Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒，物系统中半胱氨酸的试剂和试剂盒很少，并且在为数不多的商业化半胱氨酸检测试剂盒中存在灵敏度较低、操作较冗长等缺点。Amplite荧光法谷胱甘肽分析试剂盒 *绿色荧光*对样品中谷胱甘肽提供超敏感实验用于定量。这个试剂盒利用专有的无荧光染料通过与硫醇反应产生强荧光。本试剂盒提供敏感的一步荧光方法，并且在100 ul检测体积中能检测到1pmol的半胱氨酸或者谷胱甘肽。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.检测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（cut off= 515 nm）

溶液制备

1.储备溶液

1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液

将50μL 100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。

点击查看细胞样品制备指南

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  –  SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下检测荧光增加。

参考文献

Comparison of different methods to study effects of silver nanoparticles on the pro-and antioxidant status of human keratinocytes and fibroblasts
Authors: Sebastian Ahlberg, Fiorenza Rancan, Matthias Epple, Kateryna Loza, David Höppe, Jürgen Lademann, Annika Vogt, Burkhard Kleuser, Christian Gerecke, Martina C Meinke
Journal: Methods (2016)

相关产品

Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测GSH/GSSG比率的试剂盒，谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例（100个测试）

概述

准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite Green原液。

注意：未使用的Thiolite Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过向组分E的瓶中加入200μL的ddH2O制备25X GSSG探针，然后通过按比例混合储备溶液与GAM（来自步骤4）来制备TGAM测定混合物。将未使用的25X GSSG探针储备液等分并保存在-20℃，避免冻融循环。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

6.3如说明书中表1和表2所示，将GSH标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微量培养板中。当要GSH测定时，根据表1仅填充左侧两列（A组）中的孔。跳过第7步，直接进入第8步。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

7.2取200μL10μMGSSG标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSSG标准品。 总GSH标准溶液的浓度应为GSSG标准溶液浓度的两倍，分别为10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563和0μM。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

8.2如果需要总GSH（在还原和氧化状态下）测定，将50μL总GSH测定混合物（来自步骤5的TGAM）加入到GSSG标准，空白对照和测试样品的B组（右）的孔中（来自 步骤6.3）使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

ROS production and glutathione response in keratinocytes after application of β-carotene and VIS/NIR irradiation
Authors: Silke B Lohan, Kristina Vitt, Patrik Scholz, Cornelia M Keck, Martina C Meinke
Journal: Chemico-biological interactions (2017)

Osmotic stress is accompanied by protein glycation in Arabidopsis thaliana
Authors: Gagan Paudel, Tatiana Bilova, Rico Schmidt, Uta Greifenhagen, Robert Berger, Elena Tarakhovskaya, Stefanie Stöckhardt, Gerd Ulrich Balcke, Klaus Humbeck, Wolfgang Brandt
Journal: Journal of Experimental Botany (2016): 6283–6295

Systemic Induction of NO-, Redox-, and cGMP Signaling in the Pumpkin Extrafascicular Phloem upon Local Leaf Wounding
Authors: Frank Gaupels, Alexandra CU Furch, Matthias R Zimmermann, Faxing Chen, Volkhard Kaever, Anja Buhtz, Julia Kehr, Hakan Sarioglu, Karl-Heinz Kogel, Jörg Durner
Journal: Frontiers in plant science (2016)

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Maike K Aurich, Giuseppe Paglia, Ottar Rolfsson, Sigrún Hrafnsdóttir, Manuela Magnúsdóttir, Magdalena M Stefaniak, Bernhard O Palsson, Ronan MT Fleming, Ines Thiele
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

Molecular mechanisms of hyperthermia-induced apoptosis enhanced by withaferin A
Authors: Zheng-Guo Cui, Jin-Lan Piao, Mati UR Rehman, Ryohei Ogawa, Peng Li, Qing-Li Zhao, Takashi Kondo, Hidekuni Inadera
Journal: European journal of pharmacology (2014): 99–107

Cancer & Metabolism
Authors: Gregory LaMonte, Xiaohu Tang, Julia Ling-Yu Chen, Jianli Wu, Chien-Kuang Cornelia Ding, Melissa M Keenan, Carolyn Sangokoya, Hsiu-Ni Kung, Olga Ilkayeva, László G Boros
Journal: (2013)

谷胱甘肽是一种含有L-半胱氨酸，L-谷氨酸和甘氨酸的三肽。它是细胞中小的细胞内蛋白质硫醇分子，可防止由活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤。谷胱甘肽以还原（GSH）和氧化（GSSG）状态存在。还原型谷胱甘肽（GSH）是一种主要的组织抗氧化剂，其为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键产生氧化型谷胱甘肽（GSSG）。谷胱甘肽还原酶（GR）将GSSG再循环到GSH，同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（β-NADPH2）。在健康细胞中，超过90％的谷胱甘肽总量为还原型（GSH）。当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG积累并且GSSG与GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化应激的指标。监测生物样品中还原和氧化的GSH对于评估细胞和组织对氧化和自由基介导的细胞损伤的氧化还原和状态是必不可少的。

有很多试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的硫醇。但是，大多数市场上的试剂盒都缺乏灵敏度或者含有繁琐操作。我们的Amplite?荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比值分析试剂盒提供了一种超灵敏的分析方法，可定量分析样品中的GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，与GSH反应后变为强荧光。使用一步荧光法，该试剂盒可在100μL测定体积（10 nM）中检测少至1皮摩尔的GSH或GSSG。该测定可以以在96孔或384孔微量滴定板下进行实验，并且容易适应自动化而无需分离步骤。其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 520nm处轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例（100个测试）

概述

1.准备Thiolite 绿色反应混合物（50μL）

2.添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10至60分钟监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备GSH标准储备液：

将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSH标准储备溶液。

注意：未使用的GSH标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备GSSG标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入到GSSG标准品（组分F）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）GSSG标准储备溶液。

注意：未使用的GSSG标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备100X Thiolite Green原液：

将100μLDMSO（组分D）加入小瓶硫醇石绿（组分A）中以制备100X Thiolite™Green原液。

注意：未使用的Thiolite™Green原液应分成单次使用的等分试样，保存在-20℃，避免光照。

4.准备GSH分析混合物（GAM）：

将100μL100XThiolite™Green原液（来自步骤3）加入10mL测定缓冲液（组分B）中，并通过涡旋充分混合。

注1：该GSH测定混合物（GAM）足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液的100X Thiolite™Green原液来制备GSH分析混合物。

5.准备总GSH分析混合物（TGAM）：

将5mL GAM（来自步骤4）加入GSSG探针（组分E）瓶中，并充分混合。

注1：该总GSH测定混合物（TGAM）足以用于一个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注2：或者，可以通过向组分E的瓶中加入200μL的ddH2O制备25X GSSG探针，然后通过按比例混合储备溶液与GAM（来自步骤4）来制备TGAM测定混合物。将未使用的25X GSSG探针储备液等分并保存在-20℃，避免冻融循环。

6.准备连续稀释的GSH标准品（0至5μM）：

6.1将10μL的GSH标准储备溶液（来自步骤1）加入到990L的测定缓冲液（组分B）中以产生10M（10pmol / L）GSH标准溶液。

注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

6.2取200μL10μMGSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSH标准品。

6.3如说明书中表1和表2所示，将GSH标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微量培养板中。当需要GSH测定时，根据表1填充左侧两列（A组）中的孔。跳过第7步，直接进入第8步。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

7.准备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：

7.1将10μLGSSG标准储备溶液（来自步骤2）加入990L测定缓冲液（组分B）中以产生10μM（10pmol / L）GSSG标准溶液。

注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

7.2取200μL10μMGSSG标准溶液进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563,0.0781和0μM连续稀释的GSSG标准品。 总GSH标准溶液的浓度应为GSSG标准溶液浓度的两倍，分别为10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.1563和0μM。

7.3如说明书中表1和2所示，将GSSG标准品和含有GSH的测试样品加入到96孔微孔板中。当需要总GSH测定时，根据A组（左）和B组（右）填充孔。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

8.运行GSH和总GSH测定：

8.1将50μLGSHAssay Mixture（GAM，来自步骤4）加入GSH标准的A组（左），空白对照和测试样品（来自步骤6.3）的孔中，使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGSHAssay混合液。

8.2如果需要总GSH（在还原和氧化状态下）测定，将50μL总GSH测定混合物（来自步骤5的TGAM）加入到GSSG标准，空白对照和测试样品的B组（右）的孔中（来自 步骤6.3）使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL总GSH分析混合物。

8.3在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

8.4用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

ROS production and glutathione response in keratinocytes after application of β-carotene and VIS/NIR irradiation
Authors: Silke B Lohan, Kristina Vitt, Patrik Scholz, Cornelia M Keck, Martina C Meinke
Journal: Chemico-biological interactions (2017)

Osmotic stress is accompanied by protein glycation in Arabidopsis thaliana
Authors: Gagan Paudel, Tatiana Bilova, Rico Schmidt, Uta Greifenhagen, Robert Berger, Elena Tarakhovskaya, Stefanie Stöckhardt, Gerd Ulrich Balcke, Klaus Humbeck, Wolfgang Brandt
Journal: Journal of Experimental Botany (2016): 6283–6295

Systemic Induction of NO-, Redox-, and cGMP Signaling in the Pumpkin Extrafascicular Phloem upon Local Leaf Wounding
Authors: Frank Gaupels, Alexandra CU Furch, Matthias R Zimmermann, Faxing Chen, Volkhard Kaever, Anja Buhtz, Julia Kehr, Hakan Sarioglu, Karl-Heinz Kogel, Jörg Durner
Journal: Frontiers in plant science (2016)

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Maike K Aurich, Giuseppe Paglia, Ottar Rolfsson, Sigrún Hrafnsdóttir, Manuela Magnúsdóttir, Magdalena M Stefaniak, Bernhard O Palsson, Ronan MT Fleming, Ines Thiele
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

Molecular mechanisms of hyperthermia-induced apoptosis enhanced by withaferin A
Authors: Zheng-Guo Cui, Jin-Lan Piao, Mati UR Rehman, Ryohei Ogawa, Peng Li, Qing-Li Zhao, Takashi Kondo, Hidekuni Inadera
Journal: European journal of pharmacology (2014): 99–107

Cancer & Metabolism
Authors: Gregory LaMonte, Xiaohu Tang, Julia Ling-Yu Chen, Jianli Wu, Chien-Kuang Cornelia Ding, Melissa M Keenan, Carolyn Sangokoya, Hsiu-Ni Kung, Olga Ilkayeva, László G Boros
Journal: (2013)

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是具有过氧化物酶活性的酶家族，以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物（例如脂质氢过氧化物）还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此，它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到，改变GPx水平与由许多评论和复杂疾病引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平，作为潜在癌症，糖尿病，神经退行性疾病和心血管疾病的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法，用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽（GSH）氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶（GR）和NADPH再循环至还原态GSH：

R-O-O-H + 2GSH     ^GPx             R-O-H + GSSG + H₂O

GSSG + NADPH + H^{+        GR}           2GSH + NADP⁺

产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。 荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量，其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比，我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定，我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板的测定方案

概述

准备GPx分析混合物（50μL）

添加GPx标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟

加入20μLQuestFluor™NADP探针

添加20μLNAP检测溶液

在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂

溶液在室温孵育30-60分钟，在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光

注意1.为了获得佳效果，强烈建议使用黑色版。

注意2.在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方法

1.制备谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）标准储备液：

将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品（组分A）的小瓶中，制成10U / mL标准储备溶液。

注意：未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

2.准备GPx标准的系列稀释液：

2.1将4μLGPx标准储备溶液（10U / mL，来自步骤1）加入996L 1×PBS缓冲液中，以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。

注意：稀释的GPx标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1：2连续稀释，得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。

2.3如表1和2中所述，将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局

注意：GP = GPx标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL，一式两份加入GP1到GP7的孔中。

3.准备GSH原液（100X）：

将100μlddH2 O加入到GSH小瓶（组分D）中以制备100X GSH储备溶液。

4.准备GPx底物储备液（100X）：

将100μlddH2O加入到基质小瓶（组分E）中以制备100X底物储备溶液。

5.准备GPx分析混合物：

5.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分C）中。

5.2将50μLGSH储备溶液（来自步骤3的组分D），50μL底物储备溶液（组分E，来自步骤4）加入到组分B + C的瓶子中（来自步骤5.1），并充分混合以进行GPx测定 混合物（组分B + C + D + E）。

注1：该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

注2：不建议储存未使用的GPx分析混合物。 可以将未使用的组分B + C混合物（来自步骤5.1）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC，尽管灵敏度可能会降低。

注3; 将未使用的100X GSH储备溶液（来自步骤3）和100X GPx底物储备溶液（来自步骤4）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

6.运行GPx分析：

6.1将50μLGPx测定混合物（来自步骤5.2）加入到GPx标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。

6.2在室温下孵育反应30分钟，避光。

7.运行NADP测定：

7.1将20μLQuestFluor™NADP探针（组分F）加入到GPx标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液（组分G），充分混匀。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针（组分F）和10μLNAP检测溶液（组分G）。

7.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

7.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分H），使总测定体积为155μL/孔，并在室温下孵育30-60分钟，避光。

注意：对于384孔板，添加7.5μL增强剂。

7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。

参考文献

A mechanistic mathematical model for the catalytic action of glutathione peroxidase
Authors: Pannala VR, Bazil JN, Camara AK, Dash RK.
Journal: Free Radic Res (2014): 487

A supramolecular microgel glutathione peroxidase mimic with temperature responsive activity
Authors: Yin Y, Jiao S, Lang C, Liu J.
Journal: Soft Matter (2014): 3374

Basal levels of glutathione peroxidase correlate with onset of radiation induced lung disease in inbred mouse strains
Authors: Kunwar A, Haston CK.
Journal: Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2014): L597

Can recombinant human glutathione peroxidase 1 with high activity be efficiently produced in Escherichia coli
Authors: Guo X, Song J, Yu Y, Wei J.
Journal: Antioxid Redox Signal (2014): 1524

Changes of the Thioredoxin System, Glutathione Peroxidase Activity and Total Antioxidant Capacity in Rat Brain Cortex During Acute Liver Failure: Modulation by L-histidine
Authors: Ruszkiewicz J, Albrecht J.
Journal: Neurochem Res. (2014)

Characterization and structural analysis of human selenium-dependent glutathione peroxidase 4 mutant expressed in Escherichia coli
Authors: Yu Y, Song J, Guo X, Wang S, Yang X, Chen L, Wei J.
Journal: Free Radic Biol Med (2014): 332

Characterization of biochemical properties of a selenium-independent glutathione peroxidase of Cryptosporidium parvum
Authors: Kang JM, Ju HL, Sohn WM, Na BK.
Journal: Parasitology (2014): 570

Clinical significance and therapeutic value of glutathione peroxidase 3 (GPx3) in hepatocellular carcinoma
Authors: Qi X, Ng KT, Lian QZ, Liu XB, Li CX, Geng W, Ling CC, Ma YY, Yeung WH, Tu WW, Fan ST, Lo CM, Man K.
Journal: Oncotarget. (2014)

Construction of a highly stable artificial glutathione peroxidase on a protein nanoring
Authors: Miao L, Zhang X, Si C, Gao Y, Zhao L, Hou C, Shoseyov O, Luo Q, Liu J.
Journal: Org Biomol Chem (2014): 362

Daily rhythms of catalase and glutathione peroxidase expression and activity are endogenously driven in the hippocampus and are modified by a vitamin A-free diet
Authors: Navigatore-Fonzo LS, Delgado SM, Gimenez MS, Anzulovich AC.
Journal: Nutr Neurosci (2014): 21