肽标记策略
肽标记策略
标记肽可以通过修饰分离的肽或在固相合成过程中结合标记来制备。用荧光团标记肽的常用策略包括:
肽合成过程中的标记-可以耐受解封闭程序的染料可以结合到肽链的氨基末端。
2.N端修饰:N端是指蛋白质或多肽链起始处的游离胺基（-NH2）。可以使用胺反应性琥珀酰亚胺酯荧光团对其进行共翻译修饰或翻译后修饰。
3.赖氨酸残基:赖氨酸残基的ε-氨基可以用胺反应性琥珀酰亚胺酯荧光团修饰。
4.C端修饰:C端是指蛋白质或多肽链末端的羧基（-COOH）。它可以在翻译后进行修饰，通常是在C端酰胺化之后。
5.如果肽链上有半胱氨酸，巯基反应蛋白标记可以共价标记合成肽。
6.非天然氨基酸可以在合成过程中结合到肽链中，然后通过生物正交反应（例如基于叠氮化物和炔烃的反应以及酮醛反应）用染料或其他探针标记。
使用 3Dye 差异蛋白质组试剂进行蛋白质标记
差异蛋白质组学可以比较来自不同生物来源的大量蛋白质。通常的例子是经过处理和未经处理的细胞、不同的细菌菌株。即使蛋白质谱中的微小差异也可以通过差异蛋白质组学来发现。
Lumiprobe 3Dye 套件包含 Cyanine2、Cyanine3 和 Cyanine5 染料，它们的光谱不同，但迁移率匹配。因此，用这些染料标记的蛋白质在凝胶电泳中共同迁移。由于使用染料进行的蛋白质标记依赖于 NHS 酯化学，因此赖氨酸残基是标记的主要位点。
二维蛋白质组学的最佳实践意味着使用合并的内部对照样本，该样本本质上是在一个实验中分析的两个样本的混合物。内部对照样品用 Cyanine2 标记，分析样品用 Cyanine3 或 Cyanine5 标记（这两种染料可以互换）。
3Dye 试剂以 5 nmol、10 nmol 和 25 nmol 包装进行预先测量。染料被冻干以延长其保质期。每个包装在使用前均应用 DMF 重新配制。 DMF 质量对于实验和产品保质期至关重要。套件中的染料附带 DMF。
蛋白质混合物的制备是测定中变化最大、要求最高的部分。它超出了协议的范围，因为不同的样品需要非常不同的裂解条件才能获得适合检测的蛋白质混合物。本质上，被比较的两个样品应该在相同的条件下裂解以获得有意义的结果。一般来说，如果实验需要裂解，建议使用基于 CHAPS 的裂解溶液。
通过每 1 nmol 每种染料添加 1 μL DMF（来自试剂盒），制备每种染料的 1 mM 库存溶液。这些溶液在 -20°C 下可稳定保存三个月。为了确保保质期，在打开前将管干燥、全解冻，在关闭前尽可能用惰性气体吹扫。
使用无胺缓冲液（NaHCO3、醋酸盐）或 Tris 缓冲液将蛋白质混合物 pH 调节至 8.5。在单独的小瓶中，准备三个用于标记的蛋白质样品：(1) 第一个蛋白质样品，(2) 第二个蛋白质样品，以及 (3) 两者的混合物（合并的内部对照）。每个样品中的蛋白质浓度理想情况下应为 5–10 mg/mL，但也可以使用低至 1 mg/mL 的浓度。每次反应取 50 μg 蛋白质。
通过取等分的 1 mM 库存溶液并用 DMF 稀释至 0.4 mM 来制备染料工作溶液。
将 1 μL 工作染料溶液添加到反应混合物中：Cyanine3 表示未处理，Cyanine5 表示处理过（反之亦然），Cyanine2 表示合并的内部对照。通过移入和移出混合每个反应，并在黑暗中放置 30 分钟。
通过向每种溶液中添加 1 μL 10 mM 赖氨酸来停止反应（试剂盒中不包含该试剂，但该试剂很容易获得）。
合并三个样品并运行 2D 凝胶。
使用任何能够检测 Cyanine2、Cyanine3 和 Cyanine5 的成像仪进行分析。可以从凝胶上切下蛋白质斑点并通过质谱分析。
FITC 标记的二氧化硅纳米粒子介绍
二氧化硅纳米粒子，荧光素 (FITC) 标记：
Nanocs 提供多种荧光二氧化硅纳米粒子以及具有从紫外区域到近红外区域的荧光信号的二氧化硅微珠。荧光素标记的硅胶珠是绿色荧光颗粒，激发/发射波长约为 490 nm/515 nm。 Nanocs 的二氧化硅颗粒具有较窄的尺寸分布，但具有从 7 纳米到 50 微米的多种尺寸选择。这些颗粒悬浮在 1% 的水溶液中。这些颗粒的标准偏差在所列尺寸参数的10~20%范围内。这些颗粒在诊断试剂和生物测定开发中具有广泛的应用。它们可以用不同的表面涂层和官能团进一步改性。 Nanocs 荧光标记二氧化硅颗粒为这些纳米颗粒的体外或体内应用提供了更多选择。这些颗粒包括从紫外区域到近红外区域的各种荧光染料，包括荧光素、罗丹明、花青染料、Alexa 氟染料。可根据要求提供客户结合和修改。
珠子特性：
浓度：1%悬浮液，其他浓度可根据要求提供；
颜色：绿色至黄色；
激发/发射：~495 nm/515 nm；
储存条件：
储存于 4 0 C。避光。不要冻结。
用 BDP 标记的神经酰胺对高尔基体进行染色
BDP FL 神经酰胺：
将 50 μg BDP FL 神经酰胺溶解在 87.2 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
将 250 μg BDP FL 神经酰胺溶解在 436 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
BDP TMR 神经酰胺：
将 50 μg BDP TMR 神经酰胺溶解在 73.6 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
将 250 μg BDP TMR 神经酰胺溶解在 368 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
BDP TR 神经酰胺：
将 50 μg BDP TR 神经酰胺溶解在 70.8 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
将 250 μg BDP TR 神经酰胺溶解在 354 μL DMSO 中，以获得 1 mM 储备溶液。
将储备溶液储存在-20°C或-80°C避光条件下。避免反复冻融循环。
将 10 mL 的 Hanks 缓冲盐溶液与 10 mM HEPES (HBSS/HEPES)、pH 7.4 测量到 50 mL 塑料管中。其他无血清平衡盐溶液，例如 PBS，也适用于此目的。
（可选）将 1 mM Ca 2+和 0.5 mM Mg 2+添加到缓冲溶液中，以防止活细胞聚集并从玻璃上分离。
在装有缓冲液的试管中添加 3.4 mg (0.34 mg/mL) 脱脂 BSA。
添加 200 µL 1 mM 神经酰胺库存溶液，以获得 5 µM 神经酰胺/5 µM BSA 工作溶液。神经酰胺的稀释取决于细胞类型和密度，应通过实验确定。
所得神经酰胺/BSA复合物溶液可在-20°C下储存在塑料瓶中。
在无菌盖玻片上培养细胞。贴壁细胞可以直接在盖玻片上染色。
从盖玻片中吸出介质。
用适当的介质（例如 HBSS/HEPES）冲洗细胞。
将细胞与 5 µM 神经酰胺/BSA 溶液在 4°C 下孵育 30 分钟。
用冰冷的培养基冲洗细胞几次。
用脱脂 BSA (0.34 mg/ml) 的 HBSS/HEPES 溶液在室温下冲洗细胞四次，持续 30 分钟。
将细胞在新鲜培养基中于 37°C 进一步孵育 30 分钟。
用新鲜培养基冲洗细胞。
（可选）染色细胞可在 4% 甲醛中于 4 °C 固定 2 分钟。在 PBS 中清洗固定细胞两次。
对于荧光显微镜，将带有染色细胞的盖玻片翻转到载玻片上，将它们放置在载玻片和盖玻片之间。
4°C 下将细胞固定在 4% 甲醛中 5 分钟。
固定细胞用 PBS 清洗两次，每次 5 分钟。
将细胞与 PBS 中的 5 µM 神经酰胺/BSA 在 4°C 下孵育 30 分钟。
用脱脂 BSA (0.34 mg/ml) 的 PBS 溶液在室温下冲洗细胞四次，持续 30 分钟。
在 PBS 中冲洗细胞两次。
对于荧光显微镜，使用封固剂将细胞封固在盖玻片下 。
| 最大吸收* | 最大排放量* | |
|---|---|---|
| BDP FL | 503纳米 | 509 纳米** |
| BDPTMR | 542纳米 | 574纳米 |
| BDPTR | 589纳米 | 616纳米 |
含有伯氨基的生物分子的 NHS 酯标记介绍
常见的修饰是荧光标记、荧光猝灭剂和其他报告基团。可以使用活化酯连接炔烃和叠氮基，以使生物分子适应点击化学。
尤其常见的是蛋白质和肽的修饰，因为它们几乎总是含有氨基。其他例子是氨基寡核苷酸的修饰、氨基修饰的DNA和含氨基的糖。
NHS 酯与氨基的反应强烈依赖于 pH 值：在低 pH 值下，氨基被质子化，并且不会发生修饰。在高于最佳 pH 值时，NHS 酯的水解速度很快，并且修饰分子的产率会降低。改性的最佳pH值为8.3-8.5。
水是用于溶解 NHS 酯以进行生物分子标记的常用溶剂。如果NHS酯难溶于水溶液，可首先将其溶解在 二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)中，然后添加到pH 8.3-8.5缓冲液中的蛋白质溶液中。请注意，DMF 可以降解为二甲胺，二甲胺具有鱼腥味，并且能够与活化酯发生反应。因此，标记生物分子时，使用不含二甲胺、无鱼腥味的高质量DMF非常重要。
使用下面的公式或我们的蛋白质标记计算器计算所需的 NHS 酯量：
NHS_酯_重量 [mg] = 8 × 氨基_化合物_重量 [mg] × NHS_酯_摩尔_重量 [Da] / 氨基_化合物_摩尔_重量 [Da]。
8是摩尔过量的NHS酯。它是单标记的经验值，适用于许多常见的蛋白质和肽。然而，在某些情况下，使用更少或更多的 NHS 酯可以增加修饰生物分子的产量。它取决于蛋白质结构、标记所用试剂及其溶解度。 Lumiprobe 产品的摩尔重量可以在相应的产品页面上找到。
例如，要使用 Cy5 NHS 酯（摩尔量 616 道尔顿）标记 3 mg BSA（摩尔量 66500 道尔顿），并获得单标记产物的最大产量，应使用 8 × 3 mg × 616 Da / 66500 Da = 0.22 毫克 Cy5 染料 NHS 酯。
计算反应混合物的体积。标记反应中的最佳生物分子浓度为1-10 mg/mL。标记可以在任何规模上进行，从纳摩尔到几十克。如果标记少量生物分子，请将反应混合物的体积保持在低水平 (10-20 uL)。
将 NHS 酯溶解在 1/10 反应体积的水、DMF 或 DMSO 中。不含二甲胺的DMF或水是优选的溶剂。溶解在 DMF 中的 NHS 酯可在 -20°C 下在溶液中保存 1-2 个月。 NHS酯的水溶液配制后应立即使用。
将生物分子溶解在 9/10 反应体积的 pH 8.3-8.5 缓冲液中。
0.1 M 碳酸氢钠溶液具有适当的 pH 值。另一种选择是 0.1 M 磷酸盐缓冲液。请注意，pH 值是成功用 NHS 酯标记生物分子的最重要因素。避免使用含有胺的缓冲液（有时可以使用基于 Tris 的缓冲液，但不推荐使用。Tris 含有氨基，但对活化酯的亲和力较低）。
在进行大规模标记（使用数百毫克 NHS 酯）时，请注意，由于 NHS 酯的水解，混合物会随着时间的推移而酸化。监测 pH 值，或使用浓度更高的缓冲液。
将 NHS 酯溶液添加到生物分子溶液中，并充分涡旋。在冰上放置过夜，或在室温下放置 1 至 4 小时。
使用适当的方法纯化缀合物：大分子凝胶过滤是最常见的。色谱法是另一种选择。对于蛋白质和核酸，可以使用乙醇或丙酮沉淀。有机杂质（如 N-羟基琥珀酰亚胺、NHS 酯和水解产生的酸）几乎总是可以通过这些方法轻松分离。
蛋白质和其他硫醇化生物分子的马来酰亚胺标记
硫醇与马来酰亚胺的反应是广泛用于生物共轭和标记生物分子（包括蛋白质和肽）的过程。它按照以下方案进行：
马来酰亚胺是对硫醇表现出高选择性的亲电子化合物。虽然马来酰亚胺在自然界中几乎不存在，但硫醇却非常丰富。它们以半胱氨酸残基形式存在于蛋白质和肽中。尽管天然DNA不含硫醇，但具有硫醇基团的合成寡核苷酸可以很容易地制备。
硫醇易于氧化二聚并形成二硫键。因此，半胱氨酸残基形成二硫键，从而稳定蛋白质的三级结构。二硫化物不与马来酰亚胺反应。因此，有必要在缀合前还原二硫化物并排除反应中的氧气。
缀合方案取决于起始组分的溶解度。对于水溶性较低的化合物（如大多数荧光染料马来酰亚胺），必须使用有机共溶剂（如 DMSO或 DMF）。
我们建议采用以下方案将Lumprobe 染料马来酰亚胺与蛋白质、肽和其他硫醇化生物分子结合。
将待标记的蛋白质或其他含有硫醇的分子溶解在塑料小瓶中的脱气缓冲液中，pH 7-7.5（PBS、Tris 和 HEPES 很好，但也可以使用其他不含硫醇的缓冲液）。可以通过在缓冲液上施加真空几分钟或通过惰性气体（氮气、氩气或氦气）鼓泡来对缓冲液进行脱气。对于蛋白质，最佳浓度为 1-10 mg/mL。
添加过量的 TCEP（三羧乙基膦）试剂以减少二硫键，用惰性气体冲洗并关闭。 TCEP 过量 100 倍就可以了。将混合物在室温下放置 20 分钟。
将马来酰亚胺染料溶解在 DMSO 或新鲜 DMF 中（100 uL 中 1-10 mg）。
将马来酰亚胺染料溶液添加到硫醇溶液中（染料过量 20 倍），用惰性气体冲洗小瓶，然后紧紧关闭。
充分混合并在 4°C 或室温下放置过夜。
通过凝胶过滤、HPLC、FPLC 或电泳纯化产物。
对于水溶性差的马来酰亚胺，像大多数染料马来酰亚胺一样，我们建议使用共溶剂（DMF 或 DMSO）。具有良好水溶性的马来酰亚胺（如磺基-氰基马来酰亚胺）可以溶解在水中。如果出现沉淀，请增加混合物中有机助溶剂的含量，以实现更好的标记。
建议仅将透析作为纯化具有良好水溶性的马来酰亚胺的方法。
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Buccutite PE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
产品规格
产品货号
| Ex (nm) | 565 | Em (nm) | 574 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite RPE 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。RPE是具有565nm额定的激发波长和575nm的发射波长的橙色荧光蛋白。 ReadiLink RPE共轭试剂盒提供了一种简单方便的方法，灵活运用于你的抗体与视网膜色素上皮。共轭抗体可以在WB，ELISA和免疫组织化学应用中使用。本试剂盒足够用于2个标记反应，每次多50微克抗体。考虑PE（240 kDa）的大尺寸，抗体在标记反应中使用的量必须总是小于RPE的量。对于任何新的抗体试剂的佳比例，必须通过实验来确定，但50-60微克IgG抗体每100微克的RPE通常是佳结果。 60微克抗体约对应于一个抗体：1:1 RPE的摩尔比。Buccutite RPE抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-PE缀合物
4.1通过向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。
3.抗体-PE共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1312 |
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| Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1311 |
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Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
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产品货号
| Ex (nm) | 651 | Em (nm) | 660 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite APC 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。APC是红色荧光蛋白，其激发波长为651nm，发射波长为662nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进APC与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的结合。 Buccutite APC共轭试剂盒为抗体与APC结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的APC和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定。我们的试剂盒提供预活化的APC，以促进APC与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的结合。我们的预活化APC已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化APC通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite RPE抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-APC缀合物
4.1通过向Buccutite FOL活化的APC（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
4.2将整瓶Buccutite FOL活化的APC溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
4.3抗体-APC结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-APC结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-APC结合物溶液。
3.抗体-APC共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-APC缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
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Journal: J Biol Chem (2006): 8573
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Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记25ug抗体价格 4245
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| Ex (nm) | 565 | Em (nm) | 574 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite RPE 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。R-藻红蛋白（PE）是一种橙色荧光蛋白，其激发波长为565 nm，发射波长为575 nm。AAT Bioquest提供此Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE与抗体和其他蛋白质（例如链霉亲和素和其他辅助试剂）的结合。Buccutite PE偶联试剂盒提供了一种强大而便捷的方法来将抗体与PE偶联。该试剂盒包括预活化的PE和反应缓冲液。整个过程仅需要两次简单的混合，而无需进一步纯化。结合的抗体可以用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2个标记反应，每个标记反应多25 ug。考虑到PE的大尺寸（240 kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于PE的量。任何新抗体试剂的配比必须通过实验确定，但是每50 ug PE中通常使用25 ug IgG抗体可获得结果。我们的试剂盒提供了预活化的PE，以促进PE与抗体和其他蛋白质（例如链霉亲和素和其他辅助试剂）的结合。我们的预活化PE已准备好进行共轭，比传统繁琐的基于SMCC的共轭化学具有更高的产率。此外，我们的预活化PE通过其在蛋白质中含量丰富的氨基与蛋白质偶联，而SMCC化学的目标是必须通过还原抗体来再生的巯基。Buccutite RPE抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-PE缀合物
4.1通过向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。
3.抗体-PE共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1310 |
| Buccutite PerCP抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1353 |
| Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1311 |
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Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记25ug抗体价格 4245
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产品货号
| Ex (nm) | 651 | Em (nm) | 660 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite APC 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。APC是红色荧光蛋白，其激发波长为651nm，发射波长为662nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进APC与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的结合。 Buccutite APC共轭试剂盒为抗体与APC结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的APC和反应缓冲液。整个过程仅需要两次简单的混合，无需进一步纯化。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多25μg抗体。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定。我们的试剂盒提供预活化的APC，以促进APC与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的结合。我们的预活化APC已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化APC通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite APC抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-APC缀合物
4.1通过向Buccutite FOL活化的APC（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的APC溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
4.2将整瓶Buccutite FOL活化的APC溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
4.3抗体-APC结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-APC结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-APC结合物溶液。
3.抗体-APC共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-APC缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-APC缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1311 |
| Buccutite PerCP抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1353 |
| Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1310 |
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Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
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| Ex (nm) | 565 | Em (nm) | 671 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite PE-Cy5.5 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。PE-Cy5.5是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~700nm。对于这种串联颜色，推荐使用682/33 nm和695/40 nm的滤光片组。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy5.5与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的串联结合。 Buccutite PE-Cy5.5共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括活化的PE和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于RPE的量。任何新抗体试剂的佳比例必须通过实验确定，但每100ug RPE 50-60ug IgG抗体通常可获得结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy5.5，以促进PE-Cy5.5串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy5.5串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy5.5串联通过其蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-PE-Cy5.5缀合物
2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Cy5.5（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Cy5.5溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
2.3抗体-PE-Cy5.5结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Cy5.5结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。
3.抗体-PE-Cy5.5共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Cy5.5缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Cy5.5缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| 产品名称 | 货号 |
| Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1341 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1320 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 | Cat#1350 |
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Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
产品规格
产品货号
| Ex (nm) | 565 | Em (nm) | 778 |
| 分子量 | – | 溶剂 | – |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite PE-Cy7 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。PE-Cy7是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite PE-Cy7共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括活化的PE和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于RPE的量。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定，但每100ug RPE 50-60ug IgG抗体通常可获得结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy7，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy7串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy7串联通过其蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-PE-Cy7缀合物
2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Cy7（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Cy7溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
2.3抗体-PE-Cy7结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Cy7结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。
3.抗体-PE-Cy7共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Cy7缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Cy7缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1341 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1320 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 | Cat#1350 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Buccutite PE-Texas Red抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
产品规格
产品货号
| Ex (nm) | 565 | Em (nm) | 613 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite PE-Texas Red 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。PE-Texas Red是流式细胞仪中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于600nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Texas Red串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite PE-Texas Red Conjugation Kit为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括活化的PE和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于RPE的量。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定，但每100ug RPE 50-60ug IgG抗体通常可获得结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Texas Red，以促进PE-Texas Red串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Texas Red tandem准备结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Texas Red串联通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Texas Red抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
点击查看光谱
实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-PE-Texas Red缀合物
2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Texas Red（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Texas Red溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
2.3抗体-PE-Texas Red结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Texas Red结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。
3.抗体-PE-Texas Red共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Texas Red缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Texas Red缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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| 产品名称 | 货号 |
| Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记25ug抗体 | Cat#1341 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 | Cat#1320 |
| Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 | Cat#1350 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Buccutite APC-iFluor 700抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
产品规格
产品货号
| Ex (nm) | 651 | Em (nm) | 710 |
| 分子量 | – | 溶剂 | – |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite APC-iFluor 700抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。APC-iFluor 700 Tandem是APC-AlexaFluor®700Tandem的绝佳替代品，因为它们具有几乎相同的光谱。在某些抗体上，我们的APC-iFluor 700 Tandem比具有更高染色指数的APC-AlexaFluor®700Tandem更亮。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进APC-iFluor 700串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite APC-iFluor 700串联共轭试剂盒为抗体与APC结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的APC-iFluor 700串联和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定。我们的试剂盒提供预活化的APC-iFluor 700串联，以促进APC-iFluor 700串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化APC-iFluor 700串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化APC-iFluor 700串联通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原再生的硫醇基团。Buccutite APC-iFluor 700抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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实验方案
操作步骤
1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-APC-iFluor 700缀合物
2.1通过向Buccutite FOL活化的APC-iFluor 700（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
2.2将整瓶Buccutite FOL活化的APC-iFluor 700溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
2.3抗体-APC-iFluor 700结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-APC-iFluor 700结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-APC-iFluor 700结合物溶液。
3.抗体-APC-iFluor 700共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-APC-iFluor 700缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-APC-iFluor 700缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573
Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016
Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598
Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59
Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113
Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749
Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171
Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9
Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226
[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82
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Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体价格 7092
产品规格
产品货号
| Ex (nm) | 651 | Em (nm) | 700 |
| 分子量 | – | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在2-8度冷藏保存, 避免光照 |
Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。APC-Cy5.5是流式细胞仪中常用的颜色。其主要吸收峰位于651nm，发射峰位于~700nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进APC-Cy5.5与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的串联结合。 Buccutite APC-Cy5.5串联共轭试剂盒为抗体与APC结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的APC-CY5.5串联和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。任何新抗体试剂的比例必须通过实验确定，但每100μgPE50-60μgIgG抗体通常可获得结果。我们的试剂盒提供预活化的APC-CY5.5串联，以促进APC-CY5.5串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化APC-CY5.5串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化APC-CY5.5串联通过其蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。
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1.运行Antibody-Buccutite MTA反应
1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。
2.制备抗体-APC-Cy5.5缀合物
2.1通过向Buccutite FOL活化的APC-Cy5.5（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。
2.2将整瓶Buccutite FOL活化的APC-Cy5.5溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。
2.3抗体-APC-Cy5.5结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-APC-Cy5.5结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-APC-Cy5.5结合物溶液。
3.抗体-APC-Cy5.5共轭物的储存
抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-APC-Cy5.5缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-APC-Cy5.5缀合物冻干并在≤-20℃下储存。
参考文献
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