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Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物

产品参数
Ex (nm) 648 Em (nm) 668
分子量 ~400 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的荧光探针，我们的Amplite IR是一种荧光性过氧化酶底物，与过氧化酶和H2O2反应时，产生近红外荧光。它可以用来检测H2O2和过氧化酶。Amplite IR产生的物质在647nm处具有大吸收峰，同时在647nm处有大发射峰。这种近红外吸收和荧光将检测的本底降至小，这些本底经常由自我吸收和/或生物样品自身的荧光，但是在600nm附近自身光吸收基本没有。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物。 

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适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 640nm
Em： 680nm
cutoff: 650nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.制备100μMAmplite IR 0.8 U / ml的过氧化物酶在磷酸盐缓冲液，并在孔中加入50微升

2.添加H 2 O 2标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育0-30分钟

4.监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光强度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite IR原液：
加入适量无水DMSO，制成10至25 mM Amplite IR原液。

 

2.工作溶液

Amplite IR工作溶液（2X）：
为了在50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液中达到每孔50至100μM的终浓度，在管中制备100至200μM浓度的溶液。每孔需要50μL。 注意：在硫醇如DTT和b-巯基乙醇存在下，Amplite IR不稳定。高于10μM（终浓度）的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽（从GSH中还原）可能会干扰测定。注意：我们建议您每次进行实验时都使用新鲜原液。

 

操作步骤

1.在上清液中进行H2O2测定

1.1将50μL的2X Amplite IR工作溶液（来自步骤1.2）添加到H 2 O 2标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总H2O2测定体积为100μL/孔。注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2XAmplite IR工作溶液。

1.2在室温下孵育反应0至30分钟，避光。

1.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：Amplite IR过氧化物酶底物易于自氧化，因此一旦加入H2O2反应混合物就读取荧光，以提高信噪比。

1.4空白孔中的荧光（仅使用测定缓冲液）用作对照，并从具有H2O2的那些孔的值中减去。

 

2.运行H2O2测定法的细胞：

2.1Amplite IR可用于测量细胞中H2O2的释放。以下是建议的方案，可根据您的具体研究需要进行修改.Dipite IR工作溶液应按步骤1.2制备，但磷酸盐缓冲液应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

2.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要细胞。 注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

2.3加入50微升H2O2反应混合物至细胞的每个孔中，注意：对于384孔板中，添加25μL细胞和25微升H2O2反应混合物倒入每个孔。

2.4在室温下孵育反应0至30分钟，避光。

2.5使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在670nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。 注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

 

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

MitoLite 线粒体近红外荧光探针-AAT Bioquest荧光染料

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MitoLite 线粒体近红外荧光探针价格 1386
产品规格

500 Tests

产品货号

MitoLite 线粒体近红外荧光探针

产品参数
Ex (nm) 658 Em (nm) 691
分子量 N/A 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

MitoLite 线粒体近红外荧光探针是美国AAT Bioquest生产的用于染色线粒体的荧光探针，线粒体是在大多数真核细胞中发现的膜封闭细胞器。线粒体产生大多数细胞中的ATP供应。线粒体除了提供细胞能量外，还参与一系列其他过程，例如信号传导，细胞分化，细胞死亡以及细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与多种人类疾病有关，包括线粒体疾病和心脏功能障碍，并可能在衰老过程中起作用。Mitolite NIR FX690设计用于通过近红外荧光标记活细胞中的线粒体。它可能通过线粒体膜电位梯度选择性地积累在线粒体中。对于低背景和高信噪比至关重要的活细胞和组织成像，它是理想的选择。这种荧光的线粒体指示剂带有细胞保留基团，因此可以在线粒体中保留很长时间。此关键功能大大提高了染色效率。它可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞生存力，细胞凋亡和细胞毒性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MitoLite 线粒体近红外荧光探针。

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实验方案

样品实验方案

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将MitoLite 染料加热至室温。

1.2通过将20 µL的500 X Mitolite 染料稀释到10 mL的Hanks和20 mm Hepes缓冲液或您选择的缓冲液（HBSS）中来制备染料工作液。

注1：20 µL Mitolite 染料足以用于一块96孔板。 分装并在<-15℃下存储未使用的MitoLite 染料原液。 避免光照，并避免重复的冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的浓度因具体应用而异。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

 

2.准备和染色细胞：

2.1对于贴壁细胞：a）在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上生长细胞。 当细胞达到所需的汇合度时，添加等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。 b）将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。 C）更换染料加载溶液，或用预热的（37°C）汉克斯和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液（例如，含有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（尤其对于cat＃22679） ）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d）。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞未充分染色的情况下积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000 rpm离心细胞5分钟，以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的（37°C）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。更换染料加载溶液或用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如具有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（特别是对于cat＃22679）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注1：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞似乎未充分染色的情况下积累。

注2：悬浮细胞可以附着在已经用BDCell-Tak®（BD Biosciences）处理过并被染色为贴壁细胞的盖玻片上（参见步骤2.1）。

 

参考文献

Co-delivery of VP-16 and Bcl-2-targeted antisense on PEG-grafted oMWCNTs for synergistic in vitro anti-cancer effects in non-small and small cell lung cancer
Authors: Zbynek Heger, Hana Polanska, Sona Krizkova, Jan Balvan, Martina Raudenska, Simona Dostalova, Amitava Moulick, Michal Masarik, Vojtech Adam
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2017): 131–140

Inhibition of heme oxygenase-1 enhances the chemosensitivity of laryngeal squamous cell cancer Hep-2 cells to cisplatin
Authors: Xin Lv, Dong-mei Song, Ying-hao Niu, Bao-shan Wang
Journal: Apoptosis (2016): 489–501

Effective two-photon excited photodynamic therapy of xenograft tumors sensitized by water-soluble bis (arylidene) cycloalkanone photosensitizers
Authors: Qianli Zou, Hongyou Zhao, Yuxia Zhao, Yanyan Fang, Defu Chen, Jie Ren, Xiaopu Wang, Ying Wang, Ying Gu, Feipeng Wu
Journal: Journal of medicinal chemistry (2015): 7949–7958

Melatonin promotes adipogenesis and mitochondrial biogenesis in 3T3-L1 preadipocytes
Authors: Hisashi Kato, Goki Tanaka, Shinya Masuda, Junetsu Ogasawara, Takuya Sakurai, Takako Kizaki, Hideki Ohno, Tetsuya Izawa
Journal: Journal of Pineal Research (2015): 267–275

 

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MitoLite 线粒体蓝色荧光探针 Cat#22674
MitoLite 线粒体绿色荧光探针 Cat#22685
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Tide Fluor 8酸 近红外发射-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Tide Fluor 8酸 近红外发射 价格 2823
产品规格

10 mg

产品货号

Tide Fluor 8酸 近红外发射

产品参数
Ex (nm) 785 Em (nm) 801
分子量 1057.10 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Tide Fluor 8WS（TF8WS）系列具有与IRDye 800相似的光谱特性。它们的荧光在pH值为3到11时不受pH值的影响。这些特性使这种新型染料家族对pH敏感的测定更加稳定。 在某些情况下，TF7标记的肽和核苷酸比IRDye 800标记的肽和核苷酸具有更强的荧光性和更高的光稳定性。与我们的Tide Quencher™8WS（TQ8WS）配对，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子 信标具有增强的灵敏度和稳定性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 8酸  近红外发射 。 

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实验方案

用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据自己的具体实验对该实验方案进行相应调整。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

 

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

2.2注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

 

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

 

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

4.1.4注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.5小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

4.1.6注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

 

使用Tide Fluor 染料标记肽

以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要修改协议，以便通过多个实验为您的特定应用程序提供佳结果。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

 

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

 

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

 

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

 

参考文献

Inhibiting fibronectin polymerization alleviates kidney injury due to ischemia/reperfusion
Authors: Stephanie LK Bowers, Stephanie Davis-Rodriguez, Zachary M Thomas, Valeriia Rudomanova, W Clark Bacon, Alex Beiersdorfer, Qing Ma, Prasad Devarajan, Burns C Blaxall
Journal: American Journal of Physiology-Renal Physiology (2019)

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

 

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Tide Fluor 8胺 近红外发射 价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

Tide Fluor 8胺 近红外发射

产品参数
Ex (nm) 785 Em (nm) 801
分子量 1213.22 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Tide Fluor 8WS（TF8WS）系列具有与IRDye 800相似的光谱特性。它们的荧光在pH值为3到11时不受pH值的影响。这些特性使这种新型染料家族对pH敏感的测定更加稳定。 在某些情况下，TF8WS标记的肽和核苷酸比IRDye 800标记的肽和核苷酸具有更强的荧光性和更高的光稳定性。与我们的Tide Quencher™8WS（TQ8WS）配对，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子。 信标具有增强的灵敏度和稳定性。 该TF8WS产品主要用于标记含有羰基的小分子。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 8胺  近红外发射。 

点击查看光谱

实验方案

用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据自己的具体实验对该实验方案进行相应调整。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

 

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

2.2注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

 

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

 

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

4.1.4注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.5小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

4.1.6注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

 

使用Tide Fluor 染料标记肽

以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要修改协议，以便通过多个实验为您的特定应用程序提供佳结果。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

 

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

 

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

 

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

 

参考文献

Inhibiting fibronectin polymerization alleviates kidney injury due to ischemia/reperfusion
Authors: Stephanie LK Bowers, Stephanie Davis-Rodriguez, Zachary M Thomas, Valeriia Rudomanova, W Clark Bacon, Alex Beiersdorfer, Qing Ma, Prasad Devarajan, Burns C Blaxall
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A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
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Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
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Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
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Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

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