MUP [4-甲基伞形酮磷酸酯]是美国AAT Bioquest生产的荧光素，磷酸酶的荧光底物。它用于检测溶液中的磷酸酶。然而，这种磷酸酶底物不太适合活细胞或连续测定，因为酶产物 MU（4-甲基伞形酮）仅在 pH 值 >10 时发出最大荧光。因此，使用 MUP 检测具有酸性最佳 pH 范围的磷酸酶（例如酸性磷酸酶）也很困难。 AAT Bioquest 提供 MUP Plus，它的开发是为了解决与 MUP 底物相关的 pH 限制。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MUP [4-甲基伞形酮磷酸酯]。 

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磷酸盐底物的测定方案

概述

在Tris缓冲液（50μL）中制备10-50μM磷酸盐

添加磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）

在室温或37℃孵育30至120分钟监测荧光强度

注意：以下是溶液中磷酸酶测定的推荐方案。 该说明仅提供指导，应根据具体需要进行修改。

1.准备工作解决方案：

1.1在溶剂中制备2至10 mM的储备溶液（见说明书中的表）。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注意1：不要使用DMSO，ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐（目录号11629）的原液，因为它可以显著提高分析背景。

注意2：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备2X磷酸盐工作溶液：在实验当天，将底物溶解在溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液（来自步骤1.1）。在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液（pH 8至9）（非磷酸盐缓冲液）中制备10至50μM的2X工作溶液。

2.在上清液中进行磷酸酶测定：

2.1将50μL2X磷酸盐工作溶液（来自步骤1.2）加入磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.2在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

2.3用荧光板读数器检测适当滤光片组（见说明书中的表）的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光（仅用测定缓冲液）用作对照，并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去。

参考文献

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