Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒，物系统中半胱氨酸的试剂和试剂盒很少，并且在为数不多的商业化半胱氨酸检测试剂盒中存在灵敏度较低、操作较冗长等缺点。Amplite荧光法谷胱甘肽分析试剂盒 *绿色荧光*对样品中谷胱甘肽提供超敏感实验用于定量。这个试剂盒利用专有的无荧光染料通过与硫醇反应产生强荧光。本试剂盒提供敏感的一步荧光方法，并且在100 ul检测体积中能检测到1pmol的半胱氨酸或者谷胱甘肽。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.检测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（cut off= 515 nm）

溶液制备

1.储备溶液

1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液

将50μL 100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。

点击查看细胞样品制备指南

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  –  SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下检测荧光增加。

参考文献

Comparison of different methods to study effects of silver nanoparticles on the pro-and antioxidant status of human keratinocytes and fibroblasts
Authors: Sebastian Ahlberg, Fiorenza Rancan, Matthias Epple, Kateryna Loza, David Höppe, Jürgen Lademann, Annika Vogt, Burkhard Kleuser, Christian Gerecke, Martina C Meinke
Journal: Methods (2016)

相关产品

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测GSH/GSSG比率的试剂盒，谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例（100个测试）

概述

准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite Green原液。

注意：未使用的Thiolite Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过向组分E的瓶中加入200μL的ddH2O制备25X GSSG探针，然后通过按比例混合储备溶液与GAM（来自步骤4）来制备TGAM测定混合物。将未使用的25X GSSG探针储备液等分并保存在-20℃，避免冻融循环。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

6.3如说明书中表1和表2所示，将GSH标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微量培养板中。当要GSH测定时，根据表1仅填充左侧两列（A组）中的孔。跳过第7步，直接进入第8步。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

7.2取200μL10μMGSSG标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSSG标准品。 总GSH标准溶液的浓度应为GSSG标准溶液浓度的两倍，分别为10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563和0μM。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

8.2如果需要总GSH（在还原和氧化状态下）测定，将50μL总GSH测定混合物（来自步骤5的TGAM）加入到GSSG标准，空白对照和测试样品的B组（右）的孔中（来自 步骤6.3）使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

ROS production and glutathione response in keratinocytes after application of β-carotene and VIS/NIR irradiation
Authors: Silke B Lohan, Kristina Vitt, Patrik Scholz, Cornelia M Keck, Martina C Meinke
Journal: Chemico-biological interactions (2017)

Osmotic stress is accompanied by protein glycation in Arabidopsis thaliana
Authors: Gagan Paudel, Tatiana Bilova, Rico Schmidt, Uta Greifenhagen, Robert Berger, Elena Tarakhovskaya, Stefanie Stöckhardt, Gerd Ulrich Balcke, Klaus Humbeck, Wolfgang Brandt
Journal: Journal of Experimental Botany (2016): 6283–6295

Systemic Induction of NO-, Redox-, and cGMP Signaling in the Pumpkin Extrafascicular Phloem upon Local Leaf Wounding
Authors: Frank Gaupels, Alexandra CU Furch, Matthias R Zimmermann, Faxing Chen, Volkhard Kaever, Anja Buhtz, Julia Kehr, Hakan Sarioglu, Karl-Heinz Kogel, Jörg Durner
Journal: Frontiers in plant science (2016)

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Maike K Aurich, Giuseppe Paglia, Ottar Rolfsson, Sigrún Hrafnsdóttir, Manuela Magnúsdóttir, Magdalena M Stefaniak, Bernhard O Palsson, Ronan MT Fleming, Ines Thiele
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

Molecular mechanisms of hyperthermia-induced apoptosis enhanced by withaferin A
Authors: Zheng-Guo Cui, Jin-Lan Piao, Mati UR Rehman, Ryohei Ogawa, Peng Li, Qing-Li Zhao, Takashi Kondo, Hidekuni Inadera
Journal: European journal of pharmacology (2014): 99–107

Cancer & Metabolism
Authors: Gregory LaMonte, Xiaohu Tang, Julia Ling-Yu Chen, Jianli Wu, Chien-Kuang Cornelia Ding, Melissa M Keenan, Carolyn Sangokoya, Hsiu-Ni Kung, Olga Ilkayeva, László G Boros
Journal: (2013)

谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite?荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 520nm处轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例（100个测试）

概述

1.准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

2.添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite™Green原液。

注意：未使用的Thiolite™Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite™Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite™Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过向组分E的瓶中加入200μL的ddH2O制备25X GSSG探针，然后通过按比例混合储备溶液与GAM（来自步骤4）来制备TGAM测定混合物。将未使用的25X GSSG探针储备液等分并保存在-20℃，避免冻融循环。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

6.3如说明书中表1和表2所示，将GSH标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微量培养板中。当需要GSH测定时，根据表1填充左侧两列（A组）中的孔。跳过第7步，直接进入第8步。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

7.2取200μL10μMGSSG标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSSG标准品。 总GSH标准溶液的浓度应为GSSG标准溶液浓度的两倍，分别为10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563和0μM。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

8.2如果需要总GSH（在还原和氧化状态下）测定，将50μL总GSH测定混合物（来自步骤5的TGAM）加入到GSSG标准，空白对照和测试样品的B组（右）的孔中（来自 步骤6.3）使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

ROS production and glutathione response in keratinocytes after application of β-carotene and VIS/NIR irradiation
Authors: Silke B Lohan, Kristina Vitt, Patrik Scholz, Cornelia M Keck, Martina C Meinke
Journal: Chemico-biological interactions (2017)

Osmotic stress is accompanied by protein glycation in Arabidopsis thaliana
Authors: Gagan Paudel, Tatiana Bilova, Rico Schmidt, Uta Greifenhagen, Robert Berger, Elena Tarakhovskaya, Stefanie Stöckhardt, Gerd Ulrich Balcke, Klaus Humbeck, Wolfgang Brandt
Journal: Journal of Experimental Botany (2016): 6283–6295

Systemic Induction of NO-, Redox-, and cGMP Signaling in the Pumpkin Extrafascicular Phloem upon Local Leaf Wounding
Authors: Frank Gaupels, Alexandra CU Furch, Matthias R Zimmermann, Faxing Chen, Volkhard Kaever, Anja Buhtz, Julia Kehr, Hakan Sarioglu, Karl-Heinz Kogel, Jörg Durner
Journal: Frontiers in plant science (2016)

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Maike K Aurich, Giuseppe Paglia, Ottar Rolfsson, Sigrún Hrafnsdóttir, Manuela Magnúsdóttir, Magdalena M Stefaniak, Bernhard O Palsson, Ronan MT Fleming, Ines Thiele
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

Molecular mechanisms of hyperthermia-induced apoptosis enhanced by withaferin A
Authors: Zheng-Guo Cui, Jin-Lan Piao, Mati UR Rehman, Ryohei Ogawa, Peng Li, Qing-Li Zhao, Takashi Kondo, Hidekuni Inadera
Journal: European journal of pharmacology (2014): 99–107

Cancer & Metabolism
Authors: Gregory LaMonte, Xiaohu Tang, Julia Ling-Yu Chen, Jianli Wu, Chien-Kuang Cornelia Ding, Melissa M Keenan, Carolyn Sangokoya, Hsiu-Ni Kung, Olga Ilkayeva, László G Boros
Journal: (2013)

Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的葡萄糖检测的试剂盒，葡萄糖氧化酶是二聚体蛋白质，其催化β-D-葡萄糖氧化成过氧化氢和D-葡糖酸-1,5-内酯，其被水解成葡萄糖酸。它广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。 Amplite 葡萄糖氧化酶检测试剂盒为溶液中葡萄糖氧化酶的测量提供了一种快速而灵敏的方法。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。该套件使用我们的Amplite Red基板，可实现双重可录制模式。荧光信号可以通过荧光酶标仪或吸光度酶标仪轻松读取。使用Amplite 荧光葡萄糖氧化酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至0.05 mU / mL的葡萄糖氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒。 

点击查看光谱

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备GO工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

2.标准溶液

葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶标准溶液稀释到200μL的测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后取10μL1000mU/ mL葡萄糖氧化酶标准溶液，进行1：100稀释，得到10mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液（GOS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余的连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品（GOS6-GOS1）。包括非葡萄糖氧化酶缓冲液作为空白对照。 终的葡萄糖氧化酶浓度应低两倍（即0至5mU / mL）。注意：高浓度的葡萄糖氧化酶可能会因Amplite Red（非荧光产物）的过氧化而导致荧光信号降低。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5 mL葡萄糖氧化酶（GO）工作溶液。 避光。

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.在葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液，使总葡萄糖氧化酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

参考文献

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Lucie Marandel, Philippe Gaudin, Frančois Guéraud, Stéphane Glise, Alexandre Herman, Elisabeth Plagnes-Juan, Vincent Véron, Stéphane Panserat, Jacques Labonne
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276–285

Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Jun-gang Zhao, Kai-ming Ren, Jun Tang
Journal: Tumor Biology (2014): 12305–12315

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Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，单胺氧化酶（MAO）属于核黄素含氨氧化酶，它可以催化单氨的氧化。它存在于许多组织包括肝脏，肠粘膜和神经所含线粒体的外膜上。在人体内有两种类型的MAO：MAO-A和MAO-B。MAO-A在摄取的食物中单氨的代谢过程中非常重要。MAOs在神经递质失活过程扮演者主要角色。在抑郁症，精神分裂症，滥用，注意力不集中，偏头疼或者性早熟疾病中，都伴随着MAO的功能紊乱。Amplite单胺氧化酶检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测血液样本或者其他生物样本内的单胺氧化酶或者氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的活性。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被酶标仪（576nm）检测。Amplite 单胺氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到10U／ml的单胺氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.MAO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MAO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite TM Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

2. HRP股票解决方案（200X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.血浆胺氧化酶（PAO）标准溶液（20 U / mL）：
将125μL测定缓冲液（组分B）加入等离子体胺氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red原液（250X），25μLHRP储备液（200X）和25μLMAO底物（组分D）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL 单胺氧化酶（MAO）工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中PAO标准品和测试样品的布局。 PAO =血浆胺氧化酶标准品（PAO1-PAO7,1至1000mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将血浆胺氧化酶标准品（PAO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔固体黑色微孔板中。对于384孔板，使用25每孔μL试剂代替50μL。

2.在PAO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMAO工作溶液，使总PAO测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLMAO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

参考文献

An Increase in Plasma Homovanillic Acid with Cocoa Extract Consumption Is Associated with the Alleviation of Depressive Symptoms in Overweight or Obese Adults on an Energy Restricted Diet in a Randomized Controlled Trial
Authors: Idoia Ibero-Baraibar, Aurora Perez-Cornago, Maria J Ramirez, J Alfredo Martínez, M Angeles Zulet
Journal: The Journal of nutrition (2016): 897S–904S

相关产品

Amplite 荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，XO（黄嘌呤氧化酶）是一种能催化次黄嘌呤到黄嘌呤或者更进一步催化黄嘌呤到尿酸的酶。在嘌呤的分解代谢扮演着重要角色。XO通常能在肝脏或者空肠检测到。在重度肝损伤，XO释放到血液中，因此血液中XO检测试验可以用来确定肝脏损伤的发生。黄嘌呤尿是一种少见遗传病，缺少XO导致血中高浓度黄嘌呤引起肾衰竭等健康疾病。Amplite XO检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测XO的活性。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。在实验分析种，XO氧化嘌呤碱基，次黄嘌呤、黄嘌呤转变成尿酸或者超氧化物，后者又自发的降解为双氧水。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被酶标仪（576nm）检测。Amplite黄嘌呤氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到0.15mU／ml的XO。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.XO标准品或测试样品（50μL）
2.添加XO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育15-30分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH = 7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH = 7.4。

2. HRP库存解决方案（500X）：
   将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.黄嘌呤氧化酶（XO）标准溶液（1 U / mL）
将200μL测定缓冲液（组分B）加入黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

2.标准溶液

XO标准
将10μL1U/ mL XO标准溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中以制备10mU / mL XO标准溶液（XO7）。 进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的XO标准品（XO6-XO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备溶液（250X），10μLHRP储备溶液（500X）和50μL黄嘌呤（100X，组分D）加入5mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为 5.08mL黄嘌呤氧化酶（XO）工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中XO标准品和测试样品的布局

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将XO标准品（XO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成固体黑色96孔微孔板。对于384孔板，使用25μL 每孔试剂代替50μL。

2.向XO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLXO工作溶液，使总XO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLXO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm监测荧光强度。

参考文献

Xanthine oxidoreductase regulates macrophage IL1β secretion upon NLRP3 inflammasome activation
Authors: Annette Ives, Johji Nomura, Fabio Martinon, Thierry Roger, Didier LeRoy, Jeffrey N Miner, Gregoire Simon, Nathalie Busso, Alexander So
Journal: Nature communications (2015)

Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于乙酰胆碱酯酶的试剂盒,乙酰胆碱酯酶，也就是大家熟知的AChE。它是一种酶，降解（通过其水解活性）神经递质乙酰胆碱，产生胆碱和乙酸基团。它主要被发现在功能性神经肌肉和在神经系统的胆碱突触中，在此，它服务于终端突触传递。AChE具有很高的催化活性，每个AChE分子每秒能降解5000个分子的乙酰胆碱。乙酰胆碱酯酶也在红血细胞膜上被发现，组成Yt血抗原基团。乙酰胆碱酯酶存在多种分子形式，不同的形式具有类似的催化活性，但是他们之间的组装过程以及与细胞表面的黏附存在差异。Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 *绿色荧光* 为检测AChE活性提供了一种灵敏的方法。本试剂盒使用我们的Thiolite Green来对AChE水解乙酰胆碱形成的硫醇胆碱进行定量检测，Thiolite Green的绿色荧光强度与形成的硫醇胆碱成比例关系，因此可以反应AChE的活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备AChE工作溶液（50μL）
2.添加AChE标准品和/或AChE测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Thiolite Green原液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备200X Thiolite Green原液。

1.2 乙酰硫代胆碱原液（500X）：
将0.6mL ddH₂O加入乙酰硫代胆碱（组分C）的小瓶中。

1.3 乙酰胆碱酯酶标准储备液：
将100μL含0.1％BSA的ddH2O加入到乙酰胆碱酯酶标准品（组分D）的小瓶中，制成50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。

2.标准溶液

乙酰胆碱酯酶标准
将20μL的50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液加入到980μL测定缓冲液（组分C）中以产生1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。 取1000 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液以1:10进行，得到100 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液（AS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余的连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（AS6-AS1）。 注意：稀释的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

将10μL乙酰硫代胆碱储备溶液（500X）和25μLThiolite Green储备溶液（200X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL乙酰胆碱酯酶（AChE）工作溶液。 注意：AChE不稳定，需要在30分钟内使用，避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中乙酰胆碱酯酶标准品和测试样品的布局。 AS =乙酰胆碱酯酶标准品（AS1-AS7,0.01至100mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备乙酰胆碱酯酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向乙酰胆碱酯酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLAChE工作溶液，使总乙酰胆碱酯酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAChE工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 490 / 520nm的荧光酶标仪监测荧光增加。

参考文献

Linarin improves the dyskinesia recovery in Alzheimer’s disease zebrafish by inhibiting the acetylcholinesterase activity
Authors: Hongye Pan, Jinghui Zhang, Yangyang Wang, Keke Cui, Yueting Cao, Longhu Wang, Yongjiang Wu
Journal: Life Sciences (2019)

Use of high-throughput enzyme-based assay with xenobiotic metabolic capability to evaluate the inhibition of acetylcholinesterase activity by organophosphorous pesticides
Authors: Shuaizhang Li, Jinghua Zhao, Ruili Huang, Michael F Santillo, Keith A Houck, Menghang Xia
Journal: Toxicology in Vitro (2019)

Hepatic vagus nerve regulates Kupffer cell activation via α7 nicotinic acetylcholine receptor in nonalcoholic steatohepatitis
Authors: Takahiro Nishio, Kojiro Taura, Keiko Iwaisako, Yukinori Koyama, Kazutaka Tanabe, Gen Yamamoto, Yukihiro Okuda, Yoshinobu Ikeno, Kenji Yoshino, Yosuke Kasai
Journal: Journal of Gastroenterology (2017): 1–12

Protective Effect of α-Lipoic Acid against α-Cypermethrin-Induced Changes in Rat Cerebellum
Authors: H Elsawy, MA Al-Omair, A Sedky, L Al-Otaibi
Journal: Journal of Chemical Neuroanatomy (2017)

Spirulina maxima Extract Ameliorates Learning and Memory Impairments via Inhibiting GSK-3β Phosphorylation Induced by Intracerebroventricular Injection of Amyloid-β 1–42 in Mice
Authors: Eun-Jeong Koh, Kui-Jin Kim, Ji-Hyeon Song, Jia Choi, Hyeon Yong Lee, Do-Hyung Kang, Ho Jin Heo, Boo-Yong Lee
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2017): 2401

Anethole restores delayed gastric emptying and impaired gastric accommodation in rodents
Authors: Teita Asano, Shuji Aida, Shintaro Suemasu, Tohru Mizushima
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 125–130

Dietary and donepezil modulation of mTOR signaling and neuroinflammation in the brain
Authors: Kalavathi Dasuri, Le Zhang, Sun OK Fernandez Kim, Annadora J Bruce-Keller, Jeffrey N Keller
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease (2016): 274–283

Dissolved organic matter or salts change the bioavailability processes and toxicity of the nanoscale tetravalent lead corrosion product PbO2 to medaka fish
Authors: Chun-Wei Chiang, Ding-Quan Ng, Yi-Pin Lin, Pei-Jen Chen
Journal: Environmental Science & Technology (2016): 11292–11301

Functionalised dihydroazo pyrimidine derivatives from Morita–Baylis–Hillman acetates: synthesis and studies against acetylcholinesterase as its inhibitors
Authors: Eeda Koti Reddy, C Remya, Ayyiliath M Sajith, KV Dileep, C Sadasivan, Shaik Anwar
Journal: RSC Advances (2016): 77431–77439

Gongjin-Dan Enhances Hippocampal Memory in a Mouse Model of Scopolamine-Induced Amnesia
Authors: Jin-Seok Lee, Sung-Shin Hong, Hyeong-Geug Kim, Hye-Won Lee, Won-Yong Kim, Sam-Keun Lee, Chang-Gue Son
Journal: PloS one (2016): e0159823

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