Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒 *生物发光法* 利用碱性磷酸酶底物产生冷光的特性，来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。这种磷酸酶荧光底物在磷酸酶催化下产生的荧光产物具有强烈的荧光。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。本试剂盒具有非常高的灵敏度，可用于对灵敏度有要求的分析中。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液（组分D）（50μL）
5.在室温下孵育10-30分钟
6.监测发光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
将100μL含有0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水加入到碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位）的小瓶中，以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。 注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，在H2O-0.1％BSA中以1：100的比例获得10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。 然后取10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。 注意：应废弃未使用的碱性磷酸酶标准品系列稀释液。

3.工作溶液

将磷酸酶底物（组分A）的全部内容物与反应缓冲液（组分B）混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 避光。

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样品操作及分析

表1.固体白色96孔微孔板中碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

1.4将50μL测定缓冲液（组分D）加入碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，用测定反应混合物使总碱性磷酸酶测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液（组分D），总体积为75μL/孔。

1.5在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.6用标准发光板读数器监测发光增加。

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意：由于生长培养基与磷酸酶底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4将100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液加入细胞孔中。

2.5将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.6将50μL（96孔板）或25μL（384孔板）的测定缓冲液（组分D）加入含有工作溶液的细胞孔中。

2.7在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

2.8用标准发光板读数器监测发光增加。

参考文献

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