MycoLight 细菌活力检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌活力的试剂盒，AAT Bioquest的Mycolight 细菌活力检测试剂盒提供革兰氏阳性和阴性细菌细胞中细菌活力的双色荧光检测。该试剂盒使用我们的绿色荧光核酸染色MycoLight Green和红色荧光核酸染色碘化丙啶的混合物。单独使用时，MycoLight Green染色剂通常标记人群中的所有细菌（活的和死的）。相比之下，碘化丙锭仅渗透膜受损的细菌，当存在两种染料时，导致MycoLight Green染色荧光减少。因此，使用MycoLight Green和碘化丙锭染料的适当混合物，具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光，而具有受损膜的死亡或垂死细菌产生红色荧光。 Mycolight 细菌活力检测试剂盒是一种强大的工具，用于监测细菌群体的活力，作为细胞膜完整性的函数。可以在510-530nm（FITC滤光器）和600-660nm（德克萨斯红色滤光器）下荧光测量染色细胞，激发波长为常见的激发光源488nm。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MycoLight 菌活力检测试剂盒。 

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操作方法

溶液配制

染料工作溶液（250X）：
在微量离心管中加入等体积的MycoLight Green（组分A）和碘化丙啶（组分B）并充分混合。 注意：每次准备新鲜的工作溶液。

样品实验方案

1.在任何适当的培养基中培养细菌从对数期培养物中获得健康细菌的结果。在0.85％NaCl或适当的缓冲液中将细菌培养物稀释至~106至108个细胞/ mL。准备足够的悬浮液，为流式细胞仪每次测试提供500μL，或为96孔板提供每次测试100μL。注意：在染色细菌之前去除生长培养基的痕迹。单次洗涤步骤通常足以从细菌悬浮液中除去显着痕量的干扰介质组分。建议不要使用磷酸盐清洗缓冲液，因为它们会降低染色效率。

2.向每mL细菌悬浮液中加入4μL染料工作溶液（250X）。充分混合并在室温下孵育15分钟。避光。

3.可以通过荧光显微镜，荧光酶标仪或流式细胞术分析染色的细菌细胞。

4.来自活细菌和死细菌的荧光可以与任何标准荧光素长通滤光片组同时观察。或者，可以用荧光素和德克萨斯红过滤器组分别观察活的（绿色荧光的）和死的（红色荧光的）细胞。

数据分析

图1.用MycoLight™ 细菌活力检测试剂盒（Cat＃22400）染色的大肠杆菌HST08的荧光图像。 具有完整细胞膜的活细菌显示绿色荧光（左），而具有受损膜的70％酒精杀死的死细菌（右）显示红色荧光。 活的和死的大肠杆菌细菌细胞也在混合群体中可视化（中）。

参考文献

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the BacLight Live/Dead viability assay and other vital dyes
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Monochloramine disinfection kinetics of Nitrosomonas europaea by propidium monoazide quantitative PCR and Live/dead BacLight methods
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Journal: J Microbiol Methods (1999): 77-86

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样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液。
2.准备细菌样品。
3.将细菌样品与MycoLight 520在黑暗中于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟。
4.通过带有FITC通道的流式细胞仪分析样品。

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1MycoLight 520储备液（100X）：
将100 µL DMSO（组分C）加入一小瓶MycoLight 520（组分A）中，制成100X储备液。

样品示例及操作

1.准备细菌样品，浓度范围为106到108个细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液，然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液（组分B）中，以使处理后样品中的细菌浓度与活菌浓度相同。注意：开始治疗之前，请确定细菌培养物的浓度。注意：死细菌可以作为阴性对照，建议使用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.活/死细菌混合物制备示例：混合7种不同比例的细菌悬液，如表1所示，每个样品的总体积为200 µL。

4.将2 µL 100X MycoLight 520储备液加到200 µL Assay Buffer中的细菌样品中。

5.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分钟，或在室温孵育60分钟，以获得最佳染色效果。

6.在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分C）以增加体积。

7.用流式细胞仪通过FITC通道（488/530 nm）监测细菌的荧光。注意：要排除杂物，建议将流式细胞仪的阈值设置为以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。注意：MycoLight 520的效率高度依赖菌株，因此应相应优化染色条件。

表1.混合以达到各种活/死比的活样本和死样本的示例体积

参考文献

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Authors: F. G. Fumuso
Journal: Anim Reprod Sci (2018): 99-106

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样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液
2.准备细菌样品
3.添加MycoLight 520
4.将细菌样品与MycoLight 520信号增强剂在黑暗中于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.通过带有FITC滤光片组的荧光显微镜分析样品

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1MycoLight 520储备液（100X）：
将100 uL DMSO（组分D）添加到MycoLight 520（组分A）小瓶中，制成100X储备液。

样品示例及操作

1.准备细菌样品，浓度范围为10⁶到10⁸个细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分C）中。注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液，然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液（组分C）中，以使处理过的样品中细菌的浓度与活菌浓度相同。注意：开始治疗之前，请确定细菌培养物的浓度。注意：死细菌可以作为阴性对照，建议使用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.将1 µL 100X MycoLight 520储备液和10 µL 10X Signal Enhancer（组分B）加到90 µL的测定缓冲液细菌样品中。

4.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分钟，或在室温孵育60分钟，以获得佳染色效果。

5.使用荧光显微镜通过FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道监控细菌的荧光。注意：相同的方案也可用于酶标仪检测。

参考文献

Raman spectroscopic analysis of Lactobacillus rhamnosus GG in response to dehydration reveals DNA conformation changes
Authors: Myintzu Hlaing, M.; Wood, B.; McNaughton, D.; Ying, D.; Augustin, M. A.
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MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒，AAT Bioquest的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒提供双色荧光检测，通过荧光显微镜观察活细菌和死细菌。MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物，可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后，产生绿色荧光产物并在细菌内积累。相比之下，碘化丙锭是一种红色荧光核酸染色剂，只能穿透受损膜的细菌。因此，使用MycoLight 520和碘化丙锭染料的适当混合物，具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光，而具有受损膜的死细菌产生红色荧光。MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是一种用于对活/死细菌进行成像的强大工具。可以在Ex / Em = 488 / 525nm（FITC滤光器组）和540 / 620nm（TRITC滤光器组）下荧光测量染色细胞，分别用于活细菌和死细菌。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒。 

染色样品示例

概述

1.准备100X MycoLight 520原液
2.准备细菌样本
3.加入MycoLight 520和碘化丙锭
4.将细菌样品与MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜分析样品
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分

操作步骤

1.MycoLight 520原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入MycoLight 520（组分A）的小瓶中。
注意：将储备溶液储存在-20°C，避免光照，反复冻融。

2.制备浓度为10⁶至10⁸个细胞/ mL的细菌样品。 在适当的培养基中将细菌培养到对数晚期。

注意：测量波长= 600 nm（OD600）的细菌培养物的光密度以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养物，OD 600 = 1.0等于8×10⁸个细胞/ ml。

MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的染色细菌的试剂盒，AAT Bioquest的MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒提供了一种新颖的一步荧光测定法，用于确定活菌中的革兰氏菌。革兰氏染色是在临床和研究环境中对细菌进行分类的重要且广泛使用的方法。原始方法涉及很多步骤，例如热固定，两步染色方案，酒精提取和复染。这些步骤可能会导致不一致的染色。 AAT Bioquest的一站式工具包消除了更多步骤，从而克服了出现的问题。该试剂盒使用了荧光标记的伴刀豆球蛋白A（ConA），这是一种凝集素，可选择性地与暴露于革兰氏阳性细菌表面的N-乙酰氨基葡糖结合。当革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌用荧光标记的ConA共轭物染色时，只有革兰氏阳性菌发出红色荧光。染色的细菌可以通过荧光监测。因为与其他现有染料相比，我们试剂盒中使用的荧光标记ConA共轭物显示出更高的亮度和光稳定性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.准备细菌样本
2.准备并添加IF647-ConA
3.在黑暗中于室温下将细菌样品与IF647-ConA孵育5-15分钟
4.去除IF647-ConA染色溶液并重悬于测定缓冲液中
5.使用Cy5滤光片组通过荧光显微镜分析样品

溶液制备

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1IF647-ConA储备溶液（100X）：
向IF647-ConA小瓶（组分A）中加入100 µL测定缓冲液（组分B），并充分混合。 注意：将储备溶液储存在-20ºC，避免光照，并以较小的等分试样储存，以避免重复的冻融循环。

样品示例及操作

1.细菌样品的制备

1.1在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。 准备细菌样品，浓度范围为10⁶到10⁸个细胞/ mL。 注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸细胞/ mL。

1.2通过以10,000 x g离心5分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。

2.染色方案

2.1向100 µL细菌样品中加入1 µL IF647-ConA储备溶液（100X）。

2.2充分混合，然后在室温下于黑暗中孵育5-15分钟。

2.3以10,000 x g离心5分钟，然后除去IF647-ConA染色溶液。

2.4重悬于100 µL分析缓冲液（组分B）中。

2.5使用荧光显微镜通过Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道监控细菌的荧光。 注意：该协议仅提供指导，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景，则可以在成像之前添加一个可选的检测缓冲液（组分B）洗涤步骤。

参考文献

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