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Azido-Cy5酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Azido-Cy5酪胺价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

Azido-Cy5酪胺

产品参数
Ex (nm) 651 Em (nm) 670
分子量 1030.14 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Azido-Cy5酪酰胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 Azido-Cy5酪胺含有明亮的Cy5，可以使用标准的Cy5滤波片组轻松检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Azido-Cy5酪胺。 

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy5滤波片组
Em： Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy5滤波片组
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/封闭细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

 

操作步骤

        在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液（1000X）加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液（1X）：
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.酪酰胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪酰胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪酰胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪酰胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

 

试剂应用文献

Antibody-Driven Proximity Labeling in Fixed Tissues
Authors: Bar, Daniel Z and Collins, Francis S
Journal: (2019): 73–81

 

参考文献

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161
 
Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326
 
Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100
 
Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46
 
KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75
 
Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175
 
Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750
 
Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63
 
Pitfalls using tyramide signal amplification (TSA) in the mouse gastrointestinal tract: endogenous streptavidin-binding sites lead to false positive staining
Authors: Horling L, Neuhuber WL, Raab M.
Journal: J Neurosci Methods (2012): 124
 
Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

Cy3 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

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Cy3 酪胺价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Cy3 酪胺

产品参数
Ex (nm) 555 Em (nm) 569
分子量 863.96 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cy3酪胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cy3酪胺。 

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片
Em： Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy3/TRITC滤波片
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

操作步骤

        在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液（1000X）加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液（1X）：
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.酪胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

 

参考文献

Tyramide Signal-Amplified Immunofluorescence of MYCN and MYC in Human Tissue Specimens and Cell Line Cultures.
Authors: Schafer, Johanna M and Pietenpol, Jennifer A
Journal: Bio-protocol (2020): e3677
 
Cascade signal amplification for sensitive detection of exosomes by integrating tyramide and surface-initiated enzymatic polymerization.
Authors: Huang, Zhipeng and Lin, Qiuyuan and Yang, Bin and Ye, Xin and Chen, Hui and Weng, Wenhao and Kong, Jilie
Journal: Chemical communications (Cambridge, England) (2020): 12793-12796
 
Detection of Cytokine Receptors Using Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescence.
Authors: Wang, Herui and Pangilinan, Ryan L and Zhu, Yan
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020): 89-97
 
Characterizing the Tumor Immune Microenvironment with Tyramide-Based Multiplex Immunofluorescence.
Authors: Mori, Hidetoshi and Bolen, Jennifer and Schuetter, Louis and Massion, Pierre and Hoyt, Clifford C and VandenBerg, Scott and Esserman, Laura and Borowsky, Alexander D and Campbell, Michael J
Journal: Journal of mammary gland biology and neoplasia (2020): 417-432
 
Procedural Requirements and Recommendations for Multiplex Immunofluorescence Tyramide Signal Amplification Assays to Support Translational Oncology Studies.
Authors: Parra, Edwin Roger and Jiang, Mei and Solis, Luisa and Mino, Barbara and Laberiano, Caddie and Hernandez, Sharia and Gite, Swati and Verma, Anuj and Tetzlaff, Michael and Haymaker, Cara and Tamegnon, Auriole and Rodriguez-Canales, Jaime and Hoyd, Clifford and Bernachez, Chantale and Wistuba, Ignacio
Journal: Cancers (2020)
 
Sensitive Multiplexed Fluorescent In Situ Hybridization Using Enhanced Tyramide Signal Amplification and Its Combination with Immunofluorescent Protein Visualization in Zebrafish.
Authors: Lauter, Gilbert and Söll, Iris and Hauptmann, Giselbert
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020): 397-409
 
Tyramide signal amplification mass spectrometry (TSA-MS) ratio identifies nuclear speckle proteins.
Authors: Dopie, Joseph and Sweredoski, Michael J and Moradian, Annie and Belmont, Andrew S
Journal: The Journal of cell biology (2020)
 
Highly Sensitive Detection of PCV2 Based on Tyramide Signals and GNPL Amplification.
Authors: Zhang, Shouping and Hu, Bin and Xia, Xiaojing and Xu, Yanzhao and Hang, Bolin and Jiang, Jinqing and Hu, Jianhe
Journal: Molecules (Basel, Switzerland) (2019)
 
An ultrasensitive electrochemical immunosensor for procalcitonin detection based on the gold nanoparticles-enhanced tyramide signal amplification strategy.
Authors: Liu, Pei and Li, Chao and Zhang, Ruixuan and Tang, Qing and Wei, Jia and Lu, Yan and Shen, Pingping
Journal: Biosensors & bioelectronics (2019): 543-550
 
A amperometric immunosensor for sensitive detection of circulating tumor cells using a tyramide signal amplification-based signal enhancement system.
Authors: Zhou, Xiaoyan and Li, Yujian and Wu, Haiping and Huang, Wei and Ju, Huangxian and Ding, Shijia
Journal: Biosensors & bioelectronics (2019): 88-94

Cy5 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cy5 酪胺价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Cy5 酪胺

产品参数
Ex (nm) 651 Em (nm) 670
分子量 890.00 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cy5酪酰胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 Cy5酪胺含有明亮的Cy5，可以使用标准的Cy5滤波片组轻松检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cy5酪酰胺。 

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy5滤波片组
Em： Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy5滤波片组
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

操作步骤

        在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液（1000X）加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪酰胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液（1X）：
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.酪酰胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪酰胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪酰胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪酰胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

AF488 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
AF488 酪胺价格 2823
产品规格

200 slides

产品货号

产品参数
Ex (nm) 499 Em (nm) 520
分子量 856.02 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

AF488酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF488酪胺含有明亮的AlexaFluor®488，可以使用标准FITC滤波片组轻松检测（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF488酪胺。 注1：200slides：一管试剂足够200个玻片使用； 注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: FITC滤波片组
Em： FITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: FITC滤波片组
实验方案

染色样品示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，室温下在细胞或组织中5-10分钟

 

操作步骤

        在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。


1.Tyramide原液（200X）：
将100μLDMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存。

2.Tyramide工作溶液（1X）：
将100μLTyramide原液加入20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。
注意：20 mL溶液适用于200次测试。

3.细胞固定和透化
3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。

4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性。 在室温下用PBS冲洗两次。
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.Tyramide标记
5.1为每个样品准备并应用100μLTyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短Tyramide的孵育时间。 您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Tyramide。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像
6.1根据需要对细胞或组织样本进行计数。 AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
6.2使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
6.3使用适当的过滤器组可视化来自Tyramide标签的信号。

 

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

 

参考文献

A amperometric immunosensor for sensitive detection of circulating tumor cells using a tyramide signal amplification-based signal enhancement system
Authors: X. Zhou
Journal: Biosens Bioelectron (2019): 88-94

An ultrasensitive electrochemical immunosensor for procalcitonin detection based on the gold nanoparticles-enhanced tyramide signal amplification strategy
Authors: P. Liu
Journal: Biosens Bioelectron (2019): 543-550

Gold nanoparticle labeling with tyramide signal amplification for highly sensitive detection of alpha fetoprotein in human serum by ICP-MS
Authors: X. Li
Journal: Talanta (2018): 40-46

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification
Authors: A. Jandura
Journal: J Vis Exp (2017): se name=”11070.enl” path=”C:WebsiteReferencesEN Files11070.enl”>11070.enlEndNote3317Jandura, A.Hu, J.Wilk, R.Krause, H. M.The Terrence Donnelly Centre for Cellular and Biomolecular Research, University of Toronto; Department of Molecular Genetics, Uni

Selective Proteomic Proximity Labeling Assay Using Tyramide (SPPLAT): A Quantitative Method for the Proteomic Analysis of Localized Membrane-Bound Protein Clusters
Authors: J. S. Rees
Journal: Curr Protoc Protein Sci (2017): 19 27 1-19 27 18

Droplet-Free Digital Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Based on a Tyramide Signal Amplification System
Authors: K. Akama
Journal: Anal Chem (2016): 7123-9

Selective Proteomic Proximity Labeling Assay Using Tyramide (SPPLAT): A Quantitative Method for the Proteomic Analysis of Localized Membrane-Bound Protein Clusters
Authors: J. S. Rees
Journal: Curr Protoc Protein Sci (2015): 19 27 1-18

Quantum dot-based FRET for sensitive determination of hydrogen peroxide and glucose using tyramide reaction
Authors: X. Huang
Journal: Talanta (2013): 79-84

Gold nanoparticle-enzyme conjugates based FRET for highly sensitive determination of hydrogen peroxide, glucose and uric acid using tyramide reaction
Authors: X. Huang
Journal: Analyst (2012): 3659-66

Filtration-based tyramide amplification technique–a new simple approach for rapid detection of aflatoxin B1
Authors: D. Saha
Journal: Anal Bioanal Chem (2007): 1121-30

AF546 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
AF546 酪胺价格 2823
产品规格

200 slides

产品货号

产品参数
Ex (nm) 561 Em (nm) 572
分子量 1282.88 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

AF532酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF532酪胺含有明亮的AlexaFluor®532，可以使用标准FITC滤波片组轻松检测（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF532酪胺。 注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片组
Em： Cy3/TRITC滤波片组
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化/阻断细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 添加结合HRP的二抗
  4. 准备酪酰胺工作溶液，并在室温下在细胞或组织中涂抹5-10分钟

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：向小瓶中加入100 µL DMSO，并充分混合。 注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1倍）：将100 µL的酪胺储备溶液添加到包含0.003％H2O2的20 mL缓冲液中。注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得佳性能。注意：应立即使用酪胺工作溶液。 注意：20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

  

参考文献

Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161

KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75

Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46

Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100

Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175

Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750

Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63

Development of a near-infrared fluorescence ELISA method using tyramide signal amplification
Authors: Gong H, Cradduck M, Cheung L, Olive DM.
Journal: Anal Biochem (2012): 27

Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

AF594 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
AF594 酪胺价格 2823
产品规格

200 slides

产品货号

产品参数
Ex (nm) 590 Em (nm) 618
分子量 841.95 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

AF594 酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF594酪胺含有明亮的AlexaFluor®594，可以使用标准FITC滤波片组轻松检测（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF594 酪胺。注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片组
Em： Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：向小瓶中加入100 µL DMSO，并充分混合。 注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：将100µL的酪胺储备溶液添加到包含0.003％H2O2的20 mL缓冲液中。注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得佳性能。 注意：应立即使用酪胺工作溶液。 注意：20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

  

参考文献

Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161

KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75

Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46

Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100

Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175

Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750

Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63

Development of a near-infrared fluorescence ELISA method using tyramide signal amplification
Authors: Gong H, Cradduck M, Cheung L, Olive DM.
Journal: Anal Biochem (2012): 27

Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

iFluor 488 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 488 酪胺价格 4245
产品规格

200 slides

产品货号

iFluor 488 酪胺

产品参数
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 531.47 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些过程的敏感性和实用性。乙酰胺信号放大（TSA）已被证明是一种特别通用且功能强大的酶放大技术，具有很高的测定灵敏度。 TSA拥有HRP在低浓度过氧化氢的存在下将标记的含酪胺底物转化为可与HRP或附近的酪氨酸残基共价结合氧化的高反应性自由基的能力。为了实现大程度的IHC检测，酪胺预先标记有荧光团，使用少量的抗体和杂交探针通过每个过氧化物酶标记的多个酪胺底物的更新而产生信号放大并转化为低丰度靶标的超灵敏检测。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的敏感性增强可以提高一抗稀释度，以减少非特异性背景信号，并且可以克服由于固定步骤或目标表达水平低而导致的免疫标记弱的问题。 iFluor 488酪胺包含明亮的iFluor 488，可使用标准Cy3滤波片组轻松检测到。它是AlexaFluor®488酪胺（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）或其他光谱相似的荧光酪胺缀合物或TSA试剂（例如Cy3酪胺）的替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 488 酪胺。注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: FITC滤波片组
Em： FITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片： FITC滤波片组
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备酪胺工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：
将100 µL DMSO加入小瓶中并充分混合。注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：
将100 µL酪胺储备溶液添加到20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得性能。注意：应立即使用Tyramide工作溶液，随用随配。注意： 20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

酪胺标记

1.准备并向每个样品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果观察到非特异性信号，则可以缩短与Tyramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Tyramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

试剂应用文献

NEIL3-deficiency increases gut permeability and contributes to a pro-atherogenic metabolic phenotype
Authors: Karlsen, Tom Rune and Kong, Xiang Yi and Holm, Sverre and Quiles-Jim{‘e}nez, Ana and Dahl, Tuva B and Yang, Kuan and Sagen, Ellen L and Skarpengland, Tonje and S {O}gaard, Jonas D and Holm, Kristian and others,
Journal: Scientific Reports (2021): 1–10
 
CD95/Fas protects triple negative breast cancer from anti-tumor activity of NK cells
Authors: Qadir, Abdul S and Gu{‘e}gan, Jean Philippe and Ginestier, Christophe and Chaibi, Assia and Bessede, Alban and Charafe-Jauffret, Emmanuelle and Macario, Manon and Lavou{‘e}, Vincent and de la Motte Rouge, Thibault and Law, Calvin and others,
Journal: Iscience (2021): 103348
 
Accelerated onset of cnS prion disease in mice co-infected with a gastrointestinal helminth pathogen during the preclinical phase
Authors: Donaldson, David S and Bradford, Barry M and Else, Kathryn J and Mabbott, Neil A
Journal: Scientific reports (2020): 1–17
 
Discrimination of prion strain targeting in the central nervous system via reactive astrocyte heterogeneity in CD44 expression
Authors: Bradford, Barry M and Wijaya, Christianus AW and Mabbott, Neil A
Journal: Frontiers in cellular neuroscience (2019): 411
 

参考文献

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161
 
Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326
 
Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100
 
Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46
 
KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75
 
Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175
 
Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750
 
Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63
 
Pitfalls using tyramide signal amplification (TSA) in the mouse gastrointestinal tract: endogenous streptavidin-binding sites lead to false positive staining
Authors: Horling L, Neuhuber WL, Raab M.
Journal: J Neurosci Methods (2012): 124
 
Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

iFluor 555 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 555 酪胺价格 4245
产品规格

200 Slides

产品货号

iFluor 555 酪胺

产品参数
Ex (nm) 557 Em (nm) 570
分子量 1046.41 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些过程的敏感性和实用性。乙酰胺信号放大（TSA）已被证明是一种特别通用且功能强大的酶放大技术，具有很高的测定灵敏度。 TSA拥有HRP在低浓度过氧化氢的存在下将标记的含酪胺底物转化为可与HRP或附近的酪氨酸残基共价结合氧化的高反应性自由基的能力。为了实现大程度的IHC检测，酪胺预先标记有荧光团，使用少量的抗体和杂交探针通过每个过氧化物酶标记的多个酪胺底物的更新而产生信号放大并转化为低丰度靶标的超灵敏检测。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的敏感性增强可以提高一抗稀释度，以减少非特异性背景信号，并且可以克服由于固定步骤或目标表达水平低而导致的免疫标记弱的问题。 iFluor 555酪胺包含明亮的iFluor 555，可使用标准Cy3滤波片组轻松检测到。它是AlexaFluor®555酪胺（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）或其他光谱相似的荧光酪胺缀合物或TSA试剂（例如Cy3酪胺）的替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 555 酪胺。注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片组
Em： Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明孔板
滤波片： Cy3/TRITC滤波片组
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备酪胺工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：
将100 µL DMSO加入小瓶中并充分混合。注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：
将100 µL酪胺储备溶液添加到20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得性能。注意：应立即使用Tyramide工作溶液，随用随配。注意： 20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

酪胺标记

1.准备并向每个样品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果观察到非特异性信号，则可以缩短与Tyramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Tyramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

iFluor 647 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 647 酪胺价格 4245
产品规格

200 Slides

产品货号

iFluor 647 酪胺

产品参数
Ex (nm) 656 Em (nm) 670
分子量 1092.20 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些过程的敏感性和实用性。乙酰胺信号放大（TSA）已被证明是一种特别通用且功能强大的酶放大技术，具有很高的测定灵敏度。 TSA拥有HRP在低浓度过氧化氢的存在下将标记的含酪胺底物转化为可与HRP或附近的酪氨酸残基共价结合氧化的高反应性自由基的能力。为了实现大程度的IHC检测，酪胺预先标记有荧光团，使用少量的抗体和杂交探针通过每个过氧化物酶标记的多个酪胺底物的更新而产生信号放大并转化为低丰度靶标的超灵敏检测。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的敏感性增强可以提高一抗稀释度，以减少非特异性背景信号，并且可以克服由于固定步骤或目标表达水平低而导致的免疫标记弱的问题。 iFluor 647酪胺包含明亮的iFluor 647，可使用标准Cy3滤波片组轻松检测到。它是AlexaFluor®647酪胺（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）或其他光谱相似的荧光酪胺缀合物或TSA试剂（例如Cy3酪胺）的绝佳替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 647酪胺。注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy5滤波片组
Em： Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明孔板
滤波片： Cy5滤波片组
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备酪胺工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：
将100 µL DMSO加入小瓶中并充分混合。注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：
将100 µL酪胺储备溶液添加到20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得性能。注意：应立即使用Tyramide工作溶液，随用随配。注意： 20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

酪胺标记

1.准备并向每个样品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果观察到非特异性信号，则可以缩短与Tyramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Tyramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

试剂应用文献

Immune-regulating bimetallic metal-organic framework nanoparticles designed for cancer immunotherapy
Authors: Dai, Zan and Wang, Qiaoyun and Tang, Jie and Wu, Min and Li, Haoze and Yang, Yannan and Zhen, Xu and Yu, Chengzhong
Journal: Biomaterials (2022): 121261
 
Site-specific labeling and functional efficiencies of human fibroblast growth Factor-1 with a range of fluorescent Dyes in the flexible N-Terminal region and a rigid $beta$-turn region
Authors: Mohale, Mamello and Gundampati, Ravi Kumar and Kumar, Thallapuranam Krishnaswamy Suresh and Heyes, Colin D
Journal: Analytical biochemistry (2022): 114524
 
SP/NK-1R Axis Promotes Perineural Invasion of Pancreatic Cancer and is Affected by lncRNA LOC389641
Authors: Ji, Tengfei and Ma, Keqiang and Wu, Hongsheng and Cao, Tiansheng
Journal: (2021)
 
Efferocytosis induces macrophage proliferation to help resolve tissue injury
Authors: Gerlach, Brennan D and Ampomah, Patrick B and Yurdagul Jr, Arif and Liu, Chuang and Lauring, Max C and Wang, Xiaobo and Kasikara, Canan and Kong, Na and Shi, Jinjun and Tao, Wei and others,
Journal: Cell metabolism (2021): 2445–2463
 
Enrichment of NPC1-deficient cells with the lipid LBPA stimulates autophagy, improves lysosomal function, and reduces cholesterol storage
Authors: Ilnytska, Olga and Lai, Kimberly and Gorshkov, Kirill and Schultz, Mark L and Tran, Bruce Nguyen and Jeziorek, Maciej and Kunkel, Thaddeus J and Azaria, Ruth D and McLoughlin, Hayley S and Waghalter, Miriam and others,
Journal: Journal of Biological Chemistry (2021)
 
Pharmacological targeting of Sam68 functions in colorectal cancer stem cells
Authors: Masibag, Angelique N and Bergin, Christopher J and Haebe, Joshua R and Zouggar, A{“i}cha and Shah, Muhammad S and Sandouka, Tamara and da Silva, Amanda Mendes and Desrochers, Fran{c{c}}ois M and Fournier-Morin, Aube and Benoit, Yannick D
Journal: Iscience (2021): 103442
 
Influence of particle geometry on gastrointestinal transit and absorption following oral administration
Authors: Li, Dong and Zhuang, Jie and He, Haisheng and Jiang, Sifan and Banerjee, Amrita and Lu, Yi and Wu, Wei and Mitragotri, Samir and Gan, Li and Qi, Jianping
Journal: ACS applied materials & interfaces (2017): 42492–42502
 
参考文献
 
Quantum dot-based FRET for sensitive determination of hydrogen peroxide and glucose using tyramide reaction.
Authors: Huang, Xiangyi and Wang, Jinjie and Liu, Heng and Lan, Tao and Ren, Jicun
Journal: Talanta (2013): 79-84
 
Dual enhancement of triple immunofluorescence using two antibodies from the same species.
Authors: Nakamura, Ayako and Uchihara, Toshiki
Journal: Journal of neuroscience methods (2004): 67-70
 
Rapid detection and enumeration of Naegleria fowleri in surface waters by solid-phase cytometry.
Authors: Pougnard, Claire and Catala, Philippe and Drocourt, Jean-Louis and Legastelois, Stephane and Pernin, Pierre and Pringuez, Emmanuelle and Lebaron, Philippe
Journal: Applied and environmental microbiology (2002): 3102-7
 
Oligonucleotides as hybridization probes to localize phytoplasmas in host plants and insect vectors.
Authors: Webb, D R and Bonfiglioli, R G and Carraro, L and Osler, R and Symons, R H
Journal: Phytopathology (1999): 894-901

生物素Styramide* 生物素酪胺的优异替代品*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
生物素Styramide* 生物素酪胺的优异替代品*价格 5670
产品规格

100 Slides

产品货号

生物素Styramide* 生物素酪胺的优异替代品*

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 769.95 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。生物素Styramide是生物素酪胺的优良替代品，后者广泛用于众所周知的酪胺信号放大（TSA）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的生物素Styramide。注：100slides：一管试剂足够100个玻片使用

 

实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入生物素标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在-20 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H2O2储备溶液：将90 µL的ddH2O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

图示

 

生物素Styramide* 生物素酪胺的优异替代品*

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。
生物素Styramide* 生物素酪胺的优异替代品*

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*价格 5670
产品规格

100 Slides

产品货号

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 840.07 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。DIG Styramide是DIG酪胺的优良替代品，后者广泛用于众所周知的酪胺信号放大（TSA）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的DIG Styramide。注：100slides：一管试剂足够100个玻片使用

实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H2O2储备溶液：将90 µL的ddH2O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

3.Anti-DIG抗体工作溶液：按照相应说明书的步骤调配适当浓度的Anti-DIG抗体缀合物工作溶液。 

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

DIG标记

1.将100 µL二级抗DIG抗体缀合物工作溶液加到于每个样品中，并在室温下孵育60分钟。

2.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

图示

 

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。
DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

DNP Styramide * DNP酪胺的优异替代品*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
DNP Styramide * DNP酪胺的优异替代品*价格 5670
产品规格

100 Slides

产品货号

DNP Styramide * DNP酪胺的优异替代品*

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 575.62 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。DNP Styramide是DNP酪胺的优良替代品，DNP酪胺广泛用于众所周知的酪胺信号放大（TSA）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的DNP Styramide。注：100slides：一管试剂足够100个玻片使用

实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H2O2储备溶液：将90 µL的ddH2O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

3.抗DNP抗体工作溶液：根据所使用的产品的说明书建议调配适当浓度的抗DNP抗体缀合物工作液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

DNP标记

1.将100 µL二级抗DNP抗体缀合物工作溶液添加到每个样品，并在室温下孵育60分钟。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

图示

 

DNP Styramide * DNP酪胺的优异替代品*

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。
DNP Styramide * DNP酪胺的优异替代品*

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

生物素酪胺LS-3500

发表于由

生物素酪胺

简要描述：生物素酪胺，产品编码：LS-3500。品牌：IrisBiotech
Biotin Tyramide
CAS号：41994-02-9
公式：C 1 8 H 2 5 N 3 O 3 S
摩尔质量：363.47 克/摩尔

详细介绍

产品咨询

品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

生物素酪胺，产品编码：LS-3500。品牌：IrisBiotech

生物素酪胺，Biotin Tyramide

产品描述：

用于许多应用的酪胺信号放大试剂，包括免疫组织化学、原位杂交、电子显微镜、ELISA 等。它可以与显色和荧光可视化方法一起使用。它可以添加到任何其他标准 IHC 协议中，并减少其他试剂的使用；通过降低测定方案中其他试剂的滴度来提高信噪比，并在 IHC 和 (F)ISH 应用中实现多目标检测。


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