Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，葡萄糖氧化酶是二聚体蛋白质，其催化β-D-葡萄糖氧化成过氧化氢和D-葡糖酸-1,5-内酯，其被水解成葡糖酸。 它广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。 此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。 Amplite 葡萄糖氧化酶检测试剂盒为溶液中葡萄糖氧化酶的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且很容易适应自动化而无需分离步骤。 该试剂盒使用我们的Amplite Red底物，可使用570 nm的吸光度酶标仪进行监测。 使用Amplite 比色葡萄糖氧化酶检测试剂盒，我们检测到低至12.5 mU / mL的葡萄糖氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测OD = 570nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

1.2 HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

1.3 葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖氧化酶（组分D）的小瓶中。

1.4 葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

2.标准溶液

葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶储备溶液稀释到200μL测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后进行1：100连续稀释，然后进行1：2连续稀释，得到连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品，从10 mU / mL至0.156 mU / mL（GOS1 – GOS7）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，制成5 mL工作溶液。

样品分析

表1.透明底96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。

4.用OD = 570nm的吸光度板读数器监测吸光度的增加。

参考文献

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Lucie Marandel, Philippe Gaudin, Frančois Guéraud, Stéphane Glise, Alexandre Herman, Elisabeth Plagnes-Juan, Vincent Véron, Stéphane Panserat, Jacques Labonne
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276–285

Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Jun-gang Zhao, Kai-ming Ren, Jun Tang
Journal: Tumor Biology (2014): 12305–12315

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Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的葡萄糖检测的试剂盒，髓过氧化物酶(MPO)是一类具有过氧化物酶活性的绿色血红素蛋白，大量存在于中性粒细胞和单核细胞中。它可以催化来自细胞毒素酸或者其他中间产物的双氧水或者卤化物反应，在氧依赖性杀死肿瘤细胞和微生物过程扮演着重要的角色。MPO的缺乏症是一种遗传性的酶缺乏，诱发免疫缺陷。因此治疗MPO的抑制剂具有很大的发展前景。Amplite髓过氧化物酶检测试剂盒能提供一种快速灵敏的检测方法来测定溶解状态或者细胞裂解液中的MPO。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。这个试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被吸收酶标仪（576nm）检测到。通过Amplite 荧光髓过氧化物酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到5ng／ml的髓过氧化物酶。本试剂盒可以自动的高通量筛选MPO的抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.MPO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MPO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 H2O2储备溶液（500X，10 mM）：
将10μL的3％H₂O₂（0.88M，组分C）加入870μL的测定缓冲液（组分B）中。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

1.3 髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分B）加入到髓过氧化物酶标准品（组分D）的小瓶中。注意：一个小瓶含有约5 – 10 mU的髓过氧化物酶。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

2.标准溶液

MPO标准
将20μL200mU / mL MPO标准溶液加入380μL测定缓冲液（组分B）中，得到10 mU / mL MPO标准溶液（MPO7）。 取10 mU / mL MPO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的系列稀释MPO标准品（MPO6 – MPO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite 红色储备液（250X）和10μLH2O2（500X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL MPO工作溶液。 避光。

样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。 注意，由于Amplite Red底物（非荧光产物）的过度氧化，高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

1.根据表1和2中提供的布局制备髓过氧化物酶标准品（MPO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向髓过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMPO工作溶液，使总MPO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLMPO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

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Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，谷氨酸氧化酶属于氧化还原酶的一类，特别能对带有CH-NH2基团供氧受体起反应。它是一种能特异催化水中或者氧气中的L-谷氨酸的酶，可以通过氧化脱氨形成酮戊二酸，氨和过氧化氢。Amplite谷氨酸氧化酶荧光检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测溶解状态下或者细胞裂解液中的谷氨酸氧化酶。在分析中，L-谷氨酸可以通过谷氨酸氧化酶被氧化成酮戊二酸、氨或者过氧化氢。L-丙氨酸和L-谷氨酸-丙酮酸也参与了这个转氨酶反应，导致多次循环反应，因此显著的增加双氧水的产出。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测，或者使用酶标仪（576nm）检测。Amplite荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到40U/ml的谷氨酸氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.谷氨酸氧化酶标准品或测试样品（50μL）
2.添加谷氨酸氧化酶工作液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540 / 590nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 HRP库存解决方案（400X）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

1.3 谷氨酸储备溶液（400X）：
将1.0mL ddH 2 O加入到谷氨酸小瓶（组分D）中以制备400X谷氨酸储备溶液。

1.4 谷氨酸氧化酶（GO）标准溶液（150 mU / mL）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到谷氨酸氧化酶标准品（冻干，组分E）的小瓶中以制备150mU / mL谷氨酸氧化酶（GO）标准溶液。

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），12.5μLHRP储备溶液（400X）和12.5μL谷氨酸储备溶液（400X）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL谷氨酸氧化酶工作溶液（GO工作溶液），避光。

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中GO标准品和测试样品的布局。 GO =谷氨酸氧化酶标准品（GO1-GO7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。 较高浓度的GO可能由于Amplite Red（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低

1.根据表1和2中提供的布局制备GO标准品（GO），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向GO标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液，使总GO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Extracellular polymeric substrates of Chlorella vulgaris F1068 weaken stress of cetyltrimethyl ammonium chloride on ammonium uptake
Authors: Feng Li, Yangduo Kuang, Na Liu, Fei Ge
Journal: Science of The Total Environment (2019)

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Amplite 荧光法过氧化氢酶检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢酶的试剂盒过氧化氢酶是一种常见的抗氧化血红素氧化还原酶，几乎在暴露于氧气的所有生物体中存在。酶在过氧化物酶体亚细胞器中浓缩。 过氧化氢是一种ROS，是正常有氧代谢和致病性ROS产生的毒性产物，涉及氧化酶和超氧化物歧化酶反应。 通过防止过量的H2O2积累，过氧化氢酶允许重要的细胞过程产生作为副产物的H2O2安全地发生。

Amplite 荧光过氧化氢酶分析试剂盒为过氧化氢酶活性的测量提供了一种快速而灵敏的方法。它可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。过氧化氢酶与H2O2反应生成水和氧（O2）。Amplite Red还与H2O2反应生成红色荧光产物。因此，荧光强度的降低与过氧化氢酶活性成比例。用于测定的Amplite Red底物实现双重可记录模式。荧光信号可以通过Ex / Em = 540 / 590nm的荧光酶标仪或~576nm的吸光度酶标仪容易地读取。使用Amplite 荧光过氧化氢酶分析试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至30 mU / mL的过氧化氢酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化氢酶检测试剂盒。 

96孔板测定示例

概述

准备过氧化氢酶标准品和/或测试样品（50μL）

加入H₂O₂分析缓冲液（50μL）

在室温下孵育10-30分钟加入过氧化氢酶分析混合物（50μL）

在室温下孵育10-30分钟监测荧光增加 Ex / Em = 540 / 590nm

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1Amplite Red底物储备溶液（200X）：将65μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red小瓶（组分A）中。 应立即使用原液，任何剩余的溶液需要等分并在-20°C冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2100U / mL HRP储备溶液：将200μL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP原液应分成一次性等分试样并储存在-20°C。

1.310mM H₂O₂储备溶液：将10L 3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入870L测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂测定缓冲液：

将5μL10mMH₂O₂储备溶液（来自步骤1.3）加入5mL测定缓冲液（组分C）中。

3.准备连续稀释的过氧化氢酶标准品（0至2 U / mL）：

注意：在硫醇如DTT和β-巯基乙醇存在下，组分A是不稳定的。 硫醇的最终浓度高于10μM将显着降低测定动态范围。 NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能干扰测定。

3.1将2μL1000U / mL过氧化氢酶标准品（组分E）加入1000μL测定缓冲液（组分C）中，得到2U / mL过氧化氢酶标准溶液。

3.2取500μL的2 U / mL过氧化氢酶标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到1,0.5,0.25,0.125,0.062,0.031和0 U / mL连续稀释的过氧化氢酶标准品。

3.3如表2和3中所述，将连续稀释的过氧化氢酶标准品和含过氧化氢酶的测试样品加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.运行过氧化氢酶测定：

4.1将50μLH₂O₂测定缓冲液（来自步骤2）添加到过氧化氢酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3）以使总过氧化氢酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂测定缓冲液。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3根据下表制备测定混合物并避光：

4.4将50μL测定混合物（来自步骤4.3）加入过氧化氢酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总测定体积为150μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL测定混合物。

4.5在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.6使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540±10/590±10nm处的荧光增加（最佳Ex / Em = 540/590）。

注意：也可将板的内容物转移到白色透明底板中，并用吸光度酶标仪在5765nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

In-Vitro and In-Vivo Antioxidant Activity of the Butanolic Extract from the Stem of Ephedra Alte
Authors: Bahaa Al-Trad, Mahmoud A Al-Qudah, Mazhar Al-Zoubi, Riyadh Muhaidat, Janti Qar
Journal: Biomedical and Pharmacology Journal (2018)

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Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。也许H₂O₂生物学有趣的方面是近的报告，即抗体具有将分子氧转化为过氧化氢的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种活性物质将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。

这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的a非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。 

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适用仪器

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂反应混合物：

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（终浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

PPARα-mediated peroxisome induction compensates PPARγ-deficiency in bronchiolar club cells
Authors: Srikanth Karnati, Gani Oruqaj, Harshavardhan Janga, Srinu Tumpara, Claudia Colasante, Paul P Van Veldhoven, Nancy Braverman, Adrian Pilatz, Thomas J Mariani, Eveline Baumgart-Vogt
Journal: PloS one (2018): e0203466

Semaphorin 4D inhibits neutrophil activation and is involved in the pathogenesis of neutrophil-mediated autoimmune vasculitis
Authors: Masayuki Nishide, Satoshi Nojima, Daisuke Ito, Hyota Takamatsu, Shohei Koyama, Sujin Kang, Tetsuya Kimura, Keiko Morimoto, Takashi Hosokawa, Yoshitomo Hayama
Journal: Annals of the Rheumatic Diseases (2017): annrheumdis–2016

Aggravation of brain infarction through an increase in acrolein production and a decrease in glutathione with aging
Authors: Takeshi Uemura, Kenta Watanabe, Misaki Ishibashi, Ryotaro Saiki, Kyoshiro Kuni, Kazuhiro Nishimura, Toshihiko Toida, Keiko Kashiwagi, Kazuei Igarashi
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 630–635

Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
Authors: Lei Rong, Chi Zhang, Qi Lei, Ming-Ming Hu, Jun Feng, Hong-Bing Shu, Yi Liu, Xian-Zheng Zhang
Journal: Regenerative Biomaterials (2016): rbw022

Modification of lignin in sugarcane bagasse by a monocopper hydrogen peroxide-generating oxidase from bifida fusca
Authors: Cheng-Yu Chen, Cheng-Cheng Lee, Hung-Shuan Chen, Chao-Hsun Yang, Shu-Ping Wang, Jyh-Horng Wu, Menghsiao Meng
Journal: Process Biochemistry (2016): 1486–1495

Dopamine-mediated oxidation of methionine 127 in α-synuclein causes cytotoxicity and oligomerization of α-synuclein
Authors: Kazuhiro Nakaso, Naoko Tajima, Satoru Ito, Mari Teraoka, Atsushi Yamashita, Yosuke Horikoshi, Daisuke Kikuchi, Shinsuke Mochida, Kenji Nakashima, Tatsuya Matsura
Journal: PLoS One (2013): e55068

Hydrogen peroxide stimulates the epithelial sodium channel through a phosphatidylinositide 3-kinase-dependent pathway
Authors: He-Ping Ma
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 32444–32453

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Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。也许H₂O₂生物学有趣的方面是近的报告，即抗体具有将分子氧转化为过氧化氢的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种活性物质将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。

这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。

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适用仪器

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂反应混合物：

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（终浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

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