α-淀粉酶活性的测定

所需材料

1.KPO4-NaCl缓冲液；25℃时含0.01 M氯化钠的0.1 M pH 6.9。将8.71克K2HPO4溶解在500毫升H2O中。用0.1 M磷酸二氢钾（6.8克/500毫升H2O）滴定至pH 6.9。添加氯化钠至0.01 M .小心！在下面的步骤2和3中使用通风罩和搅拌器/加热板。 2.底物溶液；1%可溶性淀粉。通过加热搅拌将1克溶解在80毫升H2O中至约。90°C，冷却并将体积调节至100 ml。 3.显色试剂；44.0毫米3，5-二硝基水杨酸。通过加热并搅拌ca，将1克3，5 DNSA溶解在80毫升0.5 M NaOH中。加入30克酒石酸氢钠，搅拌直至溶解。冷却至室温，用H2O定容至100 ml。储存在琥珀瓶中。室温下稳定30天。 4.麦芽糖标准品；0.01 M .将36 mg麦芽糖一水合物溶解在10 ml KPO4-NaCl缓冲液中。 5.酶溶液。用KPO4-NaCl缓冲液将淀粉酶稀释至0.05毫克/毫升。 6.在适合于100°c加热的试管中制备以下稀释液。 

管	磷酸亚铁锂氯化钠	淀粉酶	毫升	微米	毫升H20
1次测试	0.50	0.01毫升	—–	—–	0.40
2标准	0.5	———-	0.05	0.5	0.45

将所有试管置于25°c下。在0点时，向试管1和6中添加0.5 ml底物溶液，并孵育2分钟。通过添加1.0毫升显色试剂来停止反应。在温度块中以100°加热所有试管10分钟。冷却至室温，向每个试管中加入2.5毫升H2O。让试管在室温下静置10分钟。 7.在540 nm处读取Abs与空白的对比。绘制Abs与麦芽糖μ摩尔的关系图。确定540/μM麦芽糖的斜率。 8.计算比活度，即每毫克淀粉酶在pH 6.9时每分钟释放的麦芽糖微米25°C

哪些因素可能会影响到高锰酸盐指数的测定

人类干细胞测定试剂盒概述

概述

为扩展CD34开发了干细胞-细胞-细胞-细胞-细胞分析试剂盒。 + 细胞及其分化电位作为菌落形成单位(CFU)的评价用标准化的流式细胞读取。

详细产品信息

背景资料

干细胞HSCCU分析试剂盒为造血干细胞和祖细胞的分析提供了一种高度标准化的方法。该工具包将无甲基纤维素细胞培养中的分化与标准化的、基于流细胞的读数相结合,并在显微镜下消除了对用户依赖性、视觉评分的需求。

对于采用流式细胞仪读取的菌落识别,我们提供了一个分析表和一个门控模板。这些分析工具被优化为Mac版本及以上的Mac软件版本。若要接收这些分析工具,请联系当地的技术支持。

应用程序

CD34的特性 + 细胞的分化电位由CFU

计量GFP修饰单元的备选办法

技术规格

工作流程使用干细胞HSCCU测定试剂盒。 HSCS,稀释在斯泰玛斯HSCC-FU分析介质中,被电镀在96井板。细胞增殖和分化14天后,用细胞流式细胞仪对生成的菌落进行染色。

测定总氮的几个注意事项

β-氨基己糖苷酶活性测定试剂介绍

β-己糖胺酶是负责碳水化合物分解的水解酶。具体而言，β-己糖胺酶将末端 β-D-葡萄糖醛酸残基从粘多糖链的非还原末端裂解。在人类中，这些酶存在于许多组织类型的溶酶体中。 β-己糖胺酶活性的丧失会导致代谢疾病和健康问题。检测受检样品中的β-己糖胺酶活性对于疾病检查具有重要意义。

β-己糖胺酶活性比色测定提供了一种简单而灵敏的方法来监测生物样品（组织、细胞、血清、尿液）中的己糖胺酶活性。该测定使用合成的对硝基苯酚衍生物 (R- p NP) 作为底物并释放p NP，可在吸光度 (OD 405 nm) 处进行测量。该测定可以检测各种样品中低至 50 µU 的 NAGase 活性。

应用：

该试剂盒用于测定生物样品中己糖胺酶的活性。

主要特征：

• 快速、灵敏： 线性检测范围（20 µL 样品）：37°C 反应 30 分钟，检测范围为 0.05 至 50 U/L。

• 高通量： 可以在 HTS 液体处理系统上轻松实现自动化，每天处理数千个样品。

储存条件：

该套件在冰上运输。将所有组件储存在-20℃的无霜冰箱中。收到后保质期为12个月。

准备

标准曲线

荧光寿命的测定

荧光寿命的测定

吸收光后，分子在释放吸收的能量之前保持一定时间的电子激发态。在这里，不同的光化学过程以不同的概率相互竞争。除了无辐射失活外，还可以发射光，例如以荧光的形式。
之后激发分子数（n1）已降至1/e的系数（约37%），称为荧光寿命（τ佛罗里达州):

n1（t） = n1（0） e（- t / τ佛罗里达州)

有机染料的衰减行为可以用来识别它。然而，荧光寿命(荧光衰减时间)不是一个固定的量，而是受染料所处环境即溶剂和温度的影响。

ATTO染料 的荧光寿命通常在纳秒范围内（10 -9秒）。对于我们的目录，使用下述“时间相关单光子计数”方法确定 22 °C 水溶液（PBS，pH 7.4）中羧基衍生物的值。为此使用了来自HORIBA Jobin Yvon的使用寿命测量设备TemPro 。


时间相关单光子计数 （TCSPC）
激发后荧光光子的发射是一个统计过程。因此，单个分子保持激发态的持续时间也是一个统计量。然而，如果我们观察许多相同分子的集合，我们会得到一个定义明确的衰变统计量。
在当今常用的荧光寿命测量方法TCSPC方法中，这些统计数据的时间分辨非常好 – 低至皮秒范围（10-12 s） – 并以高检测灵敏度进行测量。为此，用周期性的极短光脉冲照射样品。激发后，样品发射荧光光子。测量第一个光子到达探测器之前的确切时间量。这些单个事件被计数，即作为“计数”输入直方图。随着这种单个实验的非常频繁的重复，最终通过加计数来获得样品衰变曲线的指数过程。

在每个激光脉冲和计数过程之后，必须重置测量电子设备。在此死区时间内无法记录任何光子。因此，以每 100 个激发脉冲仅检测到约 1 个光子的方式选择条件。否则，在较高的速率下，直方图中的短时间会被高估并且衰减曲线会扭曲（“堆积”）。实际上，测量通常以所谓的“时间反转”模式进行，即荧光光子开始时间测量，而由另一个二极管记录的激光脉冲停止时间测量。

在测量染料样品之前，应提供有关染料的以下信息：

• 吸收和荧光最大值，例如来自溶液或文献值的吸收和荧光光谱的测量。

• 荧光衰减时间的近似数量级，例如根据以前的测量、可比系统的测量或文献值估计。

光谱数据决定了激发光源的选择——如今通常使用强激光或半导体二极管——以及用于发射光谱选择的截止滤光片的选择。应选择此滤光片以防止散射的激发光到达检测器。

除了选择合适的激发光源和合适的边缘滤光片外，还必须遵守其他实验要求：

• 样品溶液在激发波长及以上的1cm比色皿中的吸光度应<0.1，以避免重吸收。例如，稀释溶液还可以防止由聚集和浓度缺失引起的问题。

• 散射样品溶液会导致评估期间意外缩短寿命的“出现”。例如，可以通过μ过滤样品溶液来避免这种情况。

• 通常，透明液体在 1 厘米荧光比色皿中以 90° 排列的方式测量。

• 检测时间窗口应足够长（至少 10000 个计数）。

在根据TCSPC原理进行荧光寿命测量的情况下，还需要确保计数率不超过脉冲激发光源重复率的2%。如上所述，这避免了所谓的“堆积”。

为了降低计数率，

• 稀释供试品溶液。

• 中性玻璃滤光片可以插入激发通道，从而降低激发光的强度。

• 可以将波长较长的边缘滤光片插入发射通道，从而减小检测到的荧光的光谱范围。

要将计数率提高到 2%，可以应用反向度量。

在测量荧光衰减时间时，还应测量散射溶液.dem例如0.01%Ludox AS40胶体二氧化硅溶液，以确定仪器功能，即电子器件的响应。这种参考测量的结果可以在以后的数据评估中考虑在内。

通过提供的软件进行数据分析。在这里，测量的数据点由曲线拟合。荧光衰变曲线的理论过程与放射性衰变一样，对应于一阶反应，因此是单指数的。但是，它也可能导致更高的指数曲线，以便更好地拟合测量点。例如，在一个溶液中存在具有不同荧光寿命的不同物种时，可能就是这种情况。

下图说明了一批 阿托 488 卡波西与 天宝装置。可以识别上述参数，例如检测时间窗口（峰计数>10000），使用Ludox溶液的参考测量/提示以及样品的测量。CHISQ = 1.1 且标准差均匀分布的双指数评估结果证明是最佳拟合的。荧光衰减时间 阿托 488 22 °C 水溶液 （PBS， pH 7.4） 中的羧基为 4.1 ns，该样品中的相对比例为 96.78 %。



软件中选择的补偿曲线的质量以及确定的荧光寿命的正确性等由参数χ2 （CHISQ，XSQ）和加权残差。
良好的契合度可以通过以下方式识别：

• χ 2 < 1.2 并且在添加另一个组件时没有显着变化（单指数 -> 双指数等）

• 加权残差的均匀分布，标准差

• 与以前的测量值或文献值一致

商业设备的供应商提供大量的手册和产品文档，通常详细描述相关设备的正确操作和所提供的软件。通过遵守给出的说明，例如，测量具有已知荧光衰减时间的染料，您将拥有必要的常规和经验来测量所用设备的“正确”寿命

荧光量子产率的测定

除了荧光的光谱位置外，荧光量子产率（η fl；英文fluorescence quantum y field，QY）是荧光团的一个重要光学参数。除了消光系数的大小，当染料用作荧光标记时，量子产率的水平特别决定了获得的信号强度：因此在英语用法中，消光系数和量子产率的乘积被称为作为荧光团的“亮度”。

量子产率本质上取决于染料的分子结构，但也受到许多外部因素的影响。这些包括环境的温度、粘度、极性和pH值。这种环境可以由溶剂分子和任何溶剂组成，也可以由例如偶联的生物分子或细胞膜组成，荧光染料位于其附近。通过改变荧光，可以得出有关环境某些特性的结论：可以说，荧光染料充当分子探针。

荧光量子产率定义为以荧光形式发射的光子数（= 光量子）与样品先前吸收的光子数之比：如果所有



吸收的光子都以荧光形式发射，则量子产率为 1 或 100 % 获得。然而，激发态的非辐射失活过程总是与发射竞争，因此部分吸收的能量以热量的形式释放到环境中。

正是这种现象被用于绝对判定通过“量热”方法（例如热开花方法）的量子产率。这需要相对复杂的测试设置以及对测量概念和评估的全面理论理解。

更简单地说，荧光团（样品）的未知量子产率可以通过将其与荧光光谱仪中标准或参考染料（参考）的已知量子产率进行比较来确定。这种所谓的相对确定可以通过不同的方式进行：

• 在单次测量中比较样品与参考染料

• 在几个单独的测量中将样品与几种参考染料进行比较

• 将样品与不同浓度的参考染料进行比较，并对获得的测量值进行后续评估。

结果的统计准确性随着进行的比较测量的次数而增加。

使用相对方法的理论先决条件是要比较的两种溶液，样品和参考，在激发波长下具有相同的吸收，因此吸收相同数量的光子。然后两种溶液在相同条件下记录的积分荧光光谱的商（IF = 荧光带的面积）给出两种染料的量子产率比，这样就可以很容易地计算出未知的量子产率：



记录样品和参考的整个荧光光谱（积分荧光强度）的重要性通过以下示例用这种比较方法进行了说明：染料



ATTO 488羧基和ATTO 430LS羧基在吸收光谱的交叉点被激发（相同的吸收) 和测量的荧光光谱。与标准品（罗丹明 6G）的比较测量导致ATTO 488羧基的荧光量子产率为 80%。使用此值，使用描述的相关方法获得ATTO 430LS的 65% 的值羧基。另一方面，如果您只查看相应荧光最大值处的强度，您只能从ATTO 488羧基的已知 80% 中获得 33% 的ATTO 430LS羧基。这种强烈的差异是由于荧光带的宽度不同，即两种染料的荧光光谱分布不同。 通过使用相同的测量参数，可以从设备端实现用于记录样品和参考荧光光谱的相同条件。这些包括光束路径的几何形状（例如 90° 或正面布置）、检测器放大（增益）、狭缝宽度（或带通）和相同的激发波长。


例如，可以选择样品和参比的长波吸收带的交点作为激发波长。然后，在染料条带的相应最大值处的吸收可能略有不同。
使用示例 阿托 488 羧基和 阿托 532 羧基在各自的吸收最大值处的吸光度值略有不同，这一点变得很清楚：在记录了两种测量溶液的吸收光谱后，可以通过叠加两种光谱来确定两种溶液具有相同吸光度（此处为0.0183）的交点（此处为513.1 nm）。（对于较小的值，吸光度和吸光度相同。



另一方面，如果决定在样品和参考的吸收最大值处激发，则两种溶液在各自波长下必须具有相同的吸收。在所示示例中，ATTO 488羧基可在 500 nm 激发，ATTO 532羧基可在 532 nm 激发；两种溶液的吸光度均为 0.0420。



在这种情况下，必须在荧光测量中对两个激发波长下的不同激发强度进行相应的校正。在现代荧光光谱仪中，这种与波长相关的强度差异由光电二极管确定为标准，同时还测量激发光源随时间的强度波动。此校正必须在测量期间通过设备软件激活，因为此后将无法再进行。

此外，所选测量范围应覆盖整个荧光光谱，即长波边缘的测量强度应几乎降至检测器噪声水平。

即使满足所有这些要求，荧光量子产率的精确测定在实践中也非常苛刻，需要做好充分的准备和仔细的测量。

 
关于量子产率测量和可能的误差来源的说明
 

• 参比染料必须合适，并且必须足够精确地知道其量子产率。例如，可以通过将其与另一个参考进行比较来确保这一点。

• 参比染料的选择方式应使其能够在与样品相同的范围内被吸收，即激发。理想情况下，两个吸收光谱重叠，并且可以在荧光测量期间在两个波段的交叉点激发。

• 必须保持所有玻璃器皿和比色皿绝对清洁。

• 使用的溶剂应具有“光谱学”规格，并应检查其固有荧光。

• 例如，如果由于溶解度的差异而将不同的溶剂用于样品和参比，则必须通过在计算中包括两个折射率n来考虑这一点：

• 对于荧光测量，应使用光程长度为 10 mm 的标准荧光比色皿。

• 为了减少重吸收效应的发生，10mm电池中的吸光度不应超过0.05。
  在较高浓度下，可能会发生所谓的内部滤光片效应，这极大地伪造了荧光测量：
  一方面，激发光不再深入溶液，这可能导致比色皿中心的样品激发减少。
  另一方面，从那里发出的荧光在离开比色皿之前通过溶液时被光束路径中的其他荧光团部分（重新）吸收。这导致荧光光谱在短波范围内被切断。

• 必须注意确保吸收测量的基线不会因未溶解颗粒或脏比色皿窗口的光散射而失真。

• 顺便说一下，这种散射现象也会干扰荧光测量，因为散射光可以到达溶液中颗粒或比色皿表面上的检测器。因此，在测量前应μ过滤所使用的溶剂和溶液，并用不起毛的布从外部擦拭比色皿窗口。注意：指纹！

• 荧光测量的测量参数（增益、狭缝宽度）必须适应发生的荧光强度，以便所使用的检测器（例如光电倍增管）不会因过多的光而损坏。测量必须在探测器的线性范围内进行，因为只有这样，测量的光强度才会与照射的光强度成正比。

• 人们应该意识到温度对测量结果的影响。

 
许多制造商现在都包含使用其荧光光谱仪测量荧光量子产率的精确说明和工作说明，也可以从相应网站下载。通常也可以在这里找到有关相应设备设置和测量参数的详细信息和注意事项。正在努力开发荧光标准的方法和程序。我们给出的荧光光谱是用HORIBA Jobin Yvon的

Fluorolog 3荧光光谱仪测得的。为此，ATTO-染料在 22°C 下检查水溶液（PBS，pH 7.4）中的相应羧基衍生物。测量是在标准的 90° 排列中进行的，具有水平的激发和发射极化。为了确定ATTO染料的荧光量子产率，将具有荧光量子产率的荧光团用作参考染料。取决于光谱范围，例如B、使用罗丹明6G、罗丹明630等。

荧光光谱的一般信息

在吸收光谱仪的情况下，几乎只使用双光束装置，其中样品溶液和参比物质（例如带有纯溶剂的比色皿）“同时”扫描。结果，获得的频谱成为所谓的 设备特性 这是由于单色器（光栅、狭缝）和镜子反射的不同透射率，除其他外，对于不同的偏振光和特定的检测器特性。

由于荧光光谱中原则上不存在这种参考光束路径，因此必须以不同的方式校正每个荧光光谱仪的器件特性，具体取决于光学元件和光束路径的路径，这些特性是不同的，以获得样品的“真实”荧光光谱。

在现代荧光光谱仪的情况下，控制和评估软件通常包含所谓的 校正功能，可用于在测量过程中直接或通过用户的后续指令校正被测设备光谱。此校正功能由制造商创建，例如，通过将相关设备测量的发射光谱与校准灯的实际发射光谱进行比较。

除此之外，在每次荧光测量中都应考虑另一种现象。这些是 荧光偏振： 只有当荧光团在激发态的生命周期内能在培养基中自由移动时，才能获得非偏振荧光。在这种情况下，水平和垂直偏振荧光的比例是相同的。

自由迁移率受溶剂的温度相关粘度和分子体积的影响。

在丙酮、甲醇、乙醇和水等低粘度溶剂中，这种极化效应通常只在室温测量中寿命在纳秒范围内的小型有机荧光团中起次要作用。

但是，如果样品和/或参比的荧光由于分子尺寸和/或荧光寿命的强烈不同而不再非偏振甚至不同的偏振，则可能导致测量的荧光光谱伪造，从而导致错误计算的量子产率。

为了确定荧光基团溶液的荧光偏振，有一种相对简单的方法，可以在J. R. Lakowicz中找到其理论推导和解释。

研究与大分子（聚合物、蛋白质、DNA等）偶联的荧光标记物的荧光偏振，其自由迁移率在其激发态的生命周期内受到限制甚至受到抑制，可以与FRET技术相结合，为分子结构（几何形状，距离，方向）和相关动态现象提供重要的见解。

如何进行土壤电导率的测定

土壤电导率（soil conductivity）指土壤传导电流的能力，通过测定土壤提取液的电导率来表示。测定结果单位以mS/m（即10μS/cm）表示。当测定结果大于或等于100mS/m（即1000μS/cm）时，保留三位有效数字；当测定结果小于100mS/m时，保留至小数点后一位。

土壤电导率是土壤提取液中的阴离子和阳离子的总和，代表了土壤的含盐量。测定土壤的电导率可以直接反应出土壤混合盐的含量，对于确定各种田间参数时空分布的差异有重大意义，从而也为基于信息和知识的现代精细农业的普及推广打下基础。

原理

国家标准HJ 802-2016《土壤 电导率的测定 电极法》给出了土壤电导率的测定方法，要求取自然风干的土壤样品，以 1:5（m/V）的比例加入水（电导率不高于0.2mS/m，即2μS/cm），在 20℃±1℃的条件下振荡提取，然后用电导率仪测定 25℃±1℃条件下提取液的电导率。需要注意的是，当待测土壤的提取液电导率小于1mS/m（即10μS/cm）时，空气中的二氧化碳和氨对电导率的测定影响较大，在封闭的小空间中进行操作，可消除或降低其干扰。

方法

（1）样品准备

● 按照HJ/ T 166的相关规定采集、制备和保存样品。

（2）标定

● 配置电导率标准溶液或使用市售电导率标准溶液

● 使用电导率标准溶液校正电导率仪

（3）样品制备

● 称取 20.00 g 土壤样品于 250 ml 振荡瓶中，加入 20℃±1℃的 100 ml水，盖上瓶盖，放在往复式水平恒温振荡器上，于 20℃±1℃振荡 30 min。静置 30 min 后，过滤或离心，提取液收集于100 ml 烧杯中，待测。

● 相同的步骤做空白试样

（4）测量

● 用水冲洗电极数次，再用待测的提取液冲洗电极。将电极插入待测提取液，按照电导率仪的使用说明书要求，将温度校正为25℃±1℃，测定土壤提取液的电导率。直接从电导率仪上读取电导率值，同时记录提取液的温度。

● 相同的步骤测试空白试样。空白电导率值不应超过1mS/m（即10μS/cm）。否则，应查找原因，重新测定。

● 记录测定结果。

四、仪器及配件推荐