Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于黄嘌呤的试剂盒,黄嘌呤氧化酶（XO）是一种催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤的酶，可以进一步催化黄嘌呤氧化成尿酸。它在嘌呤的分解代谢中起重要作用。黄嘌呤氧化酶通常存在于肝脏和空肠中。在严重肝损伤期间，黄嘌呤氧化酶被释放到血液中，因此XO的血液测定是确定肝脏损伤是否已经发生的一种方法。Amplite 比色黄嘌呤氧化酶检测试剂盒为黄嘌呤氧化酶活性的测量提供了一种快速，超灵敏的方法。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。在该测定中，黄嘌呤氧化酶催化嘌呤碱基，次黄嘌呤或黄嘌呤氧化成尿酸和超氧化物，其自发降解为过氧化氢（H₂O₂）。该试剂盒使用我们的Amplite Red基板，使用吸光度酶标仪可以在~570 nm处轻松读取颜色信号。使用Amplite 比色黄嘌呤氧化酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至0.3 mU / mL的黄嘌呤氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加XO标准品和/或测试样品（50μL）
2.准备并添加XO Assay工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在OD比为570 / 610nm时读取吸光度增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意：避免反复冻融循环。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液（pH 7.4）。

1.2 HRP库存解决方案（500X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入HRP小瓶（组分C）中。注意：未使用的HRP储备溶液（500X）应分成一次性使用的等分试样并储存在-20 oC。

1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）原液：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。注意：未使用的XO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

2.标准溶液

黄嘌呤氧化酶标准
将10μL1U/ mL XO储备液加入990μL分析缓冲液（组分B）中，制成10 mU / mL XO标准溶液。进行1：3连续稀释，得到约10,3,1,0.3,0.1， 0.03,0.01和0mU / mL连续稀释的XO标准品。

3.工作溶液

表1.一个透明底96孔微孔板的XO分析工作溶液（2X）

样品分析

表2.在透明底96孔微孔板中的黄嘌呤氧化酶标准品和测试样品的布局。 XOS =黄嘌呤氧化酶标准品（XOS1-XOS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表3.每个孔的试剂组成

注意：黄嘌呤氧化酶标准仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准。

1.如表2和3中所述，将XO标准品和含有XO的测试样品加入白色透明底部微孔板中。

2.将50μLXOAssay工作溶液加入XO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（表2），使总XO测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读数器监测信号强度，OD比为570 / 610nm。

参考文献

Xanthine oxidoreductase regulates macrophage IL1β secretion upon NLRP3 inflammasome activation
Authors: Annette Ives, Johji Nomura, Fabio Martinon, Thierry Roger, Didier LeRoy, Jeffrey N Miner, Gregoire Simon, Nathalie Busso, Alexander So
Journal: Nature communications (2015)

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Amplite 比色法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于乙酰胆碱酯酶检测试剂盒，乙酰胆碱酯酶（AChE）是神经反应和功能重要的酶之一。AChE将神经递质乙酰胆碱（ACh）降解为胆碱和乙酸。它主要见于神经系统的神经肌肉接头和胆碱能神经突触，其活动用于终止突触传递。AChE抑制剂是批准用于阿尔茨海默病（AD）和重症肌无力的关键之一。

我们的Amplite 比色乙酰胆碱酯酶检测试剂盒为检测AChE活性提供了便利的方法。它使用DTNB来量化由血液，细胞提取物和其他溶液中的AChE水解乙酰硫代胆碱产生的硫代胆碱。DTNB加合物的吸收强度用于测量形成的硫代胆碱的量，其与AChE活性成比例。该试剂盒提供比色一步法检测，在100μL检测体积（1 mU / mL）内检测低至0.1 mU AChE，如图1所示。其信号可通过吸光度酶标仪在~410 nm处轻松读取。该试剂盒，可用于持续监控AChE活动。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例

概述

准备AChE反应混合物（50μL）

加入AChE标准品或AChE测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟监测410±5 nm的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.120X DTNB储备溶液：将0.6mL测定缓冲液（组分B）加入到DTNB（组分A）的小瓶中以制备20X DTNB储备溶液。

注意：未使用的DTNB储备溶液应分为单次使用的等分试样。 储存在-20℃并避光。

1.220X乙酰硫代胆碱储备溶液：将0.6mL ddH 2 O加入乙酰硫代胆碱的小瓶中（组分C）。

注意：未使用的20X乙酰硫代胆碱原液应分成一次性等分试样，并在20℃下保存。

1.3乙酰胆碱酯酶储备液：将100μLDdH2O与0.1％BSA加入乙酰胆碱酯酶标准品（组分D）中，制成50单位/ mL乙酰胆碱酯酶储备液。

注意：未使用的乙酰胆碱酯酶原液应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

2.制备乙酰硫代胆碱反应混合物：

根据说明书中表1制备乙酰硫代胆碱反应混合物并避光。

3.准备连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（0至1000 mU / mL）：

3.1将20μL的50单位/ mL乙酰胆碱酯酶储备液（来自步骤1.3）加入到980L的测定缓冲液（组分B）中以产生1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。

注意：稀释的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准品进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品。

3.3如说明书中表2和3中所述，将含有乙酰胆碱酯酶标准品和含乙酰胆碱酯酶的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

4.运行乙酰胆碱酯酶测定：

4.1将50μL乙酰硫代胆碱反应混合物（来自步骤2.1）加入乙酰胆碱酯酶标准品，空白对照和测试样品（见步骤3.3）的每个孔中，使总乙酰胆碱酯酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL乙酰硫代胆碱反应混合物。

4.2在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.3使用吸光度酶标仪在410±5 nm处检测吸光度的增加。

参考文献

Insects in anthelminthics research: Lady beetle-derived harmonine affects survival, reproduction and stem cell proliferation of Schistosoma mansoni
Authors: Josina Kellershohn, Laura Thomas, Arnold Grünweller, Roland K Hartmann, Martin Hardt, Andreas Vilcinskas, Christoph G Grevelding, Simone Haeberlein
Journal: PLoS neglected tropical diseases (2019): e0007240

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Journal: Science of The Total Environment (2018): 512–522

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Journal: Journal of Gastroenterology (2017): 1–12

Protective Effect of α-Lipoic Acid against α-Cypermethrin-Induced Changes in Rat Cerebellum
Authors: H Elsawy, MA Al-Omair, A Sedky, L Al-Otaibi
Journal: Journal of Chemical Neuroanatomy (2017)

Spirulina maxima Extract Ameliorates Learning and Memory Impairments via Inhibiting GSK-3β Phosphorylation Induced by Intracerebroventricular Injection of Amyloid-β 1–42 in Mice
Authors: Eun-Jeong Koh, Kui-Jin Kim, Ji-Hyeon Song, Jia Choi, Hyeon Yong Lee, Do-Hyung Kang, Ho Jin Heo, Boo-Yong Lee
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2017): 2401

Anethole restores delayed gastric emptying and impaired gastric accommodation in rodents
Authors: Teita Asano, Shuji Aida, Shintaro Suemasu, Tohru Mizushima
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 125–130

Dietary and donepezil modulation of mTOR signaling and neuroinflammation in the brain
Authors: Kalavathi Dasuri, Le Zhang, Sun OK Fernandez Kim, Annadora J Bruce-Keller, Jeffrey N Keller
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease (2016): 274–283

Dissolved organic matter or salts change the bioavailability processes and toxicity of the nanoscale tetravalent lead corrosion product PbO2 to medaka fish
Authors: Chun-Wei Chiang, Ding-Quan Ng, Yi-Pin Lin, Pei-Jen Chen
Journal: Environmental Science & Technology (2016): 11292–11301

Functionalised dihydroazo pyrimidine derivatives from Morita–Baylis–Hillman acetates: synthesis and studies against acetylcholinesterase as its inhibitors
Authors: Eeda Koti Reddy, C Remya, Ayyiliath M Sajith, KV Dileep, C Sadasivan, Shaik Anwar
Journal: RSC Advances (2016): 77431–77439

Gongjin-Dan Enhances Hippocampal Memory in a Mouse Model of Scopolamine-Induced Amnesia
Authors: Jin-Seok Lee, Sung-Shin Hong, Hyeong-Geug Kim, Hye-Won Lee, Won-Yong Kim, Sam-Keun Lee, Chang-Gue Son
Journal: PloS one (2016): e0159823

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Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于酶活性的试剂盒，肠激酶（也称为肠肽酶）是由十二指肠壁中的细胞产生的丝氨酸蛋白酶，并且是人和动物消化系统中的关键酶。 肠激酶将胰蛋白酶原转化为其活性形式的胰蛋白酶，导致随后的胰腺消化酶的活化。 肠激酶的缺乏导致肠道消化障碍。 肠激酶的抑制可能通过抑制参与癌变和转移的蛋白酶而具有抗肿瘤作用。 因此，高度选择性和灵敏的肠激酶检测在生物化学应用中起着关键作用。 Amplite 比色肠激酶活性检测试剂盒为定量肠激酶活性提供了一种灵敏的检测方法。 在肠激酶切割后，肠激酶底物可以通过EK Yellow 在吸光度酶标仪中在405nm处检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.用稀释的肠激酶标准品（50μL）制备测试样品
2.加入等体积的肠激酶工作液（50μL）
3.在37°C孵育30-60分钟
4.监测OD增加到405nm

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. EK Yellow 原液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入EK Yellow （组分A）中以制备100X储备溶液。

2.肠激酶底物储备液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入肠激酶底物（组分B）中以制备100X储备溶液。

3.肠激酶标准溶液（10ug / mL）：
将50uL ddH2O + 0.1％BSA加入肠激酶标准小瓶（组分D）中以制备10μg/ mL肠激酶原液。

2.标准溶液

肠激酶标准
将10μL10μg/ mL肠激酶标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分C）中，得到100ng / mL肠激酶溶液（EK7）。 然后在测定缓冲液中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的肠激酶标准品（EK6-EK1）。 注意：EK标准仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准。

3.工作溶液

将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。 注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 配制的工作溶液不稳定，需快速使用。

样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中肠激酶标准品和测试样品的布局。 EK =肠激酶标准品（EK1-EK7,1.56至100ng / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将肠激酶标准品（EK），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底微孔板中。对于384孔板，使用25μL 每孔试剂代替50μL。

2.在肠激酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLEK工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLEK工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育30-60分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为405nm时进行路径检查。

参考文献

Optimization of the fermentation and downstream processes for human enterokinase production in Pichia pastoris
Authors: Melicherova K, Krahulec J, Safranek M, Liskova V, Hopkova D, Szeliova D, Turna J.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol. (2016)

A strategy for fusion expression and preparation of functional glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogue by introducing an enterokinase cleavage site
Authors: Liu Y, Ren L, Ge L, Cui Q, Cao X, Hou Y, Bai F, Bai G.
Journal: Biotechnol Lett (2014): 1675

Characterization of a gene family encoding SEA (sea-urchin sperm protein, enterokinase and agrin)-domain proteins with lectin-like and heme-binding properties from Schistosoma japonicum
Authors: Mbanefo EC, Kikuchi M, Huy NT, Shuaibu MN, Cherif MS, Yu C, Wakao M, Suda Y, Hirayama K.
Journal: PLoS Negl Trop Dis (2014): e2644

Do-it-yourself histidine-tagged bovine enterokinase: a handy member of the protein engineer’s toolbox
Authors: Skala W, Goettig P, Brandstetter H.
Journal: J Biotechnol (2013): 421

Fusion expression and purification of four disulfide-rich peptides reveals enterokinase secondary cleavage sites in animal toxins
Authors: Chen Z, Han S, Cao Z, Wu Y, Zhuo R, Li W.
Journal: Peptides (2013): 145

New strategy for specific activation of recombinant microbial pro-transglutaminase by introducing an enterokinase cleavage site
Authors: Wang K, Wang B, Yang HL, Pan L.
Journal: Biotechnol Lett (2013): 383

Immobilization of enterokinase on magnetic supports for the cleavage of fusion proteins
Authors: Santana SD, Pina AS, Roque AC.
Journal: J Biotechnol (2012): 378

Design and efficient production of bovine enterokinase light chain with higher specificity in E. coli
Authors: Chun H, Joo K, Lee J, Shin HC.
Journal: Biotechnol Lett (2011): 1227

The trail of my studies on glycoproteins from enterokinase to tumor markers
Authors: Yamashina I.
Journal: Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci (2010): 578

Application of immobilized bovine enterokinase in repetitive fusion protein cleavage for the production of mucin 1
Authors: Kubitzki T, Minor D, Mackfeld U, Oldiges M, Noll T, Lutz S.
Journal: Biotechnol J (2009): 1610

Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它参与许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病性血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症相关的生物事件。也许H₂O₂生物学引人入胜的方面是近的报道，抗体有能力将分子氧转化为过氧化氢，从而有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应物种将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。此Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的Amplite IR过氧化物酶底物来定量溶液和细胞提取液中的过氧化氢。在过氧化氢氧化时，无色的Amplite IR产生强烈的蓝色产物，其pH值与pH 4至10无关。现有比色法过氧化氢分析（来自其他供应商）通常具有严重的样品干扰，这些样品干扰是由生物样品的固有吸收。 Amplite IR产品的近红外吸收大限度地减少了测定背景，因为生物样品很少吸收超过600 nm的光。它也可以用于通过酶偶联反应检测各种氧化酶活性。该试剂盒是与HTS液体处理仪器兼容的优化“混合和读取”分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备H₂O₂工作溶液（50μL）
2.添加H₂O₂标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-60分钟
4.监测650 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中。

2.过氧化物酶原液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

3. H₂O₂标准溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中。 注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

H₂O₂标准
将5μL20mM H₂O₂标准溶液加入995μL测定缓冲液（组分C）中，得到100μM H₂O₂标准品（HS7）。 取200μL100μM H₂O₂标准品进行1：2连续稀释，得到 H₂O₂标准品（HS6-HS1）的连续稀释液。

3.工作溶液

将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。 注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 它不稳定，立即使用。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔板中H2O2标准品和测试样品的布局。 HS = H2O2标准品（HS1-HS7,1.563至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.H₂O₂测定上清液反应

1.1根据表1和2中提供的布局制备H2O2标准品（HS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLH₂O₂工作溶液，使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

H₂O₂测定细胞
Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。以下是建议的说明书，可以进行修改以满足特定的研究需求。

除了应使用细胞培养系统中使用的培养基替换测定缓冲液（组分C）外，应按照给定的方式制备H₂O₂细胞工作溶液。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）;或（c）无血清培养基。

在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要细胞。注意：包括阴性对照（单独的培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

向细胞和H₂O₂标准品的每个孔中加入50μL H₂O₂细胞工作溶液，使总H2O2测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂细胞工作溶液，总体积为50μL/孔。

在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

参考文献

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
Journal: Regenerative Therapy (2016): 55–63

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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H₂O₂溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H₂O₂储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

参考文献

Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517

Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414

Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488

Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175

Evidence for free radical formation during the oxidation of 2′-7′-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2′-7′-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873

In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259

Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟至2小时
4.监测发光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 HRP原液（20 U / mL）：
将1mL含有0.1％BSA的PBS加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL含0.1％BSA的PBS中加入1μL20U / mL HRP储备液，得到10 mU / mL HRP标准溶液（PS7）。 然后使用10 mU / mL标准溶液并进行1：2连续稀释以获得剩余的连续稀释的标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将30μL3％稳定的H₂O₂溶液（组分B）加入5mL分析缓冲液（组分A）中以制备HRP工作溶液并避光。 注意：HRP工作溶液在室温下稳定至少8小时，如果避光，不会造成活性损失。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 PS =过氧化物酶标准品（PS1-PS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

4.使用标准光度计监测发光强度。