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唑酮基磷酸胆碱-AAT Bioquest荧光染料

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唑酮基磷酸胆碱价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

唑酮基磷酸胆碱

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 378.32 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：唑酮基磷酸胆碱

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：378.32

溶剂：水

激发波长(nm)：575

发射波长(nm)：590

 

产品介绍

磷酸基团绿色荧光底物 PhosLite 是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸胆碱的染料，甘油磷酸二酯酶可以催化磷酸胆碱从试卤灵磷酸胆碱中释放，并产生高荧光强度的试卤灵，该过程可以使用荧光法和比色吸收法来检测。这种磷酸二酯酶荧光底物能方便用于筛选甘油磷酸二酯酶的抑制剂。它可以用来检测磷脂酶D结合磷酸酶的活性。磷脂酶水解试卤灵磷酸胆碱并产生试卤灵磷酸盐，然后在酸性磷酸酶作用下，生成试卤灵。因此，试卤灵磷酸胆碱也可以用来检测那些不含高水平磷脂酶C的样本内磷脂酶D。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的唑酮基磷酸胆碱。 

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参考文献

Identification of phosphotyrosine mimetic inhibitors of human tyrosyl-DNA phosphodiesterase I by a novel AlphaScreen high-throughput assay
Authors: Marchand C, Lea WA, Jadhav A, Dexheimer TS, Austin CP, Inglese J, Pommier Y, Simeonov A.
Journal: Mol Cancer Ther (2009): 240

Antiplatelet cilostazol, an inhibitor of type III phosphodiesterase, improves swallowing function in patients with a history of stroke
Authors: Teramoto S, Yamamoto H, Yamaguchi Y, Ishii M, Hibi S, Kume H, Ouchi Y.
Journal: J Am Geriatr Soc (2008): 1153

Inhibition of platelet aggregation by olive oil phenols via cAMP-phosphodiesterase
Authors: Dell’Agli M, Maschi O, Galli GV, Fagnani R, Dal Cero E, Caruso D, Bosisio E.
Journal: Br J Nutr (2008): 945

Lipolytic effect of a polyphenolic citrus dry extract of red orange, grapefruit, orange (SINETROL) in human body fat adipocytes. Mechanism of action by inhibition of cAMP-phosphodiesterase (PDE)
Authors: Dallas C, Gerbi A, Tenca G, Juchaux F, Bernard FX.
Journal: Phytomedicine (2008): 783

The effects of a type 4 phosphodiesterase inhibitor and the muscarinic cholinergic antagonist tolterodine tartrate on detrusor overactivity in female rats with bladder outlet obstruction
Authors: Kaiho Y, Nishiguchi J, Kwon DD, Chancellor MB, Arai Y, Snyder PB, Yoshimura N.
Journal: BJU Int (2008): 615

Biochemical characterization of ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase (E-NPP, E.C. 3.1.4.1) from rat heart left ventricle
Authors: Rucker B, Almeida ME, Libermann TA, Zerbini LF, Wink MR, Sarkis JJ.
Journal: Mol Cell Biochem (2007): 247

Characterization of a phosphodiesterase capable of hydrolyzing EA 2192, the most toxic degradation product of the nerve agent VX
Authors: Ghanem E, Li Y, Xu C, Raushel FM.
Journal: Biochemistry (2007): 9032

Characterization of the 2′,3′ cyclic phosphodiesterase activities of Clostridium cellum polynucleotide kinase-phosphatase and bacteriophage lambda phosphatase
Authors: Keppetipola N, Shuman S.
Journal: Nucleic Acids Res (2007): 7721

Selective inhibitors for phosphodiesterase 3 and 4 in antigen-induced increase of cough reflex sensitivity in guinea pigs
Authors: Fujimura M, Liu Q.
Journal: Pulm Pharmacol Ther (2007): 543

Cilostazol, an inhibitor of type 3 phosphodiesterase, produces endothelium-independent vasodilation in pressurized rabbit cerebral penetrating arterioles
Authors: Nakamura K, Ikomi F, Ohhashi T.
Journal: J Vasc Res (2006): 86

Amplite 胆碱定量试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 胆碱定量试剂盒价格 2823
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 胆碱定量试剂盒

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

胆碱及其代谢产物在细胞膜的结构完整性和信号传导以及胆碱能神经传递（乙酰胆碱合成）中起着重要作用。它是通过其代谢产物三甲基甘氨酸参与S-腺苷甲硫氨酸合成途径而获得甲基的主要来源。胆碱缺乏症可能导致肝脏疾病，动脉粥样硬化以及可能的神经系统疾病。尽管胆碱在中枢神经系统中作为乙酰胆碱和膜磷脂酰胆碱的前体具有重要作用，但胆碱在精神疾病中的作用尚未得到研究。该Amplite 胆碱定量试剂盒提供了灵敏的胆碱定量方法之一。该试剂盒使用Amplite Red量化胆碱的浓度，这与胆碱氧化酶介导的酶偶联反应中过氧化氢的产生有关。胆碱的量与在酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。在存在过氧化物酶的情况下，Amplite Red的荧光强度与过氧化氢的形成成比例，该过氧化氢转化为胆碱的浓度。该测定可以容易地用荧光酶标仪读取，或者也可以使用光吸收酶标仪在〜570 nm处读取测定值。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 胆碱定量试剂盒。

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适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备并添加胆碱标准品和/或测试样品（50 µL）
  2. 准备并添加胆碱测定工作溶液（50 µL）
  3. 在室温下孵育15-60分钟
  4. 检测Ex / Em = 540/590nm时的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Amplite Red储备液（250X）：将40 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，应立即使用储备溶液。应将所有剩余的溶液等分，并在-20oC重新冷冻。注意1：避免重复冻融循环。注意2：在存在硫醇（例如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇）的情况下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10 µM。Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2.胆碱标准储备液（50 mM）：将400 µL ddH2O加入胆碱标准液（组分C）的小瓶中，并充分混合。注意：未使用的胆碱储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在-20oC下储存。

 

标准溶液配制

将20 µL胆碱标准储备液（50mM）加到980 µL分析缓冲液（组分D）中，生成1000 µM标准溶液。注意：  稀释的胆碱标准溶液不稳定，应在4小时内使用。将30 µL的1000 µM标准溶液加到970 µL的测定缓冲液（组分D）中以生成30 µM胆碱标准溶液，然后进行1：3系列稀释，以得到10、3、1、0.3、0.1、0.03和0 µM胆碱标准。

 

工作溶液配制

胆碱测定工作溶液：
将5 mL测定缓冲液（组分D）添加到胆碱探针瓶（组分B）中，并充分混合。在胆碱探针中加入20 µL Amplite Red 储备溶液（250X）。

 

实验步骤

表1.黑色96孔板中胆碱标准品和测试样品的布局。CS =胆碱标准（CS1-CS7）；BL =空白对照；TS =测试样品。

BL BL TS TS
CS1 CS1 … …
CS2 CS2 … …
CS3 CS3    
CS4 CS4    
CS5 CS5    
CS6 CS6    
CS7 CS7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
CS1 – CS7 50 µL 连续稀释 (0.03 to 30 µM)
BL 50 µL 缓冲液 (组分 D)
TS 50 µL 测试样品

胆碱测定：

1.如表1和表2所述，将胆碱标准品和含胆碱的测试样品添加到黑色96孔板中。

2.在胆碱标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL胆碱测定工作溶液（表2），使总胆碱测定体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，将25 µL样品和25 µL测定反应混合物加到每个孔中。

3.避光保存，室温下孵育反应15至60分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570 nm / 590-600 nm（Ex / Em = 540/590 nm）处检测荧光强度。

 

图示

Amplite 胆碱定量试剂盒

图1.使用Gemini荧光酶标仪（Molecular Devices）在黑色96孔板上用Amplite 胆碱定量试剂盒获得胆碱剂量响应。 30分钟的孵育时间（n = 3）可以检测到低至100 nM（10皮摩尔/孔）的胆碱。

 

 

参考文献

Structural snapshots of the catalytic cycle of the phosphodiesterase Autotaxin
Authors: Hausmann, Jens and Keune, Willem-Jan and Ederveen, Agnes L Hipgrave and van Zeijl, Leonie and Joosten, Robbie P and Perrakis, Anastassis
Journal: Journal of structural biology (2016)

Real-time multiplex PCR assay for genotyping of three apolipoprotein E alleles and two choline acetyltransferase alleles with three hybridization probes
Authors: Park HD, Park KU, Kim KW, Song J, Chang HE, Heo SR, Lee HJ, Kim JQ.
Journal: Clin Chem Lab Med (2007): 346

[Methyl-3H]-choline incorporation into MCF-7 cells: correlation with proliferation, choline kinase and phospholipase D assay
Authors: Al-Saeedi F, Smith T, Welch A.
Journal: Anticancer Res (2007): 901

A simple and rapid radiochemical choline acetyltransferase (ChAT) assay screening test
Authors: Shiba K, Ogawa K, Kinuya S, Yajima K, Mori H.
Journal: J Neurosci Methods (2006): 98

Rapid high-throughput detection of peroxide with an acridinium-9-carboxamide: a homogeneous chemiluminescent assay for plasma choline
Authors: Adamczyk M, Brashear RJ, Mattingly PG.
Journal: Bioorg Med Chem Lett (2006): 2407

Comparison of different sperm detection methods: amplification of fragment 3 of amelogenin gene (AMY 3), acid phosphatase detection, microcristalline choline assay and microscopic examination
Authors: Rydzewska MJ, Janica J, Pepinski W, Skawronska M, Niemcunowicz-Janica A.
Journal: Rocz Akad Med Bialymst (2000): 63

Rapid assay of choline in foods using microwave hydrolysis and a choline biosensor
Authors: Panfili G, Manzi P, Compagnone D, Scarciglia L, Palleschi G.
Journal: J Agric Food Chem (2000): 3403

Establishment of an efficient enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of human choline acetyltransferase
Authors: Poethke R, Tumani H, Felgenhauer K, Mader M.
Journal: J Neuroimmunol (1997): 206

Assay, Purification, and Partial Characterization of Choline Monooxygenase from Spinach
Authors: Burnet M, Lafontaine PJ, Hanson AD.
Journal: Plant Physiol (1995): 581

Ion-exchange liquid chromatography method with indirect UV detection for the assay of choline in pharmaceutical preparations
Authors: Leroy P, Barbaras M, Colin JL, Nicolas A.
Journal: J Pharm Biomed Anal (1995): 581