SunRed 醋酸 细胞活性检测是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活性检测的试剂盒，酯酶可催化水解SunRed 乙酸盐(SRA)产生Sun Red荧光基团，该荧光基团在633nm处可以被激发，发射光波长在~660nm处。Sun Red荧光基团可以用Cy5滤光片检测，大多数商业荧光仪器中都装有Cy5滤光片。尽管Sun Red在633nm处被激发，~660nm发出红光；但是SRA在633nm处的光吸收很小，在没有红光发射的条件下，这使SRA成为灵敏的NIR（近红外）酯酶底物之一。在流行的荧光色彩应用于其它细胞功能分析时，SRA提供另一种颜色用于可行性细胞的分析。SRA是一个非荧光性的疏水性化合物，它可以通过细胞膜，在细胞内酯酶水解乙酸盐基团作用下，产生高强度荧光的产物Sun Red。Sun Red分子在完整细胞膜结构的细胞内积累至产生足够深的红色荧光，因此可以用作细胞的标签。细胞膜结构不完整或者代谢活性弱的细胞，不能够积累荧光产物，因此不显现深色的红色荧光。SRA可以与绿色荧光染料试剂（例如FITC或者Alexa Fluor 488标记的抗体）结合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的SunRed 醋酸 细胞活性检测。

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.去除培养基
3.添加SunRed 醋酸酯工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
4.在37°C，5％CO2培养箱中孵育1小时
5.用HHBS清洗并更换工作溶液
6.读取Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止640 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 醋酸盐原液（2至10 mM）
准备2至10 mM的SunRed 醋酸盐在DMSO中的储备溶液。 应立即使用原液。

2.工作溶液

SunRed 醋酸盐工作溶液：
在实验前，在含有20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液的1X Hank盐溶液中，以5至10μM制备SunRed 醋酸盐工作溶液。

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样品分析

1.从细胞中取出培养基。

2.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的SunRed 乙酸盐工作溶液。

3.将SunRed 醋酸盐工作溶液板在室温或37°C下孵育1小时，避光。 适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 对于非粘附细胞，建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟。

4.监测Ex / Em = 620 / 660nm处的荧光强度（截止640nm）。

参考文献

Neuropathy target esterase is required for adult vertebrate axon maintenance
Authors: Read DJ, Li Y, Chao MV, Cavanagh JB, Glynn P.
Journal: J Neurosci (2009): 11594

The secreted esterase of group a streptococcus is important for invasive skin infection and dissemination in mice
Authors: Zhu H, Liu M, Sumby P, Lei B.
Journal: Infect Immun (2009): 5225

Application of glutaraldehyde for the staining of esterase-active cells with carboxyfluorescein diacetate
Authors: Morono Y, Takano S, Miyanaga K, Tanji Y, Unno H, Hori K.
Journal: Biotechnol Lett (2004): 379

Evaluation of fitness components in strains of Drosophila mulleri carrying different genotypes for an esterase
Authors: Lourenco MF, Ceron CR, Carareto CM.
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Comparison of two in vitro activation systems for protoxicant organophosphorous esterase inhibitors
Authors: Barber D, Correll L, Ehrich M.
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Determination of growth and lysis kinetics in plant cell suspension cultures from the measurement of esterase release
Authors: Steward N, Martin R, Engasser JM, Goergen JL.
Journal: Biotechnol Bioeng (1999): 114

Purification and properties of an esterase from the yeast Saccharomyces cerevisiae and identification of the encoding gene
Authors: Degrassi G, Uotila L, Klima R, Venturi V.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 3470

Organophosphorus neuropathy target esterase inhibitors selectively block outgrowth of neurite-like and cell processes in cultured cells
Authors: Li W, Casida JE.
Journal: Toxicol Lett (1998): 139

Causes and consequences of esterase 6 enzyme activity variation in pre-adult Drosophila melanogaster
Authors: Oakeshott JG, Saad M, Game AY, Healy MJ.
Journal: Heredity (1994): 160

[Esterase-6 gene-enzyme system and resistance of Drosophila to increased temperature]
Authors: Totskii VN, Eserkepova EV, Dzhan ZU.
Journal: Genetika (1994): 342

磷酸基团近红外荧光染料 SunRed是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸的试剂盒，磷酸酶催化的太阳红磷酸盐（SRP）的水解产生可以用633nm激光激发并且发射~660nm的太阳红荧光团。虽然Sun Red很容易在633 nm处激发，红色发射约为660 nm，但SRP在633 nm处的吸收非常小，没有红色发射，使SRP成为敏感的NIR磷酸酶传感器之一。请不要使用DMSO制备储备溶液，因为它会显着增加分析背景。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的磷酸基团近红外荧光染料 SunRed。 

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.在Tris缓冲液（50μL）中制备并添加10 – 50μMSunRed 磷酸盐
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止640 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 磷酸盐原液：
在无菌水中制备2至10 mM的SunRed 磷酸盐储备液。 注意：应立即使用原液。 注意：不要使用DMSO，ETOH或METH制备储备溶液，因为它会显着增加分析背景。 注意：避光。

2.工作溶液

SunRed 磷酸盐工作溶液（2X）：
在实验当天，将SunRed 磷酸盐固体溶解在无菌H2O中，或在室温下解冻等份的SunRed 磷酸盐储备溶液。 在100 mM Tris缓冲液或pH 8至9的缓冲液中制备10至50μM的2X工作溶液。建议使用SunRed 磷酸盐终浓度5至25μM测定溶液中的碱性磷酸酶活性。

样品分析

1.在碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液。

2.在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

3.用荧光板读数器监测Ex / Em = 620 / 630nm处的荧光增加（在640nm处截止）。

参考文献

DNA condensation induced by cationic surfactant: a viscosimetry and dynamic light scattering study
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Authors: Martin K, Hart C, Liu J, Leung WY, Patton WF.
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Green/red dual fluorescence detection of total protein and alkaline phosphate-conjugated probes on blotting membranes
Authors: Top KP, Hatleberg G, Berggren KN, Ryan D, Kemper C, Haugland RP, Patton WF.
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Characterization of 9H-(1,3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)
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A column centrifugation method for the reconstitution in liposomes of the mitochondrial F0F1 ATP synthase/ATPase
Authors: Vazquez-Contreras E, de Gomez-Puyou MT, Dreyfus G.
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The electrochemical-proton-gradient-activated states of F0F1 ATPase in plant mitochondria as revealed by detergents
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