哪种类型的抗体适合我?

哪种类型的抗体适合我?

对于大多数实验室来说,正确的决定取决于科学和成本的某种结合。需要考虑的一些问题是:

您需要多少材料以及需要多长时间?

早期探索型项目可能只需要有限数量的材料,或者您的工作流程可能一次仅使用几微克的抗体。利用多克隆生成对于这些情况非常有效。兔子是多克隆抗体的行业标准,因为它具有强大的免疫系统,并且可以根据需要灵活地一次生产多年的抗体。如果您需要预先大量的材料而不是长期使用,那么对较大的动物(例如山羊)进行免疫可能会有所帮助。 

然而,如果您正在尝试生产用于有可能无限期使用的检测的试剂,那么单克隆生产可能更理想。

抗体的活性是否必须始终相同,或者某些批次间的差异在您的系统中是否可行?

通过多克隆生产,动物得到免疫,您的测试物品就成为最终收集到的一切。随着时间的推移,反应可能会发生变化或成熟,但可以通过在检测中使用一致量的抗体来减轻这种情况。 

同时,单克隆生产的明确目的是执行多个筛选步骤,以找到表达适合您的检测反应的抗体的单个细胞系。只要能够保持稳定性,该细胞系就应该能够在您需要时表达抗体。最终一致性的最终保证是对抗体的可变区进行测序并将其生产为重组蛋白。 

该项目有时间限制吗?

多克隆项目平均需要三个月的时间,而分离出具有所需性能的特定单克隆细胞系可能需要六个月的时间。此后生产重组蛋白形式的抗体可能还需要三个月或更长时间。 

您是否已经拥有希望与新生成的材料并行使用的现有抗体?

无论您当前拥有的抗体是多克隆还是单克隆,请选择不同的物种来开发第二抗体。这样您就可以用单独的二抗进行探测并同时查看两种反应性。例如,在鸡、山羊或豚鼠中制备多克隆是最常选择与现有兔抗体并行使用的选项。 

您的预算是多少?

由于固有的成本效益(平均单克隆成本约为平均多克隆成本的六倍),同时多种抗体的高通量需求很可能会利用多克隆生产。然而,对于早期诊断或治疗,以单克隆项目开始可能会更好地满足您的整体需求,并在项目加速方面带来红利。

如何选择正确类型的灯泡?

如何选择正确类型的灯泡?

现在大多数人都知道,市场上的 LED 灯可以取代许多常用的灯。然而,您可能注意到它们比要更换的灯泡类型贵几倍。是否值得冒险投资更持久、更高效的替代方案?这取决于几件事,包括你支付多少电费、你每天使用光源多少小时、你所比较的两种灯有多贵,以及更换灯有多困难。

存在一个简单的公式,可以使用以下输入来计算灯一年的运行成本:

  • 每千瓦时电价

  • 电源消耗的瓦数

  • 源平均每天打开的小时数

为了计算灯泡一年的使用成本,我们使用以下公式:

如何选择正确类型的灯泡?

使用这个公式,我们可以比较几种光源每年的使用成本,然后可以了解切换到 LED 可以多快地收回更昂贵的初始成本。您所在地区的电价越贵,灯每天打开的时间越长,LED 就能更快地“收回成本”。

 

我住在纽约,电费相对昂贵。平均价格为23美分/千瓦时。例如,以下是我为客户的一栋办公楼运行的一些样本数字:

每周使用50小时; .23/千瓦时

每根荧光灯管每年的电费:19.14 美元

每个 LED 灯管每年的电力成本:8.97 美元

每个 20 杆卤素灯每年的电力成本:29.90 美元

每个 20 杆 LED 每年的电力成本:每年 3.59 美元

比较不同灯的平均预期寿命也很有用。白炽灯和卤素光源通常可持续使用一到数千小时。荧光源的使用寿命通常为 5 至 15,000 小时。 LED 光源需要每 25 至 5 万小时更换一次。考虑到一年通常有 8760 小时,您可以根据平均日常使用情况快速了解您预计灯泡可以使用多少年。如果一两年需要更换一盏灯,那么改用更高效、更耐用的光源通常是一个合乎逻辑的财务决策。

Bulbtronics 于 1976 年开始生产普通的特种汽车替换灯泡产品线,作为稀缺灯泡供应商。随着我们的成长,Bulbtronics 成为特定市场的各种灯泡、灯、LED、电池和配件的可行来源。我们为自己的知识感到自豪,并致力于追求高标准。 

水凝胶类型和选择

水凝胶类型和选择

水凝胶是含有用水膨胀的连接聚合物网络的凝胶状材料。可用于细胞培养的水凝胶有多种形式,用于复制细胞外基质(ECM)的功能——细胞外基质是组织中包围和支持细胞的材料。这种 ECM 本身就是一种复杂的水凝胶。

除了提供物理支持并允许分子进出细胞外,ECM 还包含锚定和指导细胞的功能基序。不同组织类型之间 ECM 的组成存在显着差异。例如,在连接肌肉和骨骼的肌腱中发现的 ECM 含有大量蛋白聚糖

水凝胶类型

广泛使用的水凝胶替代品包括:

  1. 植物来源的水凝胶。

例如:海藻酸盐(源自褐海藻)、琼脂糖(红海藻)和纤维素(例如 Growdex®,源自木浆)

  1. 动物源性水凝胶

示例:明胶(通常源自猪软骨)、胶原蛋白(皮肤或肌腱)、纤维蛋白(血液)、Jellagen®(水母)和(例如 Matrigel®)小鼠体内生长的肿瘤)

  1. 合成水凝胶

示例:聚丙烯酰胺(仅适用于 2D 细胞培养)和聚乙二醇 (PEG)

  1. 复合材料

示例:明胶/多糖、肽/琼脂糖

  1. 自组装多肽 (SAPH)

示例:PeptiGel®

使用哪种水凝胶?

研究人员越来越多地从动物源性水凝胶转向限定的凝胶。这些定义的水凝胶可以清楚地了解水凝胶对细胞培养系统的影响。自组装多肽水凝胶(例如 PeptiGel®)具有很大优势,因为它们可以从头开始定义和构建,仔细添加所使用的特定细胞所需的功能。 PeptiGel® 不仅仅是一种肽,而是一个家族。 PeptiGel® 允许采用定制的 ECM 方法,而不是一刀切。

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

RNA 测序 (RNA-seq) 是一项革命性技术,改变了基因组学领域。它为研究人员揭示细胞和分子水平上发生的许多复杂过程开辟了新途径。与 DNA 测序不同,RNA-seq 通过提供任何给定时间所有活性基因的快照来深入了解基因组的功能元件。那么,这如何帮助用户对不同的细胞类型进行分类呢?请继续阅读以了解更多信息。

RNA 测序在细胞类型分类中的威力

RNA 测序已成为细胞类型分类的强大工具。它使科学家能够识别特定的细胞类型并了解它们在各种生物过程中的作用。这是因为 RNA-seq 能够分析单个细胞中的基因表达水平。许多研究领域都将从这种开创性的方法中受益,但它在研究肺纤维化等疾病方面已经显示出非凡的潜力,在这些疾病中,不同细胞群的作用尚未全了解。

单细胞 RNA 测序:游戏规则改变者

单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 将 RNA 测序提升到一个新水平。它使科学家能够分析单个细胞的转录组,提供细胞类型和状态的高分辨率视图。与传统的 RNA 测序方法相比,这是一个重大进步,传统的 RNA 测序方法提供大量细胞的平均基因表达谱。

在最近一项题为“单细胞 RNA 测序揭示肺纤维化中不同上皮和间质谱系的促纤维化作用“的研究中,scRNA-seq 被用来揭示肺纤维化的复杂细胞景观。该研究使用 10x Genomics Chromium 平台进行单细胞 RNA 测序,该平台生成乳液中的单细胞凝胶珠 (GEM),用于逆转录过程以创建 cDNA。然后对该 cDNA 进行扩增并用于测序。

DeNovix 在 RNA 测序中的作用

DeNovix DS-11 FX+ 分光光度计/荧光计在这项研究中发挥了至关重要的作用。该仪器用于定量 RNA,这是 RNA 测序过程中的关键步骤。RNA的定量确保了测序过程有足够的材料,并有助于保证样品的质量。这是 10x Genomics 平台单细胞 RNA 测序的准备步骤。

细胞计数是 RNA 测序的另一个重要准备步骤。在一项相关研究“模拟人类肺细胞暴露于野火中发现异常的 lncRNA 特征“中,DeNovix CellDrop™ 系统用于在 0.4% 台盼蓝 1:1 稀释液中对人类永生化支气管气管细胞 (AALE) 进行计数,并在其死亡前 24 小时进行计数。直接烟雾暴露(DSE)。暴露于气液界面 (ALI) 室后,细胞用于 RNA 测序分析,以识别 IncRNA 的变化。结果表明烟雾成分对于野火烟雾的分子效应的重要性。具体来说: 

“我们的结果阐明了化学成分(以及地理来源)在评估野火烟雾暴露可能导致的呼吸系统健康风险方面的重要性。我们使用通过实验生成的 RNA-seq 数据进行公正的分析,旨在识别差异表达的转录本,在这里,通过严格和全局的分析,我们证明不同的野火烟雾会诱导 lncRNA 的异常表达。”

机器学习和 RNA 测序

机器学习是另一种越来越多地与 RNA 测序结合使用的工具。通过训练已知细胞类型的数据,机器学习算法可以根据细胞类型的基因表达谱对细胞类型进行分类。这可以大大提高细胞类型分类的准确性和效率。

RNA测序的应用

RNA-seq 的应用广泛且多样。从了解疾病中细胞群的复杂性到发现选择性剪接变体,RNA-seq 是现代基因组学库中的多功能工具。

RNA 测序的未来

随着新技术和方法的不断开发,RNA测序的未来是光明的。对不同 RNA 分子及其表达水平的研究不断增长,这将与 RNA-seq 的进步契合,并扩大我们可以理解的细胞类型的数量。 

在 DeNovix,我们很自豪能够成为这个令人兴奋的领域的一部分。我们邀请您探索我们的产品和服务范围,并与我们一起突破 RNA 测序的可能界限。使用我们的组合分光光度计/荧光计和开创性的自动细胞计数器,用户可以优化 RNA 测序的准备步骤,以保证最高的质量。我们可以一起继续解开细胞的秘密,并在分子水平上增进我们对生命的理解。

小分子抑制剂的类型有哪些?

小分子抑制剂的类型有哪些?

  1. 不可逆抑制——抑制剂通常通过共价连接与酶结合,从而不可逆地使其失活。抑制剂可以破坏酶的结构和功能

  2. 可逆抑制——可逆抑制剂通过非共价、更容易逆转的相互作用使酶失活。与不可逆抑制剂不同,可逆抑制剂可以与酶解离。然后酶的活性就可以恢复。可逆抑制可分为以下几种:

竞争性抑制——当与底物分子非常相似的分子结合到活性位点并阻止实际底物的结合时,就会发生竞争性抑制。

非竞争性抑制——当抑制剂在活性位点以外的位点与酶结合时就会发生非竞争性抑制。这个替代位置称为变构位点。结果,活性位点被改变,底物和酶不再像锁和钥匙一样组合在一起。因此,酶不能催化该反应。由于抑制剂不与底物直接竞争,因此增加底物水平不会降低抑制剂的作用。

非竞争性抑制-非竞争性抑制剂仅与酶-底物复合物结合,而不与游离酶结合。

拮抗剂:与受体结合时不产生生物反应,而是阻断或降低激动剂的作用。它可以是竞争性的,也可以是非竞争性的。

阻滞剂:又称受体拮抗剂。它们是与受体结合并阻断激动剂作用的配体。

激动剂:一种能够结合并激活受体的药物,导致可能模仿天然物质的药理反应。它可以分为全、部分或逆向。

常见培养基类型及适配细胞

常见培养基类型及适配细胞

常见培养基类型及适配细胞

DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium)

 

DMEM是由美国科学家Eagle于1959年改良的,多用于上皮细胞,神经元、胶质细胞、平滑肌细胞。

        成分:DMEM包括基础培养基,如高糖量的DMEM和低糖量的DMEM。DMEM包含的主要成分包括高浓度的葡萄糖、氨基酸、维生素、盐类、L-谷氨酰胺和胰酶抑制剂。适用范围广。

MEM(Minimum Essential Medium)

        MEM最早由Eagle于1959年开发。可用于成纤维细胞和原代大鼠星形胶质细胞等。

        成分:MEM为低基本培养基。MEM可以具有不同的变种,如Eagle's MEM和Earle's MEM,它们在成分和用途上略有不同。

RPMI-1640(Roswell Park Memorial Institute Medium 1640)

 RPMI-1640最早是由Moore等人1966年开发的,多用于淋巴细胞和肿瘤细胞的培养。

        成分:RPMI-1640是一种富含氨基酸、维生素和微量元素的培养基。

F12(Ham's F-12 Nutrient Mixture)

  F12培养基最早是由Ham于1965年开发的。多用于MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞。

        成分:F12包括氨基酸、葡萄糖、核酸、维生素和盐类。另有是 DMEM 和 F12 的 1:1 混合物的DMEM/F-12 培养基。

现有的抗肿瘤前药类型

现有的抗肿瘤前药类型

前药是在体内通过酶或非酶作用释放活性物质的化合物。体外活性较低或无活性。大多数情况下,前药是简单的化学衍生物。它可以通过一种或两种化学或酶催化转化为活性母体药物。

利用前药修饰来优化先导化合物,可以提高药物的生物利用度,增加药物的稳定性,减少毒副作用,促进药物的长效。在肿瘤治疗研究中,一些研究人员设计合成了一些抗肿瘤前药,可以极大改善目前临床使用的大多数化疗药物毒性高、非选择性、物理性质差等缺点。

目前开发的抗肿瘤前药主要类型如下:

1.脂质体前药

通过前药设计优化先导化合物需要三个条件。首先,根据生物活性药物分子的性质,针对治疗需要进行化学修饰。其次,进入体内后,无论是否需要酶的作用,都必须恢复。并且前药本身不表现出生物活性。

前体脂质体可用于重建脂质体。在固体制剂的开发中,可以将构成脂质体的膜材料、药材和固体载体通过适当的方法制成颗粒或粉末等干燥剂型。它们通常具有良好的流动性,使用前加水即可分散或溶解到脂质体溶液中。

在肿瘤药物的研发中,脂质体前药系统具有能够在血液中停留较长时间、降低药物毒性、增加药物在靶点的聚集、提高药物疗效等优点。 。

将前药与脂质体结合有助于提高脂质体的包封率和脂药比。也避免了前药在体内的不稳定,更容易实现前药的靶向递送。

这种将药物分子与脂质体形成分子相结合的新型药物递送方法,为难以包封在脂质体中的药物,如亲水性药物,获得高包封效率提供了新的途径。

2.卡培他滨抗肿瘤前药

卡培他滨(CAP)是胸苷酸合酶(thymidylate synthase,TS)抑制剂。它是一种前药,采用化学方法将氟尿嘧啶(FU)转化为化学结构。它含有氨基甲酸酯结构能,能以完整分子的形式迅速被肠粘膜吸收。

CAP是一种口服氟嘧啶核苷类似物,具有靶向作用。它可以在肿瘤组织中选择性激活,产生高浓度的活性细胞毒物质,从而提高肿瘤患者的耐受性,最大限度地发挥抗癌活性。由于它不表现出生物活性,因此避免了口服FU引起的许多不良反应。

3.水溶性姜黄素前药

合成负载聚乙二醇、可生物降解的姜黄素(Cur)前药,解决Cur的水溶性问题,增强疗效。此外,还为新的Cur制剂的开发奠定了基础。方法以单甲氧基聚乙二醇为载体,氨基酸为连接臂,合成前药;通过紫外光谱和核磁共振波谱对合成产物的结构进行了鉴定;其在水中的溶解度通过直接观察法直接观察;最后通过MTT法分析其体外抗肿瘤活性及特性。结果实验成功合成了Cur前药,方法简单,合成率高,水溶性良好。它可以缓慢释放而具有抗肿瘤作用,显示出良好的应用和发展前景,值得进一步研究和开发。

4.紫杉醇前药

目前紫杉醇前药的开发主要是提高其水溶性,克服紫杉醇在水中溶解度低的问题。同时降低药物毒性,提高抗肿瘤活性。研究发现紫杉醇前药具有无需抗过敏预处理、静脉滴注时间短、MTD高、疗效好、毒性低等特点,可以较好地解决紫杉醇和聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)水溶性差的问题。 EL)。其在药代动力学、药效学、毒副作用等方面具有明显优势,临床应用前景良好。

5.酶激活抗肿瘤前药

根据激活前药的工具,前药可分为两类:靶向酶前药和靶向生物膜载体前药。靶向酶前药与相应的靶向酶构成酶激活前药系统,具有显着的抗肿瘤功效。

无毒的药物可以通过输入肿瘤部位的外源酶(ADEPT)或肿瘤细胞表达的酶(GDEPT)相互作用转化为细胞毒性药物。这两种策略中使用的前药是抗代谢物和烷化剂。

目前利用肿瘤组织自身合成的酶来激活前药,与采用人工引入酶激活前药抗体导向的靶酶前药疗法和基因导向的靶酶前药疗法相比,省去了很多人工添加的步骤。这种疗法显示出巨大的优势。

酶激活的抗肿瘤前药系统可以提高抗肿瘤药物的靶向性,肿瘤组织本身表达的酶激活的前药克服了人工引入外源酶的诸多缺点。是一种具有广阔发展前景的药物。

6.过氧化氢介导的抗肿瘤靶向前药

癌细胞在有氧代谢过程中过量产生一系列活性氧(ROS),包括过氧化氢。 ROS在癌细胞的转移、凋亡、增殖和血管生成中发挥重要作用。

由于与癌细胞转移相关的生长因子减少,细胞内过氧化氢水平升高。研究表明,芳基或苯基的硼酸和硼酯键很容易被过氧化氢破坏。荧光部分用于监测药物在细胞内,特别是在溶酶体中的位置,以反映药物在细胞内的转运情况。

过氧化氢介导的抗肿瘤靶向前药是一种新型治疗诊断前药7。前药7是一种治疗转移性肿瘤的药物,含有硼酸键触发部分、荧光部分和化学治疗成分7-乙基- 10 羟基喜树碱(SN-38)。

研究发现,药物进入体内后,会达到较高水平的过氧化氢。对于癌细胞,过氧化氢会切断硼酸键并释放出 7-乙基-10-羟基喜树碱和荧光部分,从而发挥作用。

7.叶酸受体介导的抗肿瘤靶向前药

叶酸受体(FR)在大多数人类肿瘤细胞表面过度表达,但在正常细胞表面很少表达甚至不表达。

这使得利用FR介导的抗肿瘤药物靶向FR阳性肿瘤细胞成为可能,从而减少传统抗癌药物对正常细胞的毒副作用。此外,前药还用于许多领域。如克服药物用药障碍、增强化学和代谢稳定性、增加口服或局部给药的吸收、增强血脑屏障的通透性、延长作用持续时间、提高生物利用度、减少不良反应等。它已成为一种有效的策略并被广泛接受。


肽聚乙二醇化的类型

肽聚乙二醇化的类型

聚乙二醇(PEG),也称为聚环氧乙烷(PEO),是一种两亲性聚醚,可溶于水和大多数有机溶剂。 PEG及其衍生物是少数经美国FDA认证可用于生物制药产品的聚合物之一。

聚乙二醇化是指PEG聚合物链与靶分子共价连接,通常是小分子化学药物或大生物分子,例如肽、蛋白质、碳水化合物、脂质、寡核苷酸、亲和配体、辅因子、脂质体和其他生物
材料

肽分子作为药物先导化合物在体内的应用受到一定的限制,主要表现在生物体肾小球的过滤作用、蛋白酶的水解破坏以及抗原反应等方面。多肽经过PEG修饰(
PEGylation )后,大大减少了上述三个方面的限制,从而提高了多肽在体内的应用。

聚乙二醇化多肽的主要修饰位点为多肽的N端、C端、Lys的侧链和Cys的硫醇基团。用于修饰的单分散PEG的分子量范围在PEG2~PEG24之间;多分散PEG的分子量范围在PEG500~PEG40K之间。



1.常见单分散PEG修饰介绍(以下结构均可修饰为多肽结构)

NH2-PEG2-CH2COOH
CAS NO.:134978-97-5

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG3-CH2COOH
CAS NO.:134978-99-7

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG4-CH2COOH
CAS 号:195071-49-9

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG6-COOH
CAS 号:905954-28-1

肽聚乙二醇化的类型
N3-PEG6-CH2CH2COOH
CAS号:361189-66-4

肽聚乙二醇化的类型
N3-PEG6-NH2
CAS 号:957486-82-7

肽聚乙二醇化的类型

2.常见多分散PEG修饰介绍(以下结构均可修饰为多肽结构)

mPEG-NH2
CAS 号:80506-64-5

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG-NH2

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG-COOH

肽聚乙二醇化的类型
NH2-PEG-半乳糖

肽聚乙二醇化的类型
mPEG-COOH

肽聚乙二醇化的类型
OH-PEG-COOH

肽聚乙二醇化的类型
COOH-PEG-COOH
CAS
肽聚乙二醇化的类型
NO.:39927-08-7