-8®：Kd = 389 nM; Fluo-8H：Kd = 232 nM; Fluo-8L：Kd =1.86μM; Fluo-8FF ：Kd =10μM）。我们还提供多种包装尺寸，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

使用Fluo-8®AM酯类

1.使用Fluo-8®AM酯：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将Fluo-8®AM酯加入活细胞的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Fluo-8®AM酯原液。

b）在实验当天，将Fluo-8® 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或0.02％Pluronic®F-127的缓冲液中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用浓度范围为4-5 uM的Fluo-8®试剂。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小染料浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Fluo-8®AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的渗漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）在细胞培养箱中孵育或染料装载板室温下为20分钟至一小时。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）运行用Ex / Em比值=490/525纳米

 

使用Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒进行HTS应用

        可以通过直接测量受体介导的cAMP积累或细胞内Ca2+浓度的变化来检测GPCR活化。通过Gq偶联的GPCR靶标产生细胞内Ca2+的增加可以使用Fluo-8®试剂和荧光酶标仪的组合进行测量。荧光成像板读取器（例如，FLIPR，FDSS或BMG NovoStar）具有冷却的CCD相机成像系统，其同时收集来自微孔板（96孔和384孔）的每个孔的信号。这些读板器可以以亚秒的间隔读取，这使得能够捕获响应的动力学，并且具有可以被编程用于连续液体添加的集成移液器。除了对GPCR靶标的强大应用外，我们的Screen Quest Fluo-8钙测定试剂盒还可用于表征钙离子通道和筛选钙离子通道靶向化合物。

钙离子荧光探针Fluo8H钠盐

图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW测定试剂盒和Fluo-4 NW测定试剂盒在HEK-293细胞中测量卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。除去生长培养基，并将细胞分别与100μL的Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒和Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）在室温下温育1小时。通过NOVOstar（BMG LabTech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到终指示的浓度。Fluo-8 NW 的EC 50约为1.2 uM。

与基于Fluo-3或Fluo-4的其他商业钙测定试剂盒相比，我们的Screen Quest 钙测定试剂盒具有以下HTS应用优势：

  • 广泛的应用：与GPCR和钙通道目标一起使用。
  • 方便的光谱波长：大激发波长@ 490 nm; 大发射@ ~514 nm。
  • 灵活的染料加载：室温下的染料加载（而不是Fluo-4 AM所需的37ºC）。
  • 无需清洗，无淬火干扰您的目标。
  • 强大的性能：使用Fluo-4 AM或Fluo-3 AM无法进行钙分析。
  • 强信号强度：比Fluo-4 AM亮2倍;比Fluo-3 AM亮4倍。

使用Fluo-8® 盐

        钙校准可以通过测量具有精确已知的游离Ca 2+浓度的溶液中的指示剂的盐形式（荧光酶标仪中25至50μM）的荧光强度来进行。可以基于30mM MOPS EGTA Ca 2+缓冲液使用校准溶液。通常，水含有微量的钙离子。强烈建议使用30 mM MOPS + 100 mM KCl，pH 7.2作为缓冲系统。可以简单地制备如下所列的0和39μM钙原液，这两种溶液用于制备不同Ca 2+浓度的连续溶液

A.0μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA

B.39μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA + 10mM CaCl 2

 

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

的[Ca] 游离 = K d [F─˚F 分钟 ] / F 大 ─F]

其中F是特定实验钙水平下指示剂的荧光强度，F min是不存在钙时的荧光强度，F max是钙饱和探针的荧光强度。

 

解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的钙结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的K d值。通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或Triton®X-100可用于将指示剂暴露于受控Ca.2+水平的细胞外培养基。

 

试剂应用文献

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Journal: Scientific reports (2018): 1–13

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Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

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Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

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Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

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Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
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Journal: Scientific reports (2017): 17093

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Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

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Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

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Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
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Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

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Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

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Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

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Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo8L钠盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fluo8L钠盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Fluo8L钠盐

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 828.54 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8L, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-8L, 钠盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431

P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo8L钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fluo8L钾盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 909.09 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8L, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-8L, 钾盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

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Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

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Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

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Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

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参考文献

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Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
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Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
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Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

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Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Fluo8FF钾盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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钙离子荧光探针Fluo8FF钾盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Fluo8FF钾盐

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 913.05 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fluo-8FF,钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-8FF,钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
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P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

钙离子荧光探针Rhod4钠盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod4钠盐价格 7092
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod4钠盐

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 815.64 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 Cat#21119

钙离子荧光探针Rhod4钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod4钾盐价格 7092
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod4钾盐

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 880.07 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 Cat#21118

钙离子荧光探针Rhod4AM-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod4AM价格 7092
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod4AM

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 1015.96 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-4, AM

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1015.96

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：524

发射波长(nm)：551

 

Journal: Basic research in cardiology (2017): 44