innovexbio:通用动物 IHC 试剂盒概述
步骤 1：UNI-TRIEVE，水浴检索
使用 60 °C- 70°C 水浴的检索技术
温柔而轻松。无煮沸
标准化回收
一种溶液可回收所有抗体和组织
使用水浴
将脱石蜡载玻片浸入 60-70 °C Uni-Trieve 溶液中 30 分钟。无需冷却期。
第 2 步：背景破坏
肽阻断剂，用于去除包括生物素在内的所有背景
无需抗生物素蛋白封闭/血清封闭或酪蛋白封闭（请勿在动物组织上使用正常血清或含有酪蛋白的封闭剂）在使用一
抗之前与背景破坏剂一起孵育 30 分钟
步骤 3A：STAT-Q 试剂盒（全物种技术）
对所有动物组织/器官进行染色，包括小鼠间 (MOM)。也会对人体组织染色。
10 分钟（中学）、10 分钟。 5 分钟试剂盒
将一抗孵育时间缩短至 30 分钟，最多 1 小时
使用 STAT-Q 染色试剂盒不再需要一抗过夜孵育
步骤 3B：增强洗涤缓冲液
染色量增加 3-4 倍
室温扩增最大限度地减少了高温修复或酶消化的需要
产生高分辨率染色
使用代替 PBS 或 tris 缓冲液在孵育步骤之间进行冲洗.
innovexbio STAT-Q IHC 染色试剂盒特点
STAT-Q 染色试剂盒，可在 1 小时内对所有动物和人类组织、小鼠对小鼠和兔子对兔子进行快速、免洗和无背景 IHC 染色
关于 STAT-Q
STAT-Q 是一种放大的开发的非聚合物技术可对所有物种的组织和抗体进行快速、免洗、无背景的 IHC 染色。 STAT-Q 可对所有人体组织以及所有动物物种组织进行染色，包括小鼠对小鼠、兔对兔和间接物种，如小鼠对山羊、兔对山羊；等，并且没有
DAB AEC 中可用的背景 耐晒红和常红的
功能
人体组织不需要血清或蛋白质封闭。
一抗无需过夜孵育。所有抗体都会在 30 分钟到 1 小时内染色。
人体组织石蜡切片（从原代玻片到封片玻片）的总染色时间仅为 40 分钟。
动物组织的总染色时间为 1.5 小时。
冷冻切片（人体组织）的总染色时间为 15-20 分钟。
免洗，在孵育步骤之间冲洗 1 次 5 秒。
不需要亲和素/生物素封闭。
高度扩增，将 30 分钟的初级孵育时间缩短至 10 分钟。
允许当前一抗的稀释度至少增加 2 倍。
无需重新滴定当前一抗滴度，只需切换到 STAT-Q 染色系统即可。
便宜。
自交货之日起保质期为 2 年
STAT-Q USER FRIENDLY PROTOCOL
总染色时间：人类 35-40 分钟，动物组织和小鼠间 1.5 小时 使用
Innovex 染色系统染色时，无需蛋白质封闭步骤或大量漂洗。
将组织切片与适当的一抗孵育10-30分钟，用PBS或Innovex“信号增强洗涤缓冲液”冲洗一次5秒
用STAT-Q二抗孵育10分钟，用PBS或Innovex冲洗一次“ “信号增强洗涤缓冲液”5 秒
与 HRP 或 Alk phos 标记一起孵育 10 分钟，用 PBS 或 Innovex“信号增强洗涤缓冲液”冲洗一次 5 秒 与
选择的 INNOVEX 底物/色原（AEC 或 DAB 用于 HRP 酶标记）一起孵育、Innovex 固红或常红或其他可用于碱性磷酸酶的底物/显色剂。
用水冲洗、复染并封片。
用于动物组织和小鼠对小鼠、兔对兔染色的 STAT-Q 方案
对于无背景动物组织染色，在应用一抗之前，将所有物种组织与 Innovex Background Buster（产品号 NB306）孵育 15 分钟不同物种，例如鼠对兔、兔对山羊。对于相同物种，例如小鼠对小鼠、兔子对兔子和山羊对山羊，使用背景破坏器孵育 30 分钟。并按照上述协议中的步骤 1 至 6 进行操作。
STAT-Q 试剂盒包括：
STAT-Q 过氧化物酶 (HRP) 多价完整试剂盒（大容量试剂盒染色 800-1500 个载玻片） 用于对小鼠、大鼠和兔一抗进行染色的单染色试剂盒包括：
60 ml STAT-Q 扩增连接抗体，用于对小鼠、大鼠和兔一抗进行染色
60 ml STAT-Q 稳定且聚合过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素，其活性不会随时间的推移而减弱
70 ml 稳定的 AEC 或所选 DAB。
STAT-Q 过氧化物酶多价完整试剂盒（小容量染色剂 200-400 张载玻片）
20 ml STAT-Q 扩增连接抗体，用于染色小鼠、大鼠和兔一抗
20 ml STAT-Q 稳定聚合过氧化物酶 (HRP) 标记，活性不会随时间的推移而减弱
30 ml 稳定的 AEC 或 DAB 选择。
STAT-Q 碱性磷酸盐完整试剂盒（大容量试剂盒可染色 800-1500 张载玻片）
用于对小鼠、大鼠和兔一抗进行染色的单一试剂盒包括：
60 ml STAT-Q 扩增连接抗体，用于染色小鼠、大鼠和兔一抗
60 ml STAT-Q 稳定且扩增的碱性磷酸酶 标签
底物/选择的显色剂，Innovex FAST RED 或常红
STAT-Q 碱性磷酸盐完整试剂盒（小体积染色 200-400 张载玻片）
用于对小鼠和兔一抗进行染色的单一试剂盒包括：
20 ml STAT-Q 扩增连接抗体，用于染色小鼠、大鼠和兔一抗
20 ml STAT-Q 稳定碱性磷酸酶
所选标签底物/显色剂，Innovex FAST RED 或常红
INNOVEX 一抗（经过 IHC 验证）特点
INNOVEX 提供广泛的无背景、短孵育（30 分钟）一抗，保质期为 2 年。适用于石蜡和冰冻组织染色；使用 Innovex 染色试剂盒染色时无需血清或蛋白质封闭。
所有 Innovex 一抗均适用于 IHC 和 IF 的冷冻和石蜡切片染色。
高级功能
无背景
免洗
交货后保质期至少为 2 年
独立于固定：抗体可与所有组织学固定剂一起使用
孵育时间短，使用 Innovex 染色系统仅需 10-20 分钟
7 毫升大小，适用于 95% 的预滴定、即用型-使用抗体，
无需加湿室需要数小时至过夜孵育
所有抗体均经过亲和
纯化自动化兼容
与所有其他染色系统兼容。
成本效益
注：以C结尾的产品编号是浓缩抗体以P 结尾的产品编号是即用型抗体（预先滴定）
hellobio免疫组织化学 (IHC) 实验组织准备
高质量的组织制备对于高质量的免疫组织化学结果绝对必要，因此始终值得花时间确保按照尽可能高的标准进行，以避免令人失望的结果。根据实验要求，组织可能需要新鲜使用或固定。
有时需要在进一步处理或随后的固定之前冷冻组织。如果冷冻不当，可能会形成冰晶，损害细胞结构。通过正确冷冻，这将保持组织的质量，从而最大限度地提高免疫染色成功的机会。
1. 将装有异戊烷的烧杯（长烧杯中至少 500ml）在 -80°C 中或使用干冰预冷至 -42°C 至 -45°C 之间。定期监测温度以确保温度保持在这个范围内。
2. 在冰上使用干净的工具解剖组织。
3. 将纸巾放在铝箔上，并用滤纸除去多余的液体。
4. 将组织（不含铝箔）轻轻浸入异戊烷中。冷冻所需时间取决于组织样本大小，但冷冻成年大鼠大脑大约需要 5 分钟。
5. 在从异戊烷中取出组织之前，预冷镊子。将冷冻组织放入装有软纸巾的预冷管中。
6. 储存于-80°C 直至下次使用。
一般来说，当动物被灌注固定时，可以获得最佳质量的组织切片。该过程涉及先用缓冲液然后用固定剂替换血液，并且其具有高自发荧光。在尝试之前，请确保您的监管制度涵盖了这一点，并获得经验丰富的从业人员的培训。针对啮齿类动物的一般方案是：
1. 通过适当途径过量注射麻醉剂，直至动物没有脚趾捏和眨眼反射但心脏仍在跳动。
2. 打开胸腔，露出心脏，剪断右心房。将针插入左心室，并通过冰冷的 PBS（大鼠约 200ml，小鼠约 15ml）灌注，然后灌注类似体积的 4% 多聚甲醛的 PBS 溶液。
3. 取出大脑/其他器官，放入装有 4% 多聚甲醛的小瓶中，在 4°C 下放置 24 小时。
4. 将组织移入 4°C 含 30% 蔗糖的 PBS 中，直至组织沉入小瓶底部
对于小体积的组织，通常用固定剂孵育组织就足够了，而不是使用灌注固定。然而，这将导致较高的背景，因为血液不会从小毛细血管中去除。
1. 在冰上用干净的工具解剖组织。
2. 用冰冷的 PBS 短暂清洗
3. 将组织放入含 4% 多聚甲醛的 PBS 中，4°C 下放置 24 小时
4. 将组织移入 4°C 含 30% 蔗糖的 PBS 中，直至组织沉入小瓶底部
可以在一系列机器上切割切片，最常见的是低温恒温器和冷冻切片机。机器的选择部分取决于可用性，部分取决于需要切割多厚的部分。检查可用机器的规格是否与所需的截面厚度相匹配。
对于载玻片免疫组织化学，切片可以直接切割到显微镜载玻片上，或者切割到 PBS 中，用于自由浮动免疫组织化学。
切割后，切片可以冷冻以供日后处理：
载玻片安装：让切片干燥后，切片可在 -20°C 至 -80°C 下保存长达一年
自由浮动 将切片转移至冷冻保护剂中，然后在 -20°C 下保存长达一年。
免疫组织化学 (IHC) 故障排除
免疫组织化学是一个漫长的多步骤过程，可能会出现很多问题，并且实验成功需要考虑很多因素。在某些时候，不可避免地会出现问题或不是最佳状态。下面汇总了一些可能导致免疫组织化学结果欠佳的最常见陷阱。
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问题 |
潜在原因 |
建议的解决方案 |
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弱染色或无染色
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抗体浓度过低 |
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抗体不相容性 |
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高背景会模糊信号 |
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膜被透化试剂损坏 |
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抗体不适合 IHC |
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目标蛋白丰度低 |
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固定可能会掩盖目标表位 |
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抗体对组织切片的渗透性较差 |
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通透性不足 |
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与检测系统使用不兼容的二级荧光团 |
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安装后荧光团降解 |
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缓冲区退化 |
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降解的一抗 |
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由于光漂白而损坏荧光团共轭二抗 |
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不兼容的缓冲区 |
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过度固视 |
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多路复用时在通道之间渗透 |
重叠的荧光团激发/发射光谱 |
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成像系统上的激发和发射滤光片不合适 |
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组织形态改变 |
冰伤害 |
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自由浮动部分的粗暴处理 |
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因储存不当而降解 |
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抗原修复过于苛刻 |
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冰冻切片从载玻片上脱落 |
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固定不佳 |
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高背景或非特异性染色
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组织切片中的自荧光分子 |
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非特异性二次结合 |
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一抗浓度过高 |
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二抗浓度过高 |
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抗体纯化不充分 |
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阻挡不足 |
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洗涤不足 |
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一抗与组织切片来自同一物种。 |
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内源酶活性（用于显色检测） |
对于 HRP 结合二抗，使用 0.3% H 2 O 2 10-15 分钟。如果在此浓度下封闭不成功，请考虑增加至 3%。 对于 AP 结合二抗，请使用 2mM 左旋咪唑。
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部分已经干了 |
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底物过多（用于显色检测） |
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信号放大率过高（如果使用生物素化二抗） |
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组织切片厚度 |
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免疫组织化学 (IHC) – 实验方案
免疫组织化学是免疫染色在组织学中的重要应用。它需要使用与生物组织中的这些抗原结合的抗体来特异性检测细胞中的抗原。组织样本通过石蜡包埋或福尔马林固定方法固定，并用抗原修复剂进行预处理。预处理对于通过破坏福尔马林诱导的抗原交联来改善抗原的表达至关重要。然后封闭载玻片以减少背景，并可以通过直接标记或间接测定进行染色。
脱蜡
将载玻片在 60°C 孵育 60 分钟。
在二甲苯中脱蜡 10 分钟，然后再重复一次。
在 100% 酒精中水合 5 分钟，然后在 95% 酒精中水合 5 分钟，然后在 85% 酒精中水合 5 分钟，然后在 75% 酒精中水合 5 分钟。
浸入蒸馏水中5分钟
浸入 TBS（50 mM Tris、100 mM NaCl、pH 7.6）中，放置 5 分钟，然后重复两次。
抗原修复
将 500-2000 ml 10 mM 柠檬酸盐缓冲液 (pH6.0) 在不锈钢高压锅中煮沸。
将载玻片放入染色架中，然后放入高压锅中，确保载玻片充分浸入柠檬酸盐缓冲液中。
3-4 分钟后，当压力指示阀上升时，孵育 1 分钟。
将载玻片自然冷却至室温。
浸入蒸馏水中，放置 5 分钟，重复两次。
将载玻片浸入 TBS 中 5 分钟，然后重复两次。
在室温下将载玻片浸入 3% H2O2（新鲜甲醇中）15 分钟。
用蒸馏水清洗两次，每次5分钟。
用TBS（pH 7.6）洗涤两次，每次5分钟。
一抗染色
用 TBS 中的 3% BSA 稀释一抗。用稀释的一抗覆盖载玻片上的组织切片（每张载玻片使用 50-150 μl）。
37℃孵育30分钟或室温60分钟（最佳孵育时间、孵育温度和抗体稀释度应由各个实验室确定）。
用TBS洗涤两次，每次5分钟。
二抗染色
与 100-200μl 聚合物增强剂一起孵育 37C 孵育 30 分钟
用TBS洗涤3次，每次5分钟。
与 100 200μl 聚合 HRP 一起孵育，并在 37C 下孵育 30 分钟
用TBS洗涤3次，每次5分钟。
加入dAb溶液，孵育3-10分钟（反应进度和最佳时间应根据显微镜确定）。
用蒸馏水清洗2次，每次5分钟。
如果需要，用苏木精复染切片，用蒸馏水清洗。将玻片浸入 0.1% HCl 乙醇中 1-10 秒，用蒸馏水清洗。
95%乙醇脱水1分钟，100%乙醇脱水2×3分钟，二甲苯脱水2×3分钟，盖玻片封固剂。
简要描述：Nanoprobes Enzmet™ IHC/ISH HRP Detection，产品型号：6001‐30ML。150 张载玻片，30 毫升
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | Nanoprobes | 供货周期 | 一个月 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合 |
Nanoprobes Enzmet™ IHC/ISH HRP Detection，产品型号：6001‐30ML。
Nanoprobes Enzmet™ IHC/ISH HRP Detection，用于辣根过氧化物酶的 EnzMet™ 金相底物。专为免疫组织化学 (IHC) 和原位杂交 (ISH) 应用而配制。
EnzMet™ 是我们的金相过氧化物酶底物。用它代替 DAB 或其他有机显色剂，用于蛋白质印迹、原位杂交 (ISH)、免疫组织化学 (IHC)、电子显微镜、相关显微镜、纳米线和生物芯片。
应用
特色应用：蛋白质印迹
原位杂交 (ISH)
免疫组织化学 (IHC)
电子显微镜
光电子相关显微镜
导电阵列生物芯片制造
纳米线
Enzmet 正在拯救生命：Her2 乳腺癌测试
其他纳米探针原位杂交技术
技术帮助：提示和技巧
参考资料：使用 EnzMet™
生物芯片和 EnzMet 发表的论文：Wünscher，2014 年。
产品说明、方法和方案
材料安全数据表
EnzMet（酶金相学）是Nanoprobes 开发的一种新的生物标记和染色方法。它使用具有新型金相底物的靶向酶探针，与传统的显色和荧光底物相比，染色清晰度有了巨大飞跃。
EnzMet™ 已被证明对原位杂交 (ISH)和免疫组织化学 (IHC) 检测高度敏感，在原位杂交 (ISH)中它很容易可视化单个基因的内源拷贝。
它还被用作电检测方法，并为生物芯片制造纳米线。
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上海金畔生物代理Nanoprobes中国的业务，Nanoprobes代理、Nanoprobes上海代理、Nanoprobes华南代理、Nanoprobes华东代理、Nanoprobes华西代理、Nanoprobes华北代理，上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品供应，欲购从速（敬请咨询。）
上海金畔生物科技有限公司
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。