蛋白酶荧光底物Gly-Pro-AMC是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，Gly-Pro-AMC是用于检测二肽酰多肽酶IV (DPPIV)的高灵敏度荧光底物，一种丝氨酸蛋白酶，能够从倒数第二位上是L-脯氨酸或者L-丙氨酸的多肽上剪切其N末端的二肽酰。DPPIV是表达于多种细胞（包括上皮细胞，内皮细胞和淋巴细胞）表面的多功能蛋白质。它与T细胞活化抗原CD26和腺嘌呤核苷脱氨基酶（腺苷脱氨酶）结合蛋白具有同一性，它以可溶性状态释放于血浆中。CD26/DPPIV的底物包括多种含有脯氨酸的多肽，例如生长因子、趋化因子、神经肽和血管活性肽。DPPIV参与免疫调控，信号转导和细胞凋亡，并且在肿瘤的发展中发挥重要作用。重要的是，DPPIV是II型糖尿病的靶点，由于其作为血清蛋白酶，能够剪切多肽胰高血糖素家族中肠降血糖素，以此调节体内葡糖糖的稳定。研究显示一种DPPIV抑制剂可以增强葡糖糖衰减的耐受力。用带有Gly-Pro-AMC的DPPIV检测是一种简单、快速，灵活的检测法，是理想的高通量筛选方法。与DPPIV检测法相比，这种检测法增强了检测灵敏度，使研究者可以用更少的酶，同时获得恰当的Z值。这种单一性的酶偶联形式使用非常方便，只需要在检测样品中添加一种单一的试剂；在20inm内可以获得大感光值，并且其单一产物非常稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的蛋白酶荧光底物Gly-Pro-AMC。

适用仪器

样品实验方案 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Gly-Pro-AMC：
在DMSO中制成10至25 mM的Gly-Pro-AMC储备溶液，避光。 注意：储备溶液应及时使用； 应将所有未使用的溶液等分，并在-20℃冷冻。注意：避免重复冻融循环，并避免光照。

2.工作溶液

Gly-Pro-AMC：
取出一个小瓶，并用您选择的测定缓冲液（例如50 mM Tris-HCl，pH 7.5，1.0 mM DTT）稀释储备溶液，制成50至100 µM测定溶液。

样品操作及分析

1.将等体积的DPPIV标准品或样品与测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

2.在Ex / Em = 380/500 nm处监测荧光增加。

参考文献

Effects of activated carbon N-acetylcysteine sustained-release microcapsule on dipeptidyl peptidase IV expression in young rats with non-alcoholic fatty liver disease
Authors: Hongping Zhou, Tingting Shi, Jun Yan, Xiaojin Chen, Li Liao, Shiyong Zhao, Hongying Fang, Rangxiao Zhuang
Journal: Experimental and Therapeutic Medicine (2017): 4737–4744

蛋白酶荧光底物Z-Gly-Pro-AMC是美国AAT Bioquest生产的用于Caspase的试剂，Z-Gly-Pro-AMC是用于测定脯氨酸后裂解酶（脯氨酰内肽酶）的荧光底物。 该底物被脯氨酰内肽酶水解，产生高度荧光的7-酰氨基-4-甲基香豆素（AMC）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的蛋白酶荧光底物Z-Gly-Pro-AMC。 

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样品操作及分析

以下协议仅提供指导，应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光，或使用酶标仪监测吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

Antiplasmin-cleaving enzyme is a soluble form of fibroblast activation protein
Authors: Lee KN, Jackson KW, Christiansen VJ, Lee CS, Chun JG, McKee PA.
Journal: Blood (2006): 1397

Substrate-dependent, non-hyperbolic kinetics of pig brain prolyl oligopeptidase and its tight binding inhibition by JTP-4819
Authors: Venalainen JI, Juvonen RO, Forsberg MM, Garcia-Horsman A, Poso A, Wallen EA, Gynther J, Mannisto PT.
Journal: Biochem Pharmacol (2002): 463