如何测量LOD，以及我们如何实现荧光素的皮摩尔检测

确定检测限

检测限（LOD）定义为低浓度分析物的存在或不存在可以是使用给定的分析方法确定。样本产生的信号（绿线）必须通过舒适的裕度（蓝线），以便确信分析物

真正被检测到。检测限（LOD）通常为定义为信号的样本浓度等于噪声水平的3倍并且受到系统噪声的限制。

测量荧光素

从5nM到5pM的一系列荧光素稀释液使用0.1NaOH溶液制备，并在10mm内测量路径长度石英比色杯。荧光测量结果.使用WP VIS光谱仪，50μm狭缝，使用450 nm.用于激励的LED。我们自己的快速反应杯支架已连接光谱仪的自由空间访问光谱仪的全f/2.0视野，最大限度地收集光线。荧光素对于低至5pM的样品，在积分时间仅为50ms，平均值为50x。

噪声的重要性

光谱仪测量中的噪声可能包括热噪声.噪声（暗噪声，当探测器未照明时），发射噪声（计数噪声，由光子的概率引起产生电流）、读出噪声（由于检测器电路），以及固定模式噪声（取决于二极管阵列）。杂散光也可能导致噪声，并且应该将其最小化。这个我们50个空白测量的标准偏差（stddev）0.1 M NaOH参考值的波长，并且发现非常低：4到7个计数。

通过设计最大限度地减少杂散光

杂散光是导致LOD降低的一个关键因素。那是为什么我们放置一个我们自己的匹配位于每个光栅中心的体相全息（VPH）光栅光谱仪，使用透射设计和像差校正光学器件，以保持光学器件中的每一个可能的光子路径我们的VPH光栅提供高达40%的效率，具有更均匀的波长和偏振响应，以及与反射光栅相比具有超低散射，增强了我们稳健、热稳定性设计的性能。

检测和定量限度

作为浓度函数的信噪比为荧光素峰绘制，取信号（“样本”-“空白”）与空白的在ln-ln尺度上绘制这一点揭示了高度线性拟合，指示高质量数据。外推到SNR=3，即极限我们系统的检测限（LOD）仅为2pM！

定量限（LOQ）定义了两个可以说样品的浓度不同，需要SNR=10。我们的系统的LOQ被发现是6.6pM。

结论

LOD和LOQ是相当简单的测量方法，可以实现紧凑型光谱仪的性能.以便直接与更灵敏的台式系统进行比较。实现约2pM LOD，WP可见光荧光.该系统证明其自身足够灵敏，可以与昂贵的台式荧光计的典型0.5pM LOD相媲美。它灵敏、紧凑、快速，是集成到生物医学仪器或现场的理想工具。