随着全球对新冠病毒治疗药物广泛而深入的研究，抗双链RNA抗体成为抗病毒药物研发过程中不可或缺的重要工具。本文综述了一种新冠病毒治疗药物的研发进展，通过利用小鼠抗双链RNA单克隆抗体检测新冠病毒感染后的双链RNA，从而发现了一系列潜在抗病毒药物在抑制SARS-CoV-2及其突变株对细胞感染的有效性。

SARS-CoV-2，俗称COVID-19，是一组正链、单链RNA (ssRNA)病毒，这类病毒还包括丙型肝炎病毒、登革病毒、中东呼吸综合征病毒和西尼罗河病毒。韦伯等人在2006年的一篇论文¹中证明了，被这些正链RNA病毒感染的细胞，在病毒复制过程中会产生双链RNA (dsRNA)，可作为中间体被检测到。SCICONS抗双链RNA抗体J2可检测这种中间体，从而能够确认病毒感染，以及病毒在宿主细胞内的复制。

在一项加拿大和美国的联合研究中，科学家们通过靶向II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP) TMPRSS2阻止COVID-19病毒感染，TMPRSS2是一种蛋白酶，介导COVID-19刺突蛋白的切割，在这项新的靶向治疗方法研究中，J2克隆被用来评估抗病毒化合物的效力，这些抗病毒化合物是通过阻止病毒进入宿主细胞而预防感染的。

Shapira等人，开发了一个新型小分子TMPRSS2抑制剂文库作为潜在的治疗药物²，科研人员用潜在治疗剂在肺上皮细胞系(Calu-3)和人活组织来源的结肠膜上进行预处理，然后感染多种SARS-CoV-2毒株。通过免疫荧光对固定细胞染色，用J2抗体检测双链RNA (J2克隆)和核衣壳蛋白的存在，成功检测到COVID-19感染。通过荧光染色方法监测治疗剂文库中化合物感染减少的百分比，反应剂量分析及进一步研究显示，小分子化合物N-0385是一种纳摩级、广谱的SARS-CoV-2冠状病毒抑制剂，对备受关注的B.1.1.7(英国)和B.1.351(南非)两种变异株仍然有效。在对K18-h ACE2转基因小鼠SARS-CoV-2疾病模型的研究数据表明，在感染早期通过鼻腔给药化合物N-0385，临床效果改善明显，存活率可达100%，而对照组仅为20%。

SCICONS小鼠抗双链RNA单克隆抗体（J2）已成为双链RNA检测的金标准。它可以用于检测多种病毒的双链RNA中间产物，如丙型肝炎病毒、登革病毒、鼻病毒、基孔肯雅病毒、狂犬病毒、脊髓灰质炎病毒、典型猪瘟病毒、雀麦花叶病毒和培养细胞中的病毒，也可以用于石蜡包埋的组织样品检测。更多关于小鼠抗双链RNA抗体J2的信息可在Nordic MUbio公司官网查阅，产品代码为10010200/10010500，为了方便大家查找，小编汇总了SCICONS产品信息表：

SCICONS是一家提供与双链RNA分子杂交的小鼠单克隆抗体的厂家，客户遍布世界很多国家和地区，在美国有超过一半的州都在使用SCICONS的单克隆抗体。SCICONS在1990年便开始利用杂交瘤细胞系生产抗双链RNA（anti-dsRNA）的单克隆抗体，此类抗体的特异性非常强，包括J2、K1和K2小鼠单克隆抗体。SCICONS的客户包括许多研究机构的学者，发表的文章超过200多篇。

SCICONS于2021年4月13日被Nordic-MUbio BV收购，Nordic-Mubio是一家专注于免疫学的研究试剂公司，总部设在荷兰的Susteren，公司拥有广泛的产品组合，可应用于流式细胞术、细胞生物学、免疫学、癌症研究、干细胞等研究领域。

上海金畔是Nordic MUbio品牌中国区一级代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。关注“金畔生物科技”官方公众号，更多海量免疫学产品等您发现！上海金畔生物科技有限公司集结了全球高质量抗体及抗体相关产品和服务供应商，如Nordic-MUbio、Lifespan、MyBioSource、KPL、Everest和Cal Bioreagents等。品牌知名、产品优质、种类齐全，为科研工作者以及生物制品生产企业提供一站式的服务。如对上述产品感兴趣，欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官网www.jinpanbio.cn查询订购。

Reference

1. Weber F ,  Wagner V ,  Rasmussen S B , et al. Weber, F, Wagner, V, Rasmussen, SB, Hartmann, R and Paludan, SR. Double-stranded RNA is produced by positive-strand RNA viruses and DNA viruses but not in detectable amounts by negative-strand RNA viruses. J Virol 80: 5059-5064[J]. Journal of Virology, 2006, 80(10):5059-5064.
2. Shapira T ,  Monreal I A ,  Dion S P , et al. A novel highly potent inhibitor of TMPRSS2-like proteases blocks SARS-CoV-2 variants of concern and is broadly protective against infection and mortality in mice.  2021.

一个大于150-200个碱基对的长链DNA或RNA在98%的甲酰胺中就可以完全变性（常温条件下），但在7M的尿素中却不可以，而且在这种条件下不影响碱基组成和二级结构，可以得到完好的DVA或RNA单链。聚丙烯酰胺凝胶中包含了98%的无水的去离子甲酰胺，加样缓冲液中也包含了甲酰胺，同样的包含了甲酰胺的测序胶是可以用在核酸的测序技术上的，含有40%的甲酰胺就可以克服测序产品二级结构迁移和压缩的问题。

RNA在甲酰胺中的稳定性比在DEPC水好很多，在-20°C的甲酰胺中RNA能够储存至少一年，可以取代在-70°C DEPC水中储存这种方式。

去离子甲酰胺凝胶电泳除了可以应用在核酸杂交实验外，甲酰胺还可以降低DNA双链的解链温度，平均每1%的甲酰胺就可以降低0.6°C ，甲酰胺的较大浓度可以达到50%，随着甲酰胺的增加，杂交过程的温度也会随着降低，另外RNA探针的杂交背景也会减少。

A2156的主要参数：

分子量：45.04 g/mol

CAS＃：75-12-7

熔点：2°C

沸点：210°C

使用浓度：10 – 100 mM

储存条件：室温

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Source Bioscience (Geneservice)与全球多个科研机构（如NIH、NKI、Sanger等）建立合作关系，拥有全球较大的cDNA、基因组、噬菌体展示、microRNA、siRNA、shRNA与MGC收藏库，涉及物种包括人、小鼠、大鼠、牛，以及各种模式动物如线虫、斑马鱼、果蝇、原鸡、爪蟾等。

优势：

超过2000万克隆；

序列经过验证；

质粒制备服务；

快速到货时间。

克隆资料：

CDNA全长或者开放阅读框：（包括IMAGE, MGC, FANTOM库、小片段和者开放阅读框）;

RNA干扰：

RNA干扰（人的微小RNA、短发卡RNA Human 、MISSION 小干扰RNA,线虫 RNAi干扰）。

噬菌体抗体文库：

Human Single Fold scFv Libraries I + J （Tomlinson I+J）

Tomlinson I + J文库有超1000万不同的重组单链抗体基因片段，克隆到噬菌体载体后转化TG1 E. coli cells，通过噬菌体展示技术可获得大量的特异性重组抗体，可用于各种传统的免疫学试验。

Human Domain Antibody Library

Human Domain Antibody Library源自MRC Daniel Christ实验室，基于VH框架（V3-23/D47）通过PCR突变抗原结合部位的高可变区CDR1、CDR2和CDR3区域，从而引入抗体的多样性。Human Domain Antibody Library明显优于Tomlinson I + J 文库，可以通过噬菌体展示技术产生针对任何目的抗原的抗体。该类抗体可用于ELISA, Western blotting, FACS, IHC等免疫学试验。

ATLAS scFV Constructs/full sets

是针对小鼠细胞表面受体280个基因的404个抗原的抗体，这些抗原在 E.coli 或者哺乳动物表达体系中产生，载体构建时引入tri-FLAG 标签、二聚细菌酶、碱性磷酸酶序列，二聚化增加了抗原结合的亲和力。

基因合成：需要及时沟通定制。

基因组：

人（CpG岛、TilePath 细菌人工染色体、最小的基因克隆集合库、人类常用的细菌人工染色体库（RPCI-11））；

线虫（启动子文库、粘粒文库）；
鸡（细菌人工染色体库、CpG岛）；

果蝇粘粒文库；

河豚（细菌人工染色体库、粘粒）；

小鼠 (bMQ 细菌人工染色体库, 细菌人工染色体库 (RPCI-23), 
酵母人工染色体, 粘粒 (strain 129/ola)；

斑马鱼（细菌人工染色体库）；

猪（CpG岛）

Source Bioscience基因组数据集克隆和抗体搜索引擎

优势：直观与快速；

较大的基因与文库的搜索网站，公开发布的的数据中有近2000多万的克隆和15万的抗体。

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RNA探针是指带有标记的能与组织内相对应的核苷酸序列互补结合的一段单链cDNA或cRNA分子。在RNA原位杂交中，不仅要选择适当的探针，而且还要使探针得到有效的标记。近年来非同位素标记探针已有了极大的近步，常用于RNA的非同位素标记技术有生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶和荧光素。

体外转录法制备RNA探针是一种制备与克隆片段序列相同的单链RNA探针的方法。进行体外转录时，先将靶核苷酸序列克隆到含噬菌体转录启动子的载体中，然后在RNA聚合酶的作用下，以DNA为模板，以含有标记的三磷酸苷为原料，对SP6/T7/T3等启动子下游的序列进行转录，而启动子本身并不被转录。将目的DNA插入转录启动子的下游，由于转录反应的特征，会在短期内制备出大量拷贝的RNA。该转录物可通过在转录合成时掺入标记的核苷酸biotin-21-UTP完成。制备成的RNA探针可保存至少1年。

单链RNA探针杂交比DNA探针更有效，这是因为单链RNA不存在自我杂交的问题。而且与DNA探针相比，RNA探针更敏感，这是因为RNA-RNA或RNA-DNA杂合物比DNA-DNA更稳定。Detector™RNA体外转录探针标记试剂盒包括了两个对照：人beta-Actin模板DNA（检测完整性），还有生物素化的定量标准样。

经Detector™RNA体外转录探针标记试剂盒制备的探针可以用以下方法检测：制备后的生物素化探针电泳并被转移到膜上，然后使用无探针的酶标链霉亲和素，加入底物后显色发光。 

Detector™RNA体外转录探针标记试剂盒制备的标记探针可应用于Southern杂交、Northern杂交, mRNA原位杂交等。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对核酸DNA探针标记，KPL有三种生物素标记试剂盒供您选择，分别为随机引物DNA探针标记、PCR DNA探针标记以及反转录RNA探针标记。另外还有多种杂交显色底物及相关产品。如果您对KPL的产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料，或者问询您所感兴趣的产品类型。